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《泰山医学院》 2010年
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脱氧雪腐镰刀菌烯醇致小鼠骨骼畸形模型建立及差异蛋白的筛选

朱小明  
【摘要】:目的 建立脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol, DON)致小鼠骨骼畸形的模型;应用双向电泳技术筛选正常胎鼠骨骼与DON所致畸形骨骼的差异蛋白,为进一步阐明DON致骨骼畸形的分子机制奠定基础。 方法 1、腹腔注射四种剂量DON毒素染毒,获取胎鼠骨骼,骨骼软骨双染色法染色,解剖显微镜观察胎鼠骨骼软骨形态学变化。2、应用研磨法、超声裂解法和裂解液法提取胎鼠椎骨中骨骼与软骨的总蛋白。Bradford蛋白浓度测定试剂盒测定提取蛋白的浓度,确定上样量。3、使用Ettan IPGphor Isoelectric Focusing System和Hoefer SE600分离总蛋白,银染,获取双向电泳凝胶图谱,应用Image Master软件对正常对照组与10mg/kgDON处理组蛋白点间量变变化情况进行分析,筛选差异蛋白。 结果 1、DON对胎鼠体重和每胎产仔数的影响 毒素处理组胎鼠平均体重分别为4 mg/kg组1.10±0.09g、6.4 mg/kg组0.98±0.08g、8.4mg/kg组0.90±0.10 g和10 mg/kg组0.81±0.09 g。毒素处理组平均每胎产仔数分别为4 mg/kg组6.83±3.87只、6.4 mg/kg组6.00±3.63只、8.4 mg/kg组5.00±3.29只和10 mg/kg组5.17±2.71只。实验组胎鼠体重和每胎产仔数与空白对照组相比,差异均有统计学意义,P0.05。 2、DON对胎鼠骨骼软骨的影响 实验共出现35种以上骨骼软骨畸形,以中轴骨骼畸形为主,四肢骨骼软骨畸形次之,多发性骨骼畸形多见。其中颈部共出现9种骨骼软骨畸形,以颈椎体融合、颈椎体缺失、颈椎弓融合、颈肋为主。胸骨肋骨共出现6种畸形,包括胸骨缺失、肋骨缺失、肋骨胸骨不对称融合、融合肋、两侧肋骨数目不一、分叉肋,该部位6种畸形均多见。胸椎腰椎共出现15种畸形,以胸椎椎体缺失、腰椎椎弓融合、胸椎椎体碎裂为主。实验还出现3种四肢部位畸形、2种尾部畸形和多种其它部位的畸形。 四种剂量中10 mg/kg组引起的畸形种类最多、畸形程度最严重。颈部畸形中10mg/kg组颈椎体融合畸形率、颈椎体缺失畸形率、颈椎弓融合畸形率、颈肋畸形率均高于两对照组,差异有统计学意义,P0.05。胸骨肋骨畸形中10 mg/kg组胸骨缺失畸形率、肋骨缺失畸形率、融合肋畸形率、两侧肋骨数目不一畸形率、分叉肋畸形率、不对称胸骨连接畸形率均高于两对照组,差异有统计学意义,P0.05。胸椎腰椎畸形中10 mg/kg组胸椎椎体缺失畸形率和腰椎椎弓融合畸形率均高于两对照组,差异有统计学意义,P0.05。此外10 mg/kg组六趾畸形率、卷尾畸形率均高于两对照组,差异有统计学意义,P0.05。 3、DON所致畸形骨骼软骨蛋白的双向电泳实验结果 成功提取了胎鼠脊椎中骨骼软骨的总蛋白,获得了10mg/kgDON致小鼠骨骼软骨畸形的双向电泳图谱,经Image Master软件分析共筛选到22个差异蛋白点,其中上调蛋白点3个,下调蛋白点19个。 结论 1、DON可降低孕鼠每胎产仔数和胎鼠体重,具有胚胎毒性; 2、DON具有致小鼠骨骼畸形的作用,可诱导小鼠产生多种骨骼软骨畸形,以中轴骨骼畸形为主。腹腔注射10mg/kgDON导致多发性骨骼软骨畸形,可用于制备胎鼠骨骼畸形模型; 3、应用双向电泳技术获得DON致小鼠畸形骨骼软骨蛋白的电泳凝胶图谱,筛选出22个差异蛋白点,其中上调蛋白点3个,下调蛋白点19个,为进一步研究DON致骨骼畸形的机制奠定基础。
【学位授予单位】:泰山医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R682

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【参考文献】
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