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大白菜种子纯度测定技术研究

张承毅  
【摘要】: 大白菜作为我国主要的蔬菜作物在农业生产中占有重要位置。本文对大白菜种子纯度检验方法,大白菜形态特征特性数据采集标准、性状描述标准、形态数据库的建立进行了研究;针对大白菜种子特点对AU-PAGE进行改进,建立大白菜种子蛋白质电泳方法;根据电泳纯度检测结果与田间纯度试验结果的相关性,分析该电泳方法检测纯度的可行性。主要研究结果如下: 1.制定了大白菜特征特性数据的采集标准和性状描述标准 对大白菜特征特性相关数据进行了搜集整理,制定了大白菜不同生育期形态特征特性的数据采集标准和性状描述标准,将促进品种登记的标准化,利于品种保护和纯度检验工作的开展。 2.建立了形态特征特型数据库和组合表 建立了山东省12个主要大白菜品种的形态特征特性数据库,为区分和鉴定品种及品种管理、质量控制工作提供了科学规范的依据。明确了苗期的子叶形状、颜色和真叶形状、颜色、茸毛有无、结球期的叶球的发育进化程度、球心闭合程度、叶球形状、叶片抱合方式、球顶形态、球心颜色类型等性状具有丰富的多态性,在品种鉴定和品种保护中具有重要作用。 分别对苗期、成株期、结球期性状稳定性和多态性进行分析,建立了品种形态组合表。鉴定依据的主要性状为:苗期的子叶形状、颜色,基生叶的形状、颜色及茸毛的多少;成株期的外叶形状、颜色、茸毛的多少、叶柄颜色;结球期的叶球发育进化程度、球心闭露程度、叶球形状、球内叶片抱合方式及球顶形态。 3.优化了大白菜种子纯度电泳技术体系 样品制备:数取种子,单粒砸碎放入离心管,加去离子水40μl室温提取40分钟,10000转离心3分钟后取上清15μl与调整液(10%TEMED、30%HAC、15%脲、少量甲基绿)1:1混匀备用。 制胶:装电泳槽,取15毫升凝胶(10%丙烯酰胺、10%脲、2%HAC、0.4%NaAC、0.25%双丙烯酰胺、0.02%FeSO_4)加30μl催化剂(3%过硫酸铵)封底。取凝胶30毫升加30μl催化剂灌胶。 电泳:每孔加蛋白质样品25μl,加电极液(2%HAC),稳压40mA/板进行电泳。指示剂到达胶底停止电泳,染色后观察记载。 该电泳方法能将87-114、改良青杂3号、晋菜三号、鲁白6号、早熟五号6个品种的杂交种与双亲自交粒和杂粒区分开,表明优化后的电泳体系具较强的检杂能力。 4.建立了电泳与田间纯度检验结果相关性方程 对大白菜9个不同品种的种子样品电泳纯度与田间纯度检验结果的相关系数为0.826(R_(0.01(7))=0.798),达到极显著水平,证明了该方法可用于纯度检验。建立了电泳纯度检验结果(X)与田间纯度(Y)回归方程:Y=0.7724X+23.855。


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