收藏本站
《泰山医学院》 2005年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

吗啡及神经降压素对大鼠尾壳核神经元μ、δ、κ阿片受体表达的影响

刘海青  
【摘要】:目的建立大鼠尾壳核神经元体外培养模型,并以此为基础探讨吗啡、神经降压素(neurotensin, NT)及二者联合作用,对尾壳核神经元的μ、δ、K阿片受体(mu-opioid receptor, MOR; delta-opioid receptor, DOR; kappa-opioid receptor, KOR) mRNA及蛋白表达的影响。 方法采用原代神经元培养、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及细胞免疫化学等方法。细胞培养部分:采用胰蛋白酶消化法对新生Wistar大白鼠尾壳核进行体外分散培养,培养条件37°C、5% C02,并于培养的第1、3、5、7、9 d,随机测量有典型神经元特征的细胞的突起长度和胞体面积;培养6 d左右,进行神经元特异性烯醇化酶染色,阳性率达85%以上,用于后续实验。 药物实验部分:给药前3h更换不含小牛血清的无酚红DMEM培养基: 1.换入吗啡或NT培养液,终浓度分别为10-5mol/L和10-8mol/L,在给药后的0,4,12,24,48h分别收集细胞; 2.更换吗啡培养液,终浓度为0、10-9、10-8、10-7、10-6、10-5mol/L;更换NT培养液,终浓度分别为0、10-12、10-10、10-8mol/L,在给药后的24 h收集细胞; 3.在终浓度为0、10-12、10-10、10-8mol/L的NT培养液预孵育15 min后,加入吗啡,终浓度为10-6mol/L,并于24h或48 h收集细胞。细胞收获后,异硫氰酸胍法提取总RNA,采用RT-PCR方法,观察吗啡、NT不同作用时间和剂量(浓度)及二者联合用药对体外培养大鼠尾壳核神经元的MOR、DOR、KOR mRNA表达的影响,同时采用细胞免疫化学方法检测联合用药对体外培养大鼠尾壳核神经元的MOR、DOR蛋白表达的影响。 1.体外培养的尾壳核神经元可表达神经元特异性烯醇化酶,呈梭形、椭圆形、锥形或多边形生长,某些神经元突起可见串珠样膨体,突起末端见粗大的生长锥,其胞体及突起于1~3 d增长最快,5~7 d趋于稳定,9d基本维持5~7 d水平,甚至出现空泡及颗粒等衰老性改变; 2.吗啡可使MOR、DOR mRNA水平显著降低(p0.01),使KOR mRNA水平明显升高(p0.01),作用持续48 h;吗啡在10-8mol/L时可引起MOR mRNA水平显著降低(p0.01), KOR mRNA水平明显升高(p0.01),在10-6mol/L时才有效降低DOR的mRNA水平(p0.01); 3.NT在10-10mol/L及以上浓度使MOR、DOR、KOR mRNA水平升高(p0.05或p0.01),作用可持续48 h; 4.NT在10-10mol/L及以上浓度与吗啡(10-6mol/L)联合用药组,MOR、DOR mRNA水平明显高于吗啡组(p0.01),与正常对照组无异(p>0.05); 5.免疫细胞化学结果显示,吗啡可显著降低MOR蛋白表达,与对照组比较,差异有统计学意义(p0.05);NT在10-10mol/L及以上浓度与吗啡(10-6mol/L)联合用药组MOR表达明显高于吗啡组(p0.05或p0.01),与对照组无异(p>0.05);但DOR在吗啡组及联合用药组与对照组比较,均无明显改变(p>0.05)。 1.体外培养的尾壳核神经元于6、7d左右趋于成熟,生长状态良好,为实验的最佳时机; 2.吗啡作用于原代培养大鼠尾壳核神经元4h或12h以上,可明显抑制MOR或DOR的基因表达;吗啡作用12h以上可显著促进KOR的基因表达;而NT作用于原代培养大鼠尾壳核神经元4h以上,对于MOR、DOR、KOR的基因表达,均有一定的促进作用: 3. NT可阻断吗啡对原代培养大鼠尾壳核神经元MOR、DOR基因表达的抑制效应; 4.吗啡可明显降低MOR蛋白表达,NT可部分阻断吗啡对MOR蛋白的抑制作用,但DOR蛋白水平不受吗啡及NT的影响。
