热性、寒性中药对大鼠肝全基因表达谱影响的研究
【摘要】：目的：本研究旨在利用基因芯片技术探讨热性中药附子、干姜,寒性中药黄连、大黄对大鼠肝全基因表达谱的影响,以期从全基因组水平解析热性及寒性中药药性作用机制,探讨寒热中药属性界定的可能依据和中药药性理论研究的思路与方法。
方法：SPF级Wistar雄性大鼠,50只,随机分为附子组、干姜组、黄连组、大黄组和空白对照组,各中药组分别灌胃附子水煎浓缩液1ml(含生药0.675g)/100g,干姜水煎浓缩液1ml(含生药0.405g)/100g,黄连水煎浓缩液1ml(含生药0.225g)/100g,大黄水煎浓缩液1ml(含生药1.35g)/100g,对照组予等容量生理盐水。1次/日,连续给药20天。给药20天后,提取肝组织总RNA,应用Illumina公司RatRef-12基因芯片检测各组大鼠肝脏基因表达,筛选差异表达基因,进行基因聚类分析和功能分类注释。并选择部分差异基因进行荧光实时定量PCR实验验证芯片结果的准确性。
结果：附子组与正常组比较有592条基因差异表达,按照Gene Ontology (GO)分类标准进行基因功能注释,查询到48项显著性基因功能,主要涉及代谢过程、催化活性、免疫反应、磷酸盐运输等7个GO功能亚类,代谢过程为最显著性基因功能亚类。干姜组与正常组比较有1189条基因差异表达,查询到98项显著性基因功能,主要涉及代谢过程、免疫反应、催化活性、结合活性等8个GO功能亚类,代谢过程为最显著性基因功能亚类。附子、干姜热性中药组与正常组比较筛选出337条共同差异基因,查询到60项显著性基因功能,主要涉及代谢过程、免疫反应、催化活性、离子转运等7个GO功能亚类,代谢过程为最显著性基因功能亚类。黄连组与正常组比较有399条基因差异表达,查询到44项显著性基因功能,主要涉及防御反应、趋化、代谢过程、免疫反应等7个GO功能亚类,防御反应为最显著性基因功能亚类。大黄组与正常组比较有398条基因差异表达,查询到32项显著性基因功能,主要涉及免疫系统过程、代谢过程、防御反应、催化活性等6个GO功能亚类,免疫过程、代谢过程为较显著性基因功能亚类。黄连、大黄寒性中药组与正常组比较有141条共同差异表达基因,查询到13项显著性基因功能,主要涉及铁离子结合、有机酸代谢和应答外部刺激3个GO功能亚类。
结论：热性中药可通过调控机体代谢及催化活性相关基因的表达,影响糖、脂类和氨基酸代谢过程,促进生物体内能量的产生、贮存和利用；通过调控免疫相关基因的表达,发挥一定的免疫调节作用,这可能是温热性中药“温阳散寒”、临床用于寒证治疗的主要分子机制,可以作为热性中药药性界定的参考依据之一。寒性中药主要通过调控应答刺激、廿碳不饱和脂肪酸代谢、细胞凋亡及免疫反应相关基因的表达,发挥一定的抗炎、抗菌、调控细胞凋亡等作用,降低机体功能的病理性亢进,增强机体的防御和应答功能,这可能是寒性中药“清热泻火”、临床用治热证的主要分子机制,可以作为寒性中药药性界定的参考依据之一。
【关键词】：中药四性 基因芯片 实验研究 【学位授予单位】：山东中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R285.5
【目录】：
- 提要3-5
- Abstract5-10
- 引言10-12
- 第一部分 寒热中药对大鼠肝全基因表达谱影响的研究12-47
- 1 实验材料12-13
- 1.1 实验动物12
- 1.2 实验用中药12
- 1.3 基因芯片12
- 1.4 主要试剂12
- 1.5 主要实验仪器12-13
- 2 实验方法13-18
- 2.1 中药水煎剂的制备13-14
- 2.2 主要溶液配制14-15
- 2.3 实验分组与给药方法15
