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《泰山医学院》 2010年
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HSV-2 gD模拟抗原表位、IL-18重组核酸疫苗的构建及免疫效果观察

刘莉  
【摘要】:目的 根据前期筛选的人单纯疱疹病毒2型(HSV-2)糖蛋白gD模拟抗原表位序列P6,选取与其最相近的天然抗原表位序列NP6(Accession Number:E00394),以pcDNA3.1(-)为载体、hIL-18为佐剂,分别构建和表达HSVP6和HSV NP6与IL-18不同串联组合的重组表达克隆,并探讨其诱导小鼠机体免疫应答的能力。 方法 (1)采用串联简并引物PCR法将P6和NP6(与P6最相近的天然抗原表位序列)与hIL-18基因序列分不同组合串联克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-)中,构建重组克隆pcDNA3.1-IL-18-HSVP6、pcDNA3.1-IL-18-HSV NP6、pcDNA3.1-IL-18,并经双酶切、测序鉴定后将各重组质粒分别转染CHO细胞,通过P6合成多肽免疫家兔阳性血清介导的间接免疫荧光法、Western blotting检测P6和NP6的表达情况;(2)6周龄雌性BALB/c小鼠随机分为6组(每组10只),于小鼠双侧股四头肌注射免疫,根据质粒的注射类型不同,各组依次为:1组每侧各注射NS(生理盐水)100μl,2组每侧各注射空载体质粒pcDNA3.1 100μl(1 mg/ml),3组每侧各注射重组质粒pcDNA3.1-IL-18100μl (1 mg/ml),4组每侧各注射P6合成多肽100μl (1mg/ml),5组每侧各注射重组质粒pcDNA3.1-IL-18-HSV P6 100μl(1mg/ml),6组每侧各注射重组质粒pcDNA3.1-IL-18-HSVNP6100μl(1 mg/ml).连续免疫三次,每次间隔一周,首次免疫应用弗式完全佐剂与注射质粒1:1混合,以加强免疫效果。小鼠于免疫完成后1周眼眶内眦静脉取血,间接ELISA法检测血清IgG. IFN-y及IL-18表达量,免疫完成后4周断颈处死小鼠,取小鼠脾淋巴细胞,MTT法检测小鼠脾淋巴细胞特异性增殖率。 结果 (1)构建的串联重组克隆pcDNA3.1-IL-18-HSV P6、pcDNA3.1-IL-18-HSV NP6、pcDNA3.1-IL-18经双酶切及测序鉴定插入序列正确,经间接免疫荧光、Western blotting检测均可证实串联重组克隆pcDNA3.1-IL-18-HSVP6中模拟抗原表位序列P6具有免疫原性,质粒构建成功;(2)免疫小鼠后实验结果显示:串联重组克隆pcDNA3.1-IL-18-P6无论是在体液免疫还是在细胞免疫方面,免疫效果均优于其他实验组,能够较好的诱导体液免疫和细胞免疫应答。 结论 (1)用串联简并引物PCR法成功构建和表达了重组质粒pcDNA3.1-IL-18-HSV P6、pcDNA3.1-IL-18-HSV NP6和pcDNA3.1-IL-18;(2)体内免疫试验证实本研究构建的串联重组克隆pcDNA3.1-IL-18-P6能有效诱导小鼠体液免疫和细胞免疫应答。
【学位授予单位】:泰山医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R392

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 焦凤萍;于爱莲;王玉;洪源;成军;于广福;;单纯疱疹病毒Ⅱ型gD模拟抗原表位的筛选及分析[J];第四军医大学学报;2007年21期
2 韩双艳,王捷,杨慧兰,杨太成,冼江;单纯疱疹病毒Ⅱ型DNA疫苗的免疫研究[J];广东医学;2004年05期
3 傅锦坚;林元藻;胡立勇;;单纯疱疹病毒疫苗的研究进展[J];广东药学院学报;2008年01期