【学位授予单位】:泰山医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:R965

【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 虞鑫红,刘懋勤,李灵源,李建国,王玲,索彩玲;具有柔性亲电侧链的蒂巴因和奥利文衍生物的合成和生物活性[J];药学学报;1987年07期
2 陆瑞良;;酪·精二肽(kyotorphin)间接激活阿片受体的进一步证据[J];医学分子生物学杂志;1982年06期
3 沈行良,马庆玲,蔺小平,赵建础;激光穴位照射对中央灰质神经原自发放电及痛反应的影响(摘要)[J];陕西医学杂志;1986年12期
4 郑明祺;阿片受体及其配体[J];中国药理学通报;1987年05期
5 葛邦錀,张鸿萍,徐永平,周德和;肝素钠对不同亚型阿片受体体外结合的影响[J];科学通报;1988年24期
6 金荫昌,叶菜英,李翊,索彩玲,李灵源,刘懋勤,金向明,毛振民;大鼠脑阿片受体的溶脱与提纯[J];中国医学科学院学报;1989年02期
7 刘存明;钱燕宁;章红;林桂芳;;芬太尼对大鼠葡萄糖代谢动力学的影响[J];中华麻醉学杂志;1996年01期
8 崔孟珣;阿片受体寡聚化的研究进展[J];国外医学.药学分册;2003年03期
9 马汉祥;马富强;刘红;;瑞芬太尼的研究进展[J];宁夏医学杂志;2006年02期
10 王菲菲;马兰;潘銮凤;;β-arrestin在阿片受体内吞和阿片受体介导的核信号传递中的作用[J];中国药物依赖性杂志;2006年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 于世英;;癌症疼痛选择性外周阿片受体靶向治疗研究进展[A];第三届中国肿瘤学术大会教育论文集[C];2004年
2 艾青;徐建国;;阿片受体拮抗药的药理及临床应用[A];2008年第七次华东六省一市麻醉学学术会议暨浙江省麻醉学术年会论文汇编(上册)[C];2008年
3 时全星;李娟;姚远;裴建明;;κ-阿片受体激活通过调节钙-Cx43通路抗心律失常[A];中国生理学会第九届全国青年生理学工作者学术会议论文摘要[C];2011年
4 裴建明;孙新;王跃民;臧益民;;阿片受体在肺循环中的调节作用[A];中国生理学会、中国神经科学会2005年神经内分泌免疫学术研讨会论文摘要汇编[C];2005年
5 张德昌;陆久怡;叶菜英;谢志华;;阿片受体激活信号转导及其与耐受依赖新机理的初步研究[A];中国药理学会第八次全国代表大会暨全国药理学术会议论文摘要汇编[C];2002年
6 王舒茵;梁子敬;;阿片受体对缺血心肌的保护作用[A];2008年广东省中医热病、急症、中西医结合急救、危重病、灾害医学学术会议学术论文集[C];2008年
7 张德昌;陆久怡;叶菜英;谢志华;;阿片受体激活信号转导及其与耐受依赖新机理的初步研究[A];中国药理学会第八次全国代表大会论文摘要集(第一部分)[C];2002年
8 温泉;宫泽辉;;噻吩诺啡衍生物——化合物030418与阿片受体作用特点研究[A];中国药理学会第九次全国会员代表大会暨全国药理学术会议论文集[C];2007年
9 陶亦敏;高灿;徐学军;陈洁;池志强;;多巴胺受体和阿片受体异源二聚化研究[A];第八届全国生化药理学术讨论会暨第七届Servier奖颁奖大会会议摘要集[C];2003年
10 程飚;刘宏伟;付小兵;盛志勇;邱建勇;曹荣;;β-内啡肽及其μ型-阿片受体在深Ⅱ度烫伤大鼠皮肤愈合过程中的表达特点及其生物学意义[A];第五届全国烧伤救治专题研讨会烧伤后脏器损害的临床救治论文汇编[C];2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 胡德荣;阿片受体功能研究有了新发现[N];保健时报;2003年