- 2.4 肝组织总RNA提取与质量检测15-16
- 2.5 RNA扩增16-17
- 2.6 样本标记和杂交17-18
- 2.7 基因芯片数据处理与分析18
- 3 实验结果18-47
- 3.1 大鼠肝组织RNA提取质量检测结果18-20
- 3.2 芯片扫描图20-21
- 3.3 对照组与实验组信号强度数据散点图21-23
- 3.4 基因芯片杂交结果23
- 3.5 聚类分析23-26
- 3.6 附子组、干姜组与正常组比较差异表达基因GO分析26-34
- 3.7 热性中药组与正常组比较共同差异表达基因GO分析34-37
- 3.8 黄连组、大黄组与正常组比较差异表达基因GO分析37-44
- 3.9 寒性中药组与正常组比较共同差异表达基因GO分析44-47
- 第二部分 实时荧光定量PCR实验验证基因芯片47-54
- 1 实验材料47
- 1.1 实验材料47
- 1.2 主要试剂47
- 1.3 主要仪器47
- 2 实验方法47-49
- 2.1 基因引物序列的设计与合成47-48
- 2.2 实时荧光定量PCR实验步骤48-49
- 2.3 数据处理49
- 3 实验结果49-53
- 3.1 基因扩增曲线49-51
- 3.2 基因熔解曲线51-53
- 3.3 数据分析结果53
- 4 实验结论53-54
- 第三部分 讨论54-91
- 1 中药四性理论的现代研究进展54-63
- 1.1 中药四性的现代文献学研究54-55
- 1.2 炮制方法与四性关系的研究55
- 1.3 物质基础与四性关系的研究55-57
- 1.4 药效学与四性关系的研究57-61
- 1.5 生物物理学与四性关系的研究61-62
- 1.6 中药四性研究新假说的提出62-63
- 2 附子、干姜对大鼠肝全基因表达谱的影响63-78
- 2.1 附子对大鼠肝全基因表达谱的影响63-67
- 2.2 干姜对大鼠肝全基因表达谱的影响67-73
- 2.3 热性中药对大鼠肝全基因表达谱的影响73-78
- 3 黄连、大黄对大鼠肝全基因表达谱的影响78-87
- 3.1 黄连对大鼠肝全基因表达谱的影响78-81
- 3.2 大黄对大鼠肝全基因表达谱的影响81-85
- 3.3 寒性中药对大鼠肝全基因表达谱的影响85-87
- 4 热性、寒性中药对大鼠肝全基因表达谱的影响87-91
- 结语91-93
- 参考文献93-103
- 附录103-107
- 1 中英文名词对照103-105
- 2 照片105-106
- 3 博士在读期间公开发表的学术论文106-107
- 致谢107-108
- 查新报告108-116
- 详细摘要116-122
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|
| 1 |
管竞环,李恩宽,薛莎,马定品,江宝林,颜约义;植物类中药四性与无机元素关系的初步研究[J];中国医药学报;1990年05期 |
| 2 |
梁月华,王晶,谢竹藩;寒凉药与温热药对交感神经肾上腺及代谢机能的影响[J];北京医科大学学报;1987年01期 |
| 3 |
郑俊华,楼之岑,史录文,鲁纯素;大黄抗超氧负离子自由基的活性研究[J];北京医科大学学报;1989年05期 |
| 4 |
孙守勋;蒲晓允;;Toll样受体2的研究进展[J];重庆医学;2008年05期 |
| 5 |
马森;;谷胱甘肽过氧化物酶和谷胱甘肽转硫酶研究进展[J];动物医学进展;2008年10期 |
| 6 |
祁俊生,徐辉碧,周井炎,陆晓华,杨祥良,管竞环;植物类中药中微量元素的因子分析和聚类分析[J];分析化学;1998年11期 |
| 7 |
