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《山东农业大学》 2009年
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桃果实几个乙烯信号转导相关基因的克隆及其表达

赵相娟  
【摘要】: 乙烯是调控植物生长发育重要的气态植物激素,其生理作用最终是通过其信号转导途径实现的。肥城桃(Prunus persica‘Feicheng’)为一地方特色名产,是典型的呼吸跃变型果实,对乙烯作用极为敏感。本实验从肥城桃果实中成功克隆了与乙烯信号转导有关的4个全长基因,并在转录水平上研究了PpEILs和PpEBF1的表达特性,主要结果如下: 1.根据植物乙烯转录因子EIL(EIN3-like)家族的氨基酸和核苷酸保守区序列,设计简并引物,采用RT-PCR从成熟桃果实中分离了两个571 bp的EIL同源基因片段。随后运用RACE技术,分别扩增得到了两个包含完整开放阅读框(ORF)及非编码区序列(UTR)的乙烯转录因子的cDNA,即PpEIL1和PpEIL2。它们分别为2 086 bp和2 557 bp,编码蛋白大小均为601个氨基酸。虽然PpEIL1和PpEIL2在氨基酸水平上的同源性仅为42%,但在N末端DNA结合功能域可高达86%。聚类分析结果表明,两者分别属于EIN3/EIL家族两类不同乙烯转录因子成员。 2.在GenBank中获得的EST序列基础上,分别通过5′RACE和3′RACE技术结合得到全长为3 057 bp的PpEBF1,包含1 941 bp的ORF、248 bp的5′UTR和868 bp的3′UTR,编码蛋白的分子量为68.96 kD,推测等电点为7.41。根据EST库中的核苷酸序列,设计特异引物进行PCR扩增,结果得到了1 263 bp的PpERF1全长基因,包含一个708 bp的ORF。序列分析表明,PpERF1与番茄、拟南芥、苹果和葡萄等在DNA结合功能域的约58个氨基酸中,同源性可达68.4%—100%,且在该区域中存在1个α-螺旋和3个反平行链构成的β-折叠结构。该序列与拟南芥、葡萄、豌豆等植物的氨基酸同源性为58.8%—67.5%,属于同一类ERF家族成员。 3.实时荧光定量PCR表明,在花器官及花后40天的幼果中,PpEILs和PpEBF1表达量较高,随着果实的成熟,表达量有增高的趋势;20℃时,1μl/L外源乙烯明显促进PpEILs和PpEBF1的表达,且随时间延长表达量增加;而1μl/L 1-MCP处理则抑制PpEILs和PpEBF1的表达。
【学位授予单位】:山东农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:S662.1

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