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《山东农业大学》 2007年
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嗜热真菌热稳定纤维素酶的分离纯化及基因的克隆与表达

李亚玲  
【摘要】: 纤维素是地球上最丰富的碳水化合物质,可被纤维素酶降解转化成为葡萄糖。具有很好的开发前景。纤维素酶因其在多领域潜在的应用价值而倍受关注,它可用于纤维废物的生物转化,也可用于纺织、造纸、洗涤、饲料加工等工业领域,还可用于加工单细胞蛋白,制备酵母和丝状真菌的原生质体,进行菌株改良。传统上采用化学方法控制纤维素降解难度大、成本高,对环境污染严重,而纤维素的生物降解有效克服了这些问题,不但提高了资源利用效率,而且增加了经济效益。 纤维素能被千百种真菌、细菌和放线菌等微生物所降解,生物降解过程很重要的一组酶是纤维素酶。外切葡聚糖纤维二糖水解酶(1,4-β-D-glucan cellobiohydrolase或exo-1,4-β-D-glucanase,EC3.2.1.91)是其中必不可少的一类酶。在水解纤维素过程中,外切葡聚糖纤维二糖水解酶主要作用于纤维素线性分子非还原末端,水解β-1,4-糖苷键,每次切下一个纤维二糖分子,使结晶纤维素成为易溶解的非结晶纤维素。β-葡聚糖苷酶(β-1,4-glucosidase,EC3.2.1.21,简称BG)也是纤维素酶系的重要组成成分,这类酶将纤维二糖水解成葡萄糖分子防止纤维二糖的积聚,减轻其对纤维素酶的抑制作用,因此该酶对于纤维素酶系的整体水解活性有很强的促进作用。 嗜热真菌产生的纤维素酶在高温条件下具有高活力和稳定性,并且与中温真菌一样,嗜热真菌产生的各类纤维素酶普遍含有多种类型的组分。到目前为止,外切葡聚糖纤维二糖水解酶和β-葡萄糖苷酶在真菌上的研究仍多以中温真菌为主,嗜热真菌(Thermophlic fungi)上的研究很少。本实验室分离的嗜热毛壳菌(Chaetomium thermophilum CT2)和埃默森篮状菌(Talaromyces emersonii)是广泛分布的,生长上限温度较高的两种嗜热真菌,从这两种菌中均已分离了多种嗜热纤维素酶,主要是内切葡聚糖酶和β-葡萄糖苷酶。本研究在发酵过程中检测到外切葡聚糖纤维二糖水解酶的活性,说明嗜热毛壳菌和埃默森篮状菌是纤维素酶系较齐全的两种嗜热真菌。本研究中C. thermophilum CT2在以微晶纤维素为唯一碳源的合成培养基中液体诱导发酵产生胞外纤维素酶,通过硫酸铵沉淀、DEAE-Sepharose阴离子层析、Sephacryl S-100分子筛层析、DEAE-Sepharose Fast Flow强阴离子层析等步骤获得了两种凝胶电泳均一的外切葡聚糖纤维二糖水解酶和一种β-葡萄糖苷酶,同时对该两种酶的多项理化性质进行研究。SDS-PAGE测得所分离纯化外切葡聚糖纤维二糖水解酶蛋白的分子量约为66.3kDa和180.3kDa。该两种酶反应的最适温度分别为65℃和70℃。反应的最适pH值分别为5.0和4.0。在60℃以下两种酶均比较稳定,在70℃保温1h后酶活性仍维持在60%左右,,在80℃下保温20minCBHⅠ具有20%的活性,在90℃下保温20minCBHⅡ仍具有近10%的活性。相比较而言,具有比CBHⅠ更高的热稳定性。这两种酶热稳定性较中温真菌的同类酶高。这两种酶在pH4.0-7.0之间均比较稳定,说明外切葡聚糖纤维二糖水解酶Ⅰ和Ⅱ具有一定的耐酸性。以pNPC为底物CBHⅠ的Km值为0.956mmol/L。纯化的β-葡萄糖苷酶为单亚基蛋白,相对分子量在118.0kDa-120.1kDa,其反应的最适温度为70℃,反应的最适pH值在4.0-5.0之间。从T. emersonii相同培养条件下的发酵液中也分离两种外切葡聚糖纤维二糖水解酶,其中CBHⅠ和CBHⅡ的分子量约为70.0kDa和72.2kDa。其最适反应温度分别为55℃和60℃,最适反应pH值为6.0和3.0。在60℃及60℃以下时CBHⅠ和CBHⅡ酶基本都是稳定的,在70℃时保温1h后,CBHⅡ的剩余酶活还能保持在70%左右,其热稳定性较好。CBHⅠ酶在pH5.0-8.0之间较为稳定,CBHⅡ在pH3.0-7.0之间的范围内比较稳定,该酶较之CBHⅠ具有很强的耐酸性。