4 周建勋,孟红;单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)包膜糖蛋白gG-2相关研究进展[J];国外医学.病毒学分册;2004年04期
5 韩双艳,李杰生,郭勇,杨慧兰,王捷,杨传红,詹纯列;DNA疫苗经基因枪介导的免疫研究[J];华南理工大学学报(自然科学版);2004年03期
6 余璐,马恒,朱军,杨守京;汉坦病毒诱导非洲绿猴肾上皮细胞热休克蛋白70的表达规律及意义[J];医学研究生学报;2004年12期
7 樊建勇;杨慧兰;关蕾;王颖;仕瑶慧;;热休克蛋白70-Ⅱ型单纯疱疹病毒糖蛋白DDNA疫苗的构建及表达[J];医学研究生学报;2007年04期
8 关蕾;杨慧兰;樊建勇;;单纯疱疹病毒Ⅱ型细胞毒性T淋巴细胞表位重组DNA疫苗的构建表达及鉴定[J];临床皮肤科杂志;2006年06期
9 周文泉,桑红;生殖器疱疹的流行病学和诊治进展[J];中华男科学;2003年08期
10 高建;陆金春;黄宇烽;;单纯疱疹病毒疫苗的研究现状[J];中华男科学杂志;2009年01期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 韩双艳;单纯疱疹病毒Ⅱ型DNA疫苗的构建及免疫学性质研究[D];华南理工大学;2004年
【共引文献】
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1 刘烈刚,刘恭平,姚平,郝丽萍,杨雪峰,孙秀发,朱清华;维生素A缺乏对小鼠胚胎Hox-3.5 mRNA表达与胚胎发育关系的研究[J];癌变.畸变.突变;2003年03期
2 安兰敏,杨军,徐兵;铅对大鼠脑细胞凋亡的诱发作用及对P53基因表达影响的研究[J];癌变.畸变.突变;2003年04期
3 王欣,褚建新,傅汝林,赵钧铭;清热解毒方对可移植性小鼠淋巴细胞白血病及其微小残留病疗效的比较研究[J];中医药临床杂志;2005年02期
4 石毅;;核酸疫苗的研究进展[J];安徽农业科学;2006年04期
5 赵莉;邓晓玲;蔚应俊;;水稻叶片mRNA差异显示技术中总RNA的提取和检测[J];安徽农业科学;2006年17期
6 詹爱军;王新卫;王宪文;;抗H9亚型AIV血凝素单克隆抗体的制备及亚型鉴定[J];安徽农业科学;2008年03期
7 宋瑞佳;侯伟倬;杨杰;冯静;张小娜;范红哲;甄占萱;邓淑华;;白花曼陀罗和白屈菜水浸液杀菌效果研究[J];安徽农业科学;2010年09期
8 张海军,张小爱,程双怀,耿红,聂刘旺,阚显照;扬子鳄Sox基因的PCR-SSCP分析[J];安徽师范大学学报(自然科学版);2001年03期
9 陈冬生,聂刘旺,王朝林,谢万树;扬子鳄DMRT1基因DM保守区的克隆及序列分析[J];安徽师范大学学报(自然科学版);2004年04期
10 霍开兰;陈道利;刘燕;;136株金黄色葡萄球菌产毒及噬菌体分型的研究[J];安徽预防医学杂志;2006年04期
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1 李新民;党琦;;天佛参口服液(TFS)诱导人喉癌细胞Hep-2凋亡及机理探讨[A];2011年中华名中医论坛暨发挥中西医优势防治肿瘤高峰论坛论文集[C];2011年
2 黄达娜;吴少庭;袁仕善;张仁利;高世同;耿艺介;;弓形虫表面抗原SAG1真核表达重组质粒的构建与表达[A];全国寄生虫学与热带医学学术研讨会论文集[C];2006年
3 金宁一;;猪源人畜共患病毒病的流行与危害[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集[C];2008年
4 杨彬;兰喜;殷相平;李学瑞;李宝玉;方玉萍;柳纪省;;口蹄疫病毒双效疫苗载体的构建及其体外表达研究[A];第二届全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2008年
5 杨彬;兰喜;殷相平;李学瑞;李宝玉;方玉萍;柳纪省;;口蹄疫病毒双效疫苗载体的构建及其体外表达研究[A];首届中国兽药大会——兽医生物制品学、兽医微生物学学术论坛论文集(2008)[C];2008年