2 副主任医师 宁在兰;癌痛病人用吗啡会成瘾吗[N];卫生与生活报;2006年
3 平;脑内阿片受体与贪食症有关[N];健康报;2005年
4 胡德荣;我国发现Delta阿片受体的镇痛机制[N];中国医药报;2003年
5 记者 谢军;在国际上首次发现阿片受体镇痛新机制[N];光明日报;2003年
6 白毅;P物质前体分子直接调控阿片受体功能[N];中国医药报;2005年
7 吴国冀 陈正秋;针刺镇痛的阿片受体机制[N];中国医药报;2000年
8 罗晶晶 刘远桥;三军医大大坪医院提速抗创伤休克药物研究[N];中国医药报;2005年
9 记者 任荃;临床麻醉将有新方案[N];文汇报;2003年
10 吴勐;王银叶;艾铁民;紫金龙镇痛作用与阿片受体无关[N];中国医药报;2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 温泉;新型阿片受体激动剂030418强镇痛和低成瘾作用的受体机制研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年
2 胡萍;新合成阿片受体配基的药理特性之研究[D];中国协和医科大学;2001年
3 周京军;κ-阿片受体参与心肌缺血预处理保护作用及阿片受体耐受机制的研究[D];第四军医大学;2001年
4 郭庆民;Ca~(2+)/钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ信息通路在阿片依赖的受体信号转导机制中的作用[D];中国协和医科大学;2001年
5 李炜;镇痛药物与结构中含k“位码”的稠环吗啡类配基研究[D];复旦大学;2007年
6 夏鹏;δ阿片受体的表达和激活对谷氨酸转运蛋白EAAC1的调节[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2006年
7 王冬梅;肾上腺髓质素和MrgC受体对μ阿片受体功能的调节—G蛋白机制[D];福建师范大学;2012年
8 胡子有;阿片受体真核表达系统的构建与表达及μ和δ受体的相互作用研究[D];南方医科大学;2010年
9 李玄英;阿片受体在吗啡耐受机制中的作用研究[D];中国协和医科大学;2008年
10 师梅梅;吗啡慢性戒断对伏隔核中型棘突神经元放电特性的影响[D];陕西师范大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘海青;吗啡及神经降压素对大鼠尾壳核神经元μ、δ、κ阿片受体表达的影响[D];泰山医学院;2005年
2 温建忠;急性心肌缺血时大鼠丘脑束旁核μ1-阿片受体mRNA和5-HT_(1A)受体mRNA的表达及吗啡、曲马多干预效应的实验研究[D];山西医科大学;2004年
3 毛张凡;缺血后处理对大鼠离体心的保护作用及其机制的实验研究[D];华中科技大学;2006年
4 吴晓杰;慢性吗啡处理对伏隔核谷氨酸能突触传递的影响[D];陕西师范大学;2012年
5 杨逢勇;α干扰素对HPA轴的调节作用和受体机制[D];青岛大学;2006年
6 蔡婧;舒芬太尼在乳腺手术麻醉中的应用[D];吉林大学;2007年
7 昝香怡;阿片受体拮抗剂对大鼠心肌缺血再灌注损伤效应的实验研究[D];兰州大学;2007年
8 胡晓燕;心力衰竭患者心房κ-阿片肽受体表达的研究[D];兰州大学;2007年
9 岳锋雷;急性一氧化碳中毒大鼠脑内阿片受体表达变化的初步研究[D];大连医科大学;2011年
10 张权宇;κ-阿片受体通过调节Cx43稳定性介导的抗缺血性心律失常作用机制研究[D];第四军医大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026