刘德辉;徐蕙;黄毓茂;;抗菌肽的生物活性及在畜牧生产中的应用前景[J];广东畜牧兽医科技;2009年03期 |
| 8 |
方显锋;葡萄糖-6-磷酸酶与糖尿病[J];国外医学.内分泌学分册;2003年05期 |
| 9 |
赵树铭;磷脂酶A_2测定方法进展[J];国外医学.临床生物化学与检验学分册;1995年06期 |
| 10 |
朱正美;;磷脂酰胆碱的生物合成及其调节(一)[J];国外医学(分子生物学分册);1985年05期 |
|
|
|
|
|
| 1 |
辛力,王彦泓,李伟;极替沙星遗传毒性及致突变作用的研究[J];癌变.畸变.突变;2002年01期 |
| 2 |
孙华明,敖琳,杨录军,刘胜学,周紫垣,陈国华,周利军,曹佳;那格列奈的致突变作用研究[J];癌变.畸变.突变;2002年01期 |
| 3 |
刘晓秋,王荣先,田庆伟;放射增效剂Ⅱ号致突变性研究[J];癌变.畸变.突变;2003年01期 |
| 4 |
单保恩,梁文杰,任凤芝,朱京童;中药北豆根抗肿瘤活性的体外实验[J];癌变.畸变.突变;2004年05期 |
| 5 |
林飞;梁怿;吕廉;杨文婕;杨艳华;;富硒大蒜对实验动物上消化道的刺激作用及对胃液成分的影响[J];癌变.畸变.突变;2008年04期 |
| 6 |
陈一村;蔡聪艺;冀宾;高分飞;张艳美;黄展勤;白雪婷;石刚刚;;东莨菪亭和橙皮素联用的镇痛效果定量分析[J];癌变·畸变·突变;2010年03期 |
| 7 |
吴勃岩,王华江,赵玉桢,段玉芹,孙玉珍;赤包根茎醇提取物致突变性研究[J];癌变.畸变.突变;1998年03期 |
| 8 |
冯平安,叶寿山,韩传环,王萍,倪光玉;复方鱼腥草滴丸解热抗炎作用实验研究[J];安徽教育学院学报;2002年06期 |
| 9 |
王艳苹;陈燕;;四氮杂冠醚铜配合物对免疫功能低下小鼠碳粒廓清水平的影响[J];合肥师范学院学报;2011年06期 |
| 10 |
宋挺;;系统生物学在中药研究中的应用[J];合肥师范学院学报;2011年06期 |
|
|
|
|
|
| 1 |
岳昌武;莫宁萍;刘坤祥;凌锌;曾霓;;抗菌肽的结构特点·作用机理及其应用前景[J];安徽农业科学;2008年05期 |
| 2 |
夏春;白鲢MHC Iα2基因克隆及序列分析[J];动物学报;1999年03期 |
| 3 |
朱新华,沈凌,王曙光;阳虚症小鼠环核苷酸系统反应性变化的研究[J];标记免疫分析与临床;2002年04期 |
| 4 |
闫慧英,张杰梅,乔晓君;姜和蒜抑制活性氧作用的研究[J];包头医学院学报;1997年01期 |
| 5 |
管竞环,李恩宽,薛莎,马定品,江宝林,颜约义;植物类中药四性与无机元素关系的初步研究[J];中国医药学报;1990年05期 |
| 6 |
梁月华,王晶,谢竹藩;寒凉药与温热药对交感神经肾上腺及代谢机能的影响[J];北京医科大学学报;1987年01期 |
| 7 |
杨海灵;聂力嘉;朱圣庚;周先碗;;谷胱甘肽硫转移酶结构与功能研究进展[J];成都大学学报(自然科学版);2006年01期 |
| 8 |
严石林,张连文,王米渠,袁世宏,朱永光,吴斌,郑文博;肾虚证辨证因子等级评判操作标准的研究[J];成都中医药大学学报;2001年01期 |
| 9 |
韩公羽,梁华清,廖耀忠,刘明珠,戴富宝;四川江油附子新的强心成分[J];第二军医大学学报;1989年01期 |
| 10 |
王莉,吴玉章,林治华,石统东,周伟,贾正才,邹丽云;穿膜序列对MHC-Ⅰ类限制性CTL表位呈递影响的研究[J];第二军医大学学报;2002年10期 |
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