6 孟宪荣;周蕾蕾;栗绍文;周祖涛;毕丁仁;陈辉;齐冰玉;;猪骨骼肌肌钙蛋白Ⅰ基因的表达及其单克隆抗体的制备[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集(上册)[C];2009年
7 李西玉;许信刚;周继章;邱昌庆;曹小安;宫晓炜;王光华;;猪流产嗜性衣原体MOMP基因的克隆及原核表达[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会论文集[C];2010年
8 徐向田;;中医“治未病”思想与乙肝三级防治技术理论探讨[A];中医理论临床应用学术研讨会论文集[C];2007年
9 曹薇;张忠元;江泓颖;;1例癌症晚期患者继发口腔念珠菌病的治疗[A];2013年中国药学大会暨第十三届中国药师周论文集[C];2013年
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1 刘栋;畜禽补体C3d基因克隆及序列分析和重组鸡C3d免疫佐剂效果研究[D];山东农业大学;2010年
2 郭宪;抑制素基因工程疫苗的研究与应用[D];甘肃农业大学;2010年
3 王燕;两株海洋病原菌的分离鉴定、致病机理研究及三株海洋新菌的分类鉴定[D];中国海洋大学;2010年
4 关正君;樱桃番茄的HBsAg基因转化及其突变体特性研究[D];西北大学;2011年
5 张德庆;C3d分子佐剂核酸疫苗的构建与免疫效果研究[D];山东农业大学;2011年
6 孙丽媛;吉林省布鲁氏菌流行株种属鉴定及其耐药分子机制的研究[D];吉林大学;2011年
7 乔小放;RNA干扰SUMO1基因对结肠癌Hct116细胞生物学行为的影响[D];吉林大学;2011年
8 朱伟;摄食抑制因子NUCB2/Nesfatin-1对机体胰岛素敏感性的影响[D];重庆医科大学;2011年
9 冯燕梅;卡氏肺孢子菌p55-v3DNA疫苗的构建及其对大鼠免疫保护作用的研究[D];重庆医科大学;2011年
10 朱静媛;志贺菌属细菌整合子与多重耐药性研究[D];郑州大学;2010年
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1 周晓芬;金黄色葡萄球菌肠毒素B作为免疫佐剂的研究[D];华中农业大学;2010年
2 王正茂;单纯疱疹病毒糖蛋白哺乳动物细胞表达系的建立、纯化鉴定及免疫原性分析[D];南京医科大学;2010年
3 辛宁;PDX-1真核表达载体构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达[D];郑州大学;2010年
4 王翠;杜氏盐藻寡糖基转移酶亚基STT3a的基因克隆与功能分析[D];郑州大学;2010年
5 陆玉成;AMF基因在食管鳞癌细胞株中的表达及功能初步分析[D];郑州大学;2010年
6 张磊;杜氏盐藻(Dunaliella salina)GPI多克隆抗体的制备及其在MDCK细胞中的定位[D];郑州大学;2010年
7 冯玖玲;杜氏盐藻RbcS基因家族新成员的克隆及功能研究[D];郑州大学;2010年
8 刘卉;亚临床型生殖器疱疹患者脱排病毒与机体免疫状态的相关性研究[D];桂林医学院;2010年
9 李国庆;重组HIV-1 Vif 158的表达、复性与纯化研究[D];西北大学;2011年
10 郭金金;重组人肾素受体的表达、复性及同时纯化研究[D];西北大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杨雄虎,侯云德;我国单纯疱疹病毒Ⅰ型168株糖蛋白D基因的克隆及序列分析[J];病毒学报;1993年04期
2 杨天忠,王晓丹,崔虹,颜子颖,侯云德;单纯疱疹病毒Ⅰ型扩增子质粒载体的构建及LacZ基因的表达[J];病毒学报;1998年01期
3 邱晓颖,朱红惠,卢秋雁,丘元盛;质粒 pMC73A 在宿主细菌中的稳定性研究[J];高技术通讯;1998年06期