以pNPC为底物,CBHⅠ的Km值为0.936mmol/L,CBHⅡ的Km为0.917mmol/L。 根据真菌外切葡聚糖纤维二糖水解酶的氨基酸同源保守序列设计简并引物,通过RT-PCR及快速扩增cDNA末端(RACE)的方法,克隆了嗜热毛壳菌C. thermophilum CT2热稳定纤维二糖水解酶cbh3基因, cDNA序列全长为1356bp,包含一个开放阅读框,编码451个氨基酸。该基因已在Genbank中注册,登录号为DQ085790。同时提取嗜热毛壳菌C. thermophilum CT2基因组DNA,克隆了该外切酶的部分DNA序列,获得的序列长1507bp,包含三个内含子区域。该基因在GenBank中注册号为EF222284。 将cbh3基因与酵母表达载体pPIC9K经EcoRⅠ和NotⅠ双酶切后,体外连接构建了酵母分泌型表达载体pPIC9K/cbh3,将重组表达质粒pPIC9K/cbh3和pPIC9K空质粒分别用限制性内切酶SacⅠ(位于5’AOX1区内)线性化后,采用电击法转化巴斯德毕赤酵母Pichia pastoris GS115感受态细胞,于MD/MM平板上筛选His+Mut+表型的酵母转化子。经过PCR检测及G418抗性筛选多拷贝整合子,进行甲醇诱导培养。通过检测各转化子每隔24h的蛋白表达情况来筛选高效表达目的纤维二糖水解酶的工程菌株。经过检测与筛选获得了转酵母工程菌株,检测目的蛋白的表达量及遗传稳定性,并测定表达纤维二糖水解酶CBH的酶学性质。 本研究以嗜热真菌为研究对象,纯化了五种新的纤维素酶,分离了一个新的纤维素酶基因,并率先尝试进行真核表达,成功构建了能高效表达目的蛋白的转酵母工程菌株。以上开展的相关研究为纤维素酶的结构与功能的研究提供了现实依据,同时也为纤维素酶的工业化生产奠定了理论基础。
【学位授予单位】:山东农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:Q814.1

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【引证文献】
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1 张亚波;吴盼盼;王鹏;刘剑;徐天森;王浩杰;舒金平;;一株绿僵菌的鉴定及其生物学特性[J];林业科学;2012年12期
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3 李海云;玉米纹枯病菌(Rhizoctonia solani AG-1-IA)β-1,4-内切纤维素酶的基因克隆表达及功能研究[D];山东农业大学;2011年
4 刘海英;长梗木霉内切葡聚糖酶基因的克隆与表达研究[D];福建师范大学;2009年
5 吴小建;嗜热真菌的分离鉴定及其在双孢蘑菇栽培中的应用研究[D];广西大学;2012年
【参考文献】
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1 洪 ,黄秀梨;黑曲霉变种2281—C纤维素酶的纯化和性质[J];北京师范大学学报(自然科学版);1998年03期
2 梁靖,须海荣,蒋文莉,陈利燕;纤维素酶在速溶茶中的应用研究[J];茶叶;2002年01期
3 汪维云,朱金华,吴守一;纤维素科学及纤维素酶的研究进展[J];江苏理工大学学报;1998年03期
4 王建荣,张曼夫;绿色木霉纤维素酶CBHII基因的分子克隆[J];真菌学报;1994年03期
5 祝令香,于巍,梁改琴,董志扬;康宁木霉K801纤维素酶cbh2基因的克隆及序列分析[J];菌物系统;2001年02期
6 陈新爱,夏黎明,岑沛霖;里氏木霉纤维二糖酶bglII基因的cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达[J];菌物系统;2002年02期
7 乔宇,毛爱军,何永志,刘伟丰,董志扬;里氏木霉内切-β-葡聚糖酶Ⅱ基因在毕赤酵母中的表达及酶学性质研究[J];菌物学报;2004年03期
8 楚春雪,李多川,郭润芳;一株嗜热毛壳菌β-葡萄糖苷酶的分离纯化及特性[J];菌物学报;2004年03期
