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《山东农业大学》 2006年
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嗜热毛壳菌热稳定纤维素酶(EGⅡ)的纯化及基因(cbh1、cbh2)的克隆和表达

刘守安  
【摘要】:纤维素是地球上最丰富的碳水化合物质,可被纤维素酶转化成为葡萄糖。具有很大的开发前景。纤维素酶因其在整个领域潜在的应用价值而倍受关注,它可以用于纤维废物的生物转化,可以用于纺织、造纸、洗涤、饲料加工等工业领域,还可以用于酵母和丝状真菌的原生质体制备,进行菌株改良。传统上采用化学方法控制纤维素降解难度大、成本高,对环境污染严重,而纤维素的生物降解有效克服了这些问题,不但提高了资源利用效率,而且增加了经济效益。 嗜热真菌产生的纤维素酶在高温条件下具有高活力和稳定性,并且与中温真菌一样,嗜热真菌产生的各类纤维素酶普遍含有多种类型的组分。嗜热毛壳菌(Chaetomium thermophilum CT2)是一种广泛分布的,生长上限温度较高的一种嗜热真菌,从该菌中已分离了多种嗜热酶,并且证明了其纤维素酶存在多个组分。本研究中C thermophilum CT2在以乳糖为唯一碳源的合成培养基中诱导产生胞外纤维素酶,通过通过硫酸铵沉淀、Phenyl-Sepharose疏水层析、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子层析等步骤获得了凝胶电泳均一的内切β-葡聚糖酶。SDS-PAGE测得所分离纯化酶蛋白的分子量约为30kDa。同时对该酶进行理化性质的研究。 C.thermophilum CT2内切β-葡聚糖酶的N-端15个氨基酸序列为MNQLEVLSLQSMPAA,与其它已报道纤维素酶的N-端氨基酸序列同源性比较低,推测可能是一种新的内切纤维素酶组分。 根据纤维二糖水解酶的氨基酸同源保守序列设计简并引物,克隆了C.thermophilum CT2热稳定纤维二糖水解酶cbh2基因,随后提取基因组DNA,克隆了其DNA序列,该序列长1950bp,包含三个内含子区域。该基因在GenBank中注册号为DQ020255。将cbh2基因与酵母表达载体pPIC9KEcoR Ⅰ和Not Ⅰ双酶切后体外连接构建了酵母分泌型表达载体pPIC9K/cbh2,转化巴斯德毕赤酵母获得了转酵母工程菌PGS-D,表达蛋
【学位授予单位】:山东农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:Q814;Q78

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【引证文献】
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【参考文献】
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【共引文献】
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9 崔桂新;贾懿磊;刘士彧;杨利波;;竹原纤维预处理工艺参数探讨[A];第八届功能性纺织品及纳米技术研讨会论文集[C];2008年
10 崔艳丽;毛建卫;;植物纤维素两段法催化降解[A];2009全国可再生能源—生物质能利用技术研讨会论文集[C];2009年
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9 罗蓓蓓;苎麻茎皮差减文库的构建及纤维发育相关基因的筛选[D];华中农业大学;2010年
10 江艳;BmCycH基因及其在家蚕中表达特性的研究[D];浙江理工大学;2010年
【同被引文献】
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中国博士学位论文全文数据库 前2条
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【二级参考文献】
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10 彭黎;梁宋平;;一种新型虎纹毒素的表达纯化及功能探索[A];第八届中国生物毒素学术研讨会论文摘要[C];2007年
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2 高祥森;民间资本搭上火车[N];经理日报;2002年
3 记者孙覆海 通讯员 高祥森 周立勋;山东首家民营火车站投运[N];工人日报;2002年
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6 佚名;诠释环境与人的“亲密”关系[N];医药经济报;2001年
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10 晓荷;西服 紧跟世界潮流水平大幅提高 面料成分标识不实问题突出[N];中国建材报;2000年
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