4 赖伟红,叶顺章,韩国柱;生殖器疱疹临床研究的某些新进展[J];国外医学.皮肤性病学分册;2000年03期
5 邬松林;单纯疱疹病毒1型载体[J];国外医学(分子生物学分册);1997年05期
6 喻启桂,汪美先;单纯疱疹病毒分子疫苗的研究进展[J];国外医学(免疫学分册);1989年06期
7 韩双艳,郭勇,杨慧兰,王捷,杨太成,冼江;新型DNA疫苗的构建及其对小鼠保护作用的研究[J];激光生物学报;2004年02期
8 余璐,马恒,朱军,杨守京;汉坦病毒诱导非洲绿猴肾上皮细胞热休克蛋白70的表达规律及意义[J];医学研究生学报;2004年12期
9 陈威巍;赫兢;辛绍杰;;丙型肝炎病毒DNA疫苗的研究进展[J];医学研究生学报;2006年05期
10 赖伟红;生殖器疱疹的研究进展[J];中国麻风皮肤病杂志;2002年04期
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中国期刊全文数据库 前10条
1 张效东;周宁新;徐迎新;李力;周丁华;陈军周;;DC-CIK过继转移联合微创技术治疗消化道肿瘤[J];北京师范大学学报(自然科学版);2010年04期
2 田志刚;杨贵贞;孙汭;李登华;张捷;路力生;张建华;崔正言;;人白细胞介素-6mRNA的富集及其特性研究[J];生物工程学报;1991年03期
3 汪礼坤;匡铭;彭宝岗;何强;李绍强;华赟鹏;陈斌;王晔;;Tregs调节小鼠肝癌局部引流淋巴结内免疫效应细胞的功能[J];中国病理生理杂志;2010年05期
4 褚忠强,倪铁华,韩凯;细菌核糖体制剂的免疫调节作用和抗肿瘤活性[J];复旦学报(自然科学版);1987年04期
5 曾凡慧;张昌菊;柳长柏;;次级淋巴组织趋化因子在肿瘤疫苗中的应用[J];生命的化学;2008年01期
6 Edelman R;盛永来;;口服免疫专题讨论会[J];国际生物制品学杂志;1989年05期
7 张嵩,王恩忠,白春学,徐永华;共培养的树突状细胞与CIK细胞的体外增殖和杀瘤活性研究[J];实验生物学报;2003年05期
8 ;简讯[J];福建医药杂志;1996年03期
9 柳钟勋;免疫佐剂在疫苗中的应用[J];国外医学.药学分册;1992年04期
10 邵文爱;李晓眠;;小鼠MIP-1α真核表达质粒的构建及在HSV-II核酸疫苗中的应用[J];细胞与分子免疫学杂志;2006年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 石永进;任汉云;岑溪南;朱强;虞积仁;;免疫效应细胞促进阿霉素诱导乳腺癌耐药细胞系凋亡[A];中华医学会第八次全国血液学学术会议论文汇编[C];2004年
2 石永进;虞积仁;朱平;岑溪南;马明信;董玉君;朱强;袁家颖;;免疫效应细胞降低乳腺癌耐药细胞系对阿霉素的耐受效应[A];中国抗癌协会妇科肿瘤专业委员会第六次全国学术会议论文汇编[C];2001年
3 陈海祥;周智东;郑云;夏大静;张立煌;;抗原致敏的DC联合CIK细胞对肺癌细胞杀伤作用的研究[A];浙江省免疫学会第六次学术研讨会论文汇编[C];2007年
4 李峰生;李伟;江其生;;核辐射对机体免疫系统的影响[A];第七届全军防原医学专业委员会第五届中国毒理学会放射毒理专业委员会学术会议论文汇编[C];2004年
5 陈晓黎;陈侃;何建军;来宝长;司履生;王一理;;肿瘤局部引流淋巴结免疫反应特性原位分析[A];中华医学会病理学分会2006年学术年会论文汇编[C];2006年
6 周光英;孙桂荣;胡艳梅;尹立波;;原发性肺癌患者自体CD_3AK细胞过继免疫治疗的临床观察[A];全国内科护理学术交流暨专题讲座会议、全国心脏内、外科专科护理学术会议论文汇编[C];2007年
7 吴云林;孙波;黄玮;;DCIK细胞抗肿瘤效应研究及前景[A];中国中西医结合学会第十八次全国消化系统疾病学术会议暨2006年全国中西医结合消化系统疾病进展学习班论文汇编[C];2006年
8 杨小军;潭琰;邹开芳;钱伟;侯晓华;;IL-17与溃疡性结肠炎炎症程度相关性的临床研究[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(下册)[C];2007年