9 张煜,刘刚,余少文,汤新,邢苗;里氏木霉纤维二糖水解酶Ⅱ在毕赤酵母中的高效表达[J];菌物学报;2005年03期
10 刘守安;李多川;张燕;郭芳先;俄世瑾;;嗜热毛壳菌CT2纤维二糖水解酶Ⅰ在毕赤酵母中的高效表达[J];菌物学报;2006年02期
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1 王晓芳;产纤维素酶的真菌筛选与纤维素酶的诱导及其理化性质研究[D];南京师范大学;2002年
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1 陈兰英,赵桢,王晓涛,屈二军,陈建南;HSP70基因在人胃癌、食道癌及宫颈癌中高表达和癌变关系的研究[J];癌变.畸变.突变;2005年04期
2 程烽;盛燕;施静艺;陈漪;徐潮;刘智;梁军;潘春明;朱忠勇;宋怀东;;重叠延伸PCR法构建UGRP1基因启动子的点突变表达载体[J];癌变.畸变.突变;2007年01期
3 温居一;张积仁;李鹏;张军;王斌;;NADH对二乙基亚硝胺所致L02人肝细胞株p53基因突变和c-erbB2基因表达的影响[J];癌变.畸变.突变;2009年05期
4 金艺凤;李铁臣;王莹;刘东华;孙珍贵;;ERCC1和XPD单核苷酸多态性与非小细胞肺癌铂类化疗敏感性的关系[J];癌变·畸变·突变;2010年05期
5 钟鑫,薛平,丁筠;木塑复合材料性能研究的关键问题[J];工程塑料应用;2003年01期
6 游银伟,汪天虹,岳寿松;海洋青霉(Penicilliumsp.)FS010441的形态学观察和产纤维素酶性质初步研究[J];山东农业科学;2005年01期
7 吴静;李玉峰;宋敏训;黄兵;马秀丽;李峰;;鸡α-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达、纯化及其抗病毒活性测定[J];山东农业科学;2006年01期
8 王继英;武英;郭建凤;呼红梅;张印;;莱芜黑猪保种群促卵泡素β亚基和雌激素受体基因、基因型变化情况[J];山东农业科学;2007年01期
9 陈静;胡晓辉;苗华荣;张建成;禹山林;;花生SRAP-PCR技术体系的优化[J];山东农业科学;2008年05期
10 陈长宝;朱树华;周杰;;改良CTAB法提取成熟肥城桃果实的总RNA[J];山东农业科学;2009年05期
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1 徐义流;张绍铃;;梨活体花柱内花粉RNA的降解[A];食品安全的理论与实践——安徽食品安全博士科技论坛论文集[C];2005年
2 朱林;江昌俊;叶爱华;李叶云;余梅;邓威威;;茶树ATP硫化酶和硒半胱氨酸甲基转移酶基因植物表达载体的构建[A];现代农业理论与实践——安徽现代农业博士科技论坛论文集[C];2007年
3 王在贵;何瑞国;钱世钧;刘朝良;;特异腐质霉纤维素酶的酶谱分析[A];现代农业理论与实践——安徽现代农业博士科技论坛论文集[C];2007年
4 王春燕;刘四新;;宏基因组技术在纤维素酶活筛选中的研究进展[A];2009年海南省微生物学检测及质量保证研讨会论文集[C];2009年
5 张淑琼;曾思遥;高娟;陈瑞爱;罗满林;;犬IFN-α优化基因的真核表达及抗病毒活性的研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
6 林英;秦萍;杜志强;张蓓蓓;;产纤维素酶绿色木霉F-UV264产酶条件优化[A];科学发展与社会责任(A卷)——第五届沈阳科学学术年会文集[C];2008年
7 杨晓辉;;沈阳地区生物质燃料的开发和利用[A];科技创新与产业发展(A卷)——第七届沈阳科学学术年会暨浑南高新技术产业发展论坛文集[C];2010年
8 朱勤勋;严雪;韩友斌;;鼠源IgG抗体F(ab')2片段及Fab片段的制备纯化及其免疫活性研究[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
9 马天良;谢幸珠;张覃华;孙祥明;;苏云金杆菌发酵动力学研究[A];杀虫微生物[C];1992年
