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《山东农业大学》 2006年
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禽网状内皮组织增殖症病毒和禽痘病毒间基因天然重组的研究

于立娟  
【摘要】: 为阐明我国禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus ,REV)天然整合进禽痘病毒(Fowlpox virus ,FPV)基因组的普遍性,对5株FPV疫苗株和4株分离的野毒株进行调查研究。主要方法包括:聚合酶链式反应(PCR),斑点杂交(Dot-blot),间接免疫荧光分析(IFA)等。IFA用以鉴定是否有游离病毒的污染,PCR和Dot-blot用以鉴定FPV中是否有REV片段整合。通过标记探针,进行Dot-blot,快速方便适宜于多个样品的检测,设计来自REV的特异于基因LTR,env,pol,gag引物各一对,扩增并测序比较,PCR扩增测序更准确。二者各有自身的优点,因此结合应用。结果表明,9株FPV均有REV-LTR和REV-env的整合,未检测到REV-pol和REV-env,REV基因组片段整合进FPV在我国FPV疫苗株及野毒株的现象已非常普遍。 参照国外发表的REV5’长末端重复序列(LTR)在FPV疫苗株基因组上的整合位点及相关序列,合成一对来自FPV的引物,从国内5个不同厂家生产的禽痘疫苗中经PCR均扩增到REV-5’LTR。通过序列比较发现,我国5个FPV疫苗毒株中REV-5’LTR整合位点与美国和澳大利亚的天然重组禽痘疫苗完全一致。其中,有3个的REV-5’LTR插入序列也与美国的Vac-3-Am株和澳大利亚的Vac-M3-Au株有100%的同源性。另2个中国疫苗毒株中的REV-LTR插入序列与美国疫苗毒株Vac-1-Am中的REV-LTR插入序列有99.6%的同源性。这5个中国禽痘疫苗毒株中整合的REV LTR与我国近年分离到的REV野毒株HA9901的5’LTR的同源性只有75.4%~92.4%。 应用细胞培养, IFA, Dot-blot和PCR等方法,经过对不同地区分离的4株FPV田间分离株研究发现,其中3株检测到有REV基因成分长末端重复序列(LTR)和囊膜糖蛋白(env)基因片断的整合,而另外1株LY-1整合有REV的4种基因成分LTR,env,pol,gag片段。进一步通过PCR方法,以9对来自REV的前后重叠的引物扩增整合进这株FPV中的REV全基因组cDNA序列片段。将9个序列拼接表明,LY-1的REV(命名为FPV-C-REV)全长7889bp,与1997年澳大利亚学者发现的禽痘疫苗FPV-S株中整合的REV序列同源性92%,他们都缺失REV的3’LTR,而且LY-1
【学位授予单位】:山东农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:S852.65;Q789

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【参考文献】
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