9 李岩;;肿瘤生物治疗[A];山东抗癌协会肿瘤临床协作分会第二次学术年会山东生物医学工程学会生物定向治疗专业委员会第三次学术年会资料汇编[C];2009年
10 尹剑云;陈红风;;淫羊藿抗肿瘤作用机制的研究进展[A];第十一届全国中医及中西医结合乳腺病学术会议论文集[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前7条
1 黄显斌;唐明山;以“杀伤细胞”直攻肝癌病灶[N];中国医药报;2003年
2 ;单抗:造福人类指日可待[N];医药经济报;2002年
3 俞一群;KL型诊疗新武器可早期发现肿瘤[N];大众卫生报;2000年
4 周清华 侯梅;新型重组人肿瘤坏死因子有化疗增敏作用[N];中国中医药报;2003年
5 朱同玉 王宣传;破解器官移植的免疫难题[N];健康报;2010年
6 解放军第309医院教授 牛旗 整理 李杰;DC瘤苗推动肿瘤免疫治疗[N];健康报;2010年
7 记者 杨俊坚;生物制剂领跑风湿病领域[N];医药经济报;2010年
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1 齐桓;Ad介导G250基因转染DC激活免疫效应细胞治疗肾癌的实验研究[D];第一军医大学;2007年
2 张效东;消化道肿瘤姑息性术后自体抗原致敏DC-CIK过继转移治疗方法的建立与临床应用研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2009年
3 王立新;论白介素-10在抗肿瘤免疫中的作用[D];中国人民解放军军医进修学院;2010年
4 任鹏涛;肿瘤免疫治疗中CIK细胞、Treg细胞及其相关性研究[D];河北医科大学;2009年
5 张震宇;人白细胞介素2基因转导对卵巢癌细胞系SKOV3生物学特性的影响[D];中国协和医科大学;1997年
6 丁西来;Fas基因靶向转导卵巢癌细胞系SKOV_3的实验研究[D];中国协和医科大学;2004年
7 张赢予;特异性抗原激活的高效细胞毒性T淋巴细胞的实验研究[D];吉林大学;2007年
8 乔松林;猪IgG Fc受体及其介导PRRSV抗体依赖增强作用研究[D];河南农业大学;2009年
9 孙文欣;肿瘤趋化抗原DNA疫苗的抗肿瘤实验研究[D];中国协和医科大学;2004年
10 江汇涓;MDSC在骨髓增生异常综合征中免疫抑制作用的研究[D];天津医科大学;2013年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘秋霞;真核表达载体P~(EGFP-N1)-IL-2构建及CIK细胞的体外扩增[D];承德医学院;2007年
2 陆寒;抗ErbB2/CD16三价双特异性抗体的抗肿瘤作用[D];河南大学;2008年
3 鲁培;乳腺癌HIFU后免疫效应细胞及活化分子表达[D];重庆医科大学;2002年
4 杨柳晓;肿瘤浸润淋巴细胞与肝癌预后及其与“免疫微环境分子预测模型”的关系[D];复旦大学;2009年
5 陈海祥;抗原致敏DC联合CIK细胞对肺癌细胞杀伤作用的研究[D];浙江大学;2007年
6 杨葳;抗原负载的DC与CIK共培养后对MGC-803胃癌细胞株杀伤活性的研究[D];河北医科大学;2008年
7 付泽娴;胃癌中CD4~+CD25~+调节性T细胞的免疫抑制调节作用及其机理的实验研究[D];河北医科大学;2007年
8 刘岩青;源于健康人与肝癌患者CIK细胞的生物学特性及抗癌活性的对比研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2008年
9 朱必清;CD137信号对CIK细胞增殖和功能调节的研究[D];南京医科大学;2008年
10 任维凤;IL-2/抗IL-2抗体复合物体外诱导扩增外周血和骨髓CD56~+淋巴细胞的实验研究[D];青岛大学;2009年
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