10 王宏俊;安烨;龚玉梅;陈小玲;张培君;;Modesto株副鸡禽杆菌血凝素基因的克隆表达及生物活性鉴定[A];微生物与人类健康科技论坛论文汇编[C];2009年
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1 张青婵;A亚群禽白血病病毒不同分离株的基因组和生物学特性比较[D];山东农业大学;2010年
2 徐荣燕;嗜热真菌糖苷酶的基因克隆、表达与分子改造[D];山东农业大学;2010年
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4 张婕;嗜热真菌热稳定几丁质酶基因的克隆、表达与分子改造[D];山东农业大学;2010年
5 殷慧群;猪诱导性多潜能干细胞的建立[D];安徽农业大学;2010年
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7 杨瑞梅;单链抗体介导狂犬病毒shRNA靶向制剂的研究[D];甘肃农业大学;2010年
8 姚小磊;基于TGF-β1与Bcl-2的抗干眼症中药高通量筛选体系的建立[D];湖南中医药大学;2010年
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10 李忠;聚合物/无机物/生物质杂化复合材料及其陶瓷材料的研究[D];合肥工业大学;2010年
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1 于宾宾;表达猪β-防御素-2成熟肽重组酵母工程菌的构建[D];华中农业大学;2010年
2 赵付伟;猪Ⅲ型干扰素IFN-λ1的克隆、表达和抗病毒活性研究[D];华中农业大学;2010年
3 高红梅;ETEC对断奶腹泻仔猪胃肠道紧密连接蛋白ZO-1的影响[D];华中农业大学;2010年
4 李浩丽;Bacillus pumilus CN8菌株高效降解猪血Hb酶的分离纯化与降解机制探讨[D];华中农业大学;2010年
5 董俊丽;深海细菌Martelella mediterranea纤维素酶基因的克隆、表达与酶学分析[D];华中农业大学;2010年
6 王树云;斑点叉尾鮰病毒ORF6和ORF10基因的原核表达及其功能的初步研究[D];华中农业大学;2010年
7 谢久凤;亮斑扁角水虻(Hermetia illucens L.)幼虫肠道内纤维素酶活性菌株的筛选与鉴定[D];华中农业大学;2010年
8 逯晋忠;苏云金芽胞杆菌对云斑天牛的抗性研究[D];华中农业大学;2010年
9 刘晨娟;脆性水稻秸秆的生物预处理及发酵[D];华中农业大学;2010年
10 汪艳杰;水稻polycomb基因家族甲基化状态初步检测[D];华中农业大学;2010年
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1 陈剑山;郑服丛;;ITS序列分析在真菌分类鉴定中的应用[J];安徽农业科学;2007年13期
2 刘发来;范建平;苏士;张子义;;纤维素生物转化研究进展[J];安徽农业科学;2008年17期
3 金玉荣;殷宏;罗建勋;;生防绿僵菌研究进展[J];安徽农业科学;2009年05期
4 刘北东,杨谦,周麒,宋金柱,陈佃福,刘恒,赵敏;绿色木霉AS3.3711的葡聚糖内切酶Ⅰ基因的克隆与表达[J];北京林业大学学报;2004年06期
5 梁靖,须海荣,蒋文莉,陈利燕;纤维素酶在速溶茶中的应用研究[J];茶叶;2002年01期
6 宋桂经,郭安广,徐欣,胡彩霞;洗涤剂用纤维素酶的研制与应用[J];日用化学工业;1994年02期
7 孙家宝;邓勋;宋小双;;金龟子绿僵菌的生物学特性及毒力测定[J];中国林副特产;2007年03期
8 谢占玲,吴润;纤维素酶的研究进展[J];草业科学;2004年04期
9 吴丽娟;蒋建新;朱佩芳;康格非;;巴斯德毕赤酵母基因组外源基因整合数的高通量定量分析[J];第三军医大学学报;2006年07期
10 曾青兰;;纤维素酶研究进展[J];湖北林业科技;2008年01期
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1 王青;韩建民;董金皋;;玉米大斑病菌PKC基因敲除及正、反义表达载体的构建[A];中国植物病理学会2008年学术年会论文集[C];2008年
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1 王秀娟;嗜热真菌纤维二糖水解酶(CBHⅠ、CBHⅡ)和内切葡聚糖酶(EGⅠ)的分子改造[D];山东农业大学;2011年
2 方兆华;脂肪酶与手性苯氧丙酸类除草剂的对映选择性相互作用[D];浙江大学;2005年
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4 谷守芹;调控玉米大斑病菌生长发育和致病性的STK基因的克隆与功能分析[D];河北农业大学;2007年
5 张亚波;嗜热真菌热稳定纤维素酶的分子改造[D];山东农业大学;2009年
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1 赵春青;中国嗜热真菌分类研究[D];山东农业大学;2006年
2 陈美佳;板栗疫病菌cpsr1基因与cphyma基因的克隆及其功能研究[D];广西大学;2007年
3 徐天鹏;里氏木霉纤维素酶基因的克隆及其在毕赤酵母中表达的研究[D];东北农业大学;2007年
4 马永毅;立枯丝核菌AG1-IA诱导玉米基因差异表达分析及防卫酶活性检测[D];四川农业大学;2007年
5 陈丽莉;纤维素酶生产菌的选育及纤维素降解特性的研究[D];长春理工大学;2008年
6 李忠玲;产碱性纤维素酶放线菌的筛选及其产酶条件与酶学性质初步研究[D];西北大学;2008年
7 鲁书玲;里氏木霉Trichoderma reesei自噬相关基因TrATG5的克隆与功能分析[D];浙江大学;2008年
8 宫春杰;一株纤维素降解细菌的生物学特性研究[D];东北师范大学;2008年
9 刘娣;秸秆纤维素高效降解真菌的筛选、鉴定及其纤维素酶基因克隆[D];中国农业科学院;2008年
10 陈路劼;降解纤维素嗜热菌的筛选及其功能基因克隆[D];福建农林大学;2008年
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1 姚友旭;李雨霏;侯晟琦;李春梅;陈惠;廖燕;;基于易错PCR技术的中性内切葡聚糖酶基因的定向进化[J];农业生物技术学报;2011年06期
2 窦屾;廖永红;杨春霞;任文雅;徐瑾;;酶法降解壳聚糖及产物应用研究进展[J];食品工业科技;2011年12期
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1 王秀娟;嗜热真菌纤维二糖水解酶(CBHⅠ、CBHⅡ)和内切葡聚糖酶(EGⅠ)的分子改造[D];山东农业大学;2011年
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1 吴小建;嗜热真菌的分离鉴定及其在双孢蘑菇栽培中的应用研究[D];广西大学;2012年
【二级参考文献】
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1 洪 ,黄秀梨;黑曲霉变种2281—C纤维素酶的纯化和性质[J];北京师范大学学报(自然科学版);1998年03期
2 崔锐谦;速容茶技术新进展浅析[J];茶叶;1996年03期
3 陈铭,李燕;茶饮料的开发与高新技术的应用[J];中国茶叶加工;1999年03期
4 赵翔,李至,陆身枫,霍克克,李育阳;酵母Yarrowia lipolytica的密码子用法分析[J];复旦学报(自然科学版);1999年05期
5 M.P.Coughlan;吴克谦;;细菌和真菌降解纤维素的机理(上)[J];国外畜牧科技;1991年06期
6 刘洁,李宪臻,高培基;纤维素酶活力测定方法评述[J];工业微生物;1994年04期
7 陈冠军,杜宗军,高培基;耐碱性真菌纤维素酶生产菌的筛选及酶学性质的初步研究[J];工业微生物;2000年04期
8 艾云灿,赵学慧,汪履绥;黑曲霉与里氏木霉原生质体形成和再生条件选择 Ⅰ.缓冲稳定剂系统及酶配比[J];华中农业大学学报;1993年04期
9 姚斌,张春义,王建华,范云六;高效表达具有生物学活性的植酸酶的毕赤酵母[J];中国科学C辑:生命科学;1998年03期
10 周正红,贾宗剑,高孔荣;纤维素酶在食品发酵工业中的应用及前景(综述)[J];暨南大学学报(自然科学与医学版);1998年05期
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1 张巧灵;姜俊兵;贺俊平;范瑞文;耿建军;赫晓燕;董常生;;羊驼显性白毛调控KIT基因的分子克隆及在大肠杆菌中的表达[J];激光生物学报;2008年01期
2 陈东海,寿成超;抗肿瘤单抗3H11对应抗原cDNA片段的克隆[J];中国生物化学与分子生物学报;1999年02期
3 李兴暖;韩雅莉;;地鳖虫纤溶活性蛋白cDNA序列克隆与毕赤酵母表达[J];生物技术通报;2009年11期
4 朱路英;朱清华;张学成;;裂殖壶菌鲨烯合酶基因的克隆及在大肠杆菌中的表达[J];食品科学;2010年19期
5 陈桂兰;徐柳;岳碧松;邹方东;;林麝γ-干扰素基因的克隆、分析及表达、纯化[J];四川动物;2007年01期
6 黄震宇,朱伟民,洪锦心;PCR技术在单克隆抗体cDNA的筛选及标记同位素探针上的应用[J];细胞与分子免疫学杂志;1992年04期
7 朴;促使细胞自杀的“Fas”的cDNA克隆化成功[J];中国生物工程杂志;1992年06期
8 王福生;丙型肝炎病毒的分子遗传学研究现状[J];军事医学科学院院刊;1993年03期
9 赵崇,王立斌,宋学文,张镜宇;大鼠脑神经元特异性烯醇化酶基因的cDNA克隆及序列分析[J];中国生物化学与分子生物学报;1994年03期
10 王罡,万里川,胡汉桥,王萍,吴颖,季静;小麦抗白粉病特异表达cDNA克隆的分子生物学研究[J];生物技术通讯;1997年Z1期
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1 刘守安;李亚玲;李多川;;嗜热毛壳菌CT2热稳定纤维素酶(EGⅡ)纯化及基因(cbh1、cbh2)的克隆和表达[A];中国植物病理学会2006年学术年会论文集[C];2006年
2 陈玉飞;祁克宗;彭开松;涂健;;鸡β-防御素-8 cDNA的克隆及在毕赤酵母中的表达[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十六次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十五次学术研讨会论文集[C];2009年
3 张锦秀;晁生玉;史利军;候绍华;李刚;;猪圆环病毒Ⅱ型修饰Cap蛋白基因的原核表达及纯化[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集(上册)[C];2009年
4 廖富蘋;钟杨生;邓平建;黄自然;刘建军;房师松;赵锦;;转抗菌肽基因辣椒的表达产物的检测[A];中国蚕学会第四届青年学术研讨会会议论文集[C];2004年
5 党志胜;殷宏;罗建勋;关贵全;马米玲;刘志杰;王艳华;刘爱红;杨东英;蒋锡仕;;环形泰勒虫裂殖体表面蛋白(TaSP)基因高免疫原性区的克隆及其在大肠杆菌中的表达[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集[C];2004年
6 尹继刚;张西臣;李建华;刘晓枫;李德昌;;抗隐孢子虫子孢子ScFv-PE40重组毒素的可溶性表达[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集[C];2004年
7 骆学农;郑亚东;窦永喜;景志忠;才学鹏;;猪带绦虫六钩蚴45W-4B基因的克隆和表达[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第五次代表大会暨第八次学术研讨会论文集[C];2004年
8 黄宇烽;朱国华;陈德宇;;抗人L-PGDS人-鼠嵌合轻链的真核表达[A];第十届全军检验医学学术会议论文汇编[C];2005年
9 余子全;孙明;喻子牛;;苏云金芽胞杆菌中杀线虫晶体蛋白基因cry6A的负表达调控[A];第二届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文集[C];2006年
10 杨茂林;陈伟仕;厉健;;p53、c-erbB-2、nm23-H_1等三种癌基因在口腔颌面部鳞癌中表达及其临床意义的研究[A];中华口腔医学会第二次全国会员代表大会暨第七次全国口腔医学学术会议论文汇编[C];2001年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 赵引德;低成本环状碳酸酯新工艺诞生[N];中国化工报;2007年
2 沈平孃;我国中药制药工程发展初见成效[N];中国医药报;2007年
3 谢建平 执笔;以促进人类科技创新为准绳[N];医药经济报;2001年
4 据卫生部;转基因食品卫生管理办法(节选)[N];中国乡镇企业报;2005年
5 雷汉发;神威药业打造高品质中药品牌[N];经济日报;2006年
6 本报记者 范玉蕾 通讯员 冯进茂;“五变”中药助“神威”创新路上领先[N];石家庄日报;2006年
7 国东;多肽药物进军国际第一步[N];医药经济报;2007年
8 ;威世药业RNA制备方法获发明专利[N];中国高新技术产业导报;2005年
9 蔡仲德;加强中药专利代理研究的探讨[N];中国中医药报;2003年
10 张东风;中药制药工程引领中药现代化[N];中国中医药报;2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李亚玲;嗜热真菌热稳定纤维素酶的分离纯化及基因的克隆与表达[D];山东农业大学;2007年
2 贾汇红;疏绵状嗜热丝孢菌热稳定纤维素酶的分离纯化和基因克隆[D];山东农业大学;2007年
3 张亚波;嗜热真菌热稳定纤维素酶的分子改造[D];山东农业大学;2009年
4 李华;嗜热毛壳菌(Chaetomium thermophilium)热稳定性β-1,3-葡聚糖酶的纯化特性及cDNA克隆[D];山东农业大学;2008年
5 王骥;福寿螺(Ampullaria crossean)多功能纤维素酶EGX的研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2004年
6 许守明;小盐芥C_2H_2类锌指蛋白基因ThZF1的克隆及其功能研究[D];中国农业大学;2005年
7 童斌;柿果实扩张蛋白cDNA克隆及其生物活性研究[D];西北农林科技大学;2003年
8 郭虹;弓形虫侵入相关分子ROP1基因的克隆及其DNA免疫研究[D];中山医科大学;1999年
9 陈静;嗜热毛壳菌热稳定糖化酶纯化及其编码基因的克隆与表达[D];山东农业大学;2006年
10 张付云;壳寡糖诱导烟草抗性相关基因的克隆和鉴定[D];中国科学院研究生院(大连化学物理研究所);2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘守安;嗜热毛壳菌热稳定纤维素酶(EGⅡ)的纯化及基因(cbh1、cbh2)的克隆和表达[D];山东农业大学;2006年
2 宋宁宁;嗜热子囊菌光孢变种超氧化物歧化酶(Mn-SOD)基因的克隆、表达及性质研究[D];山东农业大学;2009年
3 郑艳;疏棉状嗜热丝孢菌热稳定脂肪酶的基因克隆与表达[D];山东农业大学;2008年
4 黄燕;刚地弓形虫SAG2基因的克隆、表达与ELISA方法的建立[D];上海交通大学;2007年
5 祁光宇;弓形虫自然弱毒株(QHO)棒状蛋白2基因片段的克隆、表达及鉴定[D];甘肃农业大学;2007年
6 姜晓娟;奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌凝聚因子A A区基因的克隆表达[D];内蒙古农业大学;2008年
7 崔福浩;玉米纹枯病菌(Rhizoctonia Solani AG-1-IA)β-1,4-内切纤维素酶的分离纯化、基因的克隆与表达及功能研究[D];山东农业大学;2009年
8 滕芳超;嗜热毛壳菌β-葡萄糖苷酶的分离纯化、性质研究及基因克隆[D];山东农业大学;2006年
9 付敏玲;苹果酸脱氢酶包涵体的表达及复性研究[D];天津大学;2006年
10 李涛;副溶血性弧菌多联融合鞭毛基因的表达与免疫特性研究[D];吉林大学;2007年
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