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《山东中医药大学》 2012年
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补肾对超排卵周期颗粒细胞GDNF、GFR_α-1表达的影响

陈艳花  
【摘要】:目的:观察补肾中药对超排卵周期颗粒细胞胶质细胞源性神经营养因子(glial cellline-derived neurotrophic factor,GDNF)、GDNF家族特异性受体α-1(GDNF familyreceptor α-1,GFRα-1)的影响,从卵母细胞生殖泡裂解、第一极体的排出及其成熟旁分泌调节的角度,探讨补肾改善卵母细胞质量,提高控制性超排卵妊娠结局的机制。 方法:临床研究:将80例因输卵管因素行体外受精-胚胎移植(in vitrofertilization-embryo transfer,IVF-ET)的患者按照随机数字表法分为治疗组40例(二至天癸颗粒联合促性腺激素(Gn),40个周期)和对照组40例(安慰剂颗粒联合Gn,40个周期)。采用IVF-ET治疗中目前常规应用的控制性超排卵方案,治疗组在IVF治疗周期加用二至天癸颗粒;对照组则加用安慰剂颗粒。观察临床肾虚证候积分变化情况,Gn用量及用药天数,取卵数、优质卵率、受精率、优质胚胎率、临床妊娠率及颗粒细胞GDNF、GFR α-1mRNA的表达情况。同时行颗粒细胞体外培养24h、48h后观察E2、P的分泌情况以了解颗粒细胞的分泌功能。 实验研究:将165只8-9周龄、健康昆明种雌性小鼠按照随机法分为空白组、治疗组及对照组,每组各55只。治疗组及对照组进行控制性超排卵,连续灌胃给药(治疗组用二至天癸颗粒,对照组用等量生理盐水),三组又各分为1、2两组。1组50只脱颈处死小鼠,取生发泡(GV)期裸卵(DOs),观察生殖泡破裂(GVBD)和第一极体(PB1)释放;之后成熟卵母细胞行GDNF、GFR α-1mRNA的表达检测;2组各5只雌雄鼠合笼饲养,取受精卵,观察卵裂率、成胚率。 结果:临床研究:治疗组患者肾虚症状得到明显改善,治疗组Gn用量及用药天数均低于对照组,单个卵雌激素(E_2/卵泡)水平高于对照组,优质卵率、优质胚胎率及临床妊娠率均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);治疗组颗粒细胞培养24h、48h生长情况,培养24h、48h后收集的培养液E_2、P检测及颗粒细胞GDNF、GFR α-1mRNA表达均优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。实验研究:治疗组GV期卵母细胞GVBD率、PB1排出率均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);各组小鼠受精卵卵裂率及成胚率比较,对照组低于空白组,治疗组高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组卵母细胞GFR α-1mRNA的表达高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。 结论:1.获得与既往国家级和省级课题相同的临床妊娠率(54%左右)。在IVF-ET治疗周期,应用补肾中药可明显改善患者肾虚症状,减少Gn用量,提高优质卵率、优质胚胎率,进而改善临床妊娠率,是临床常用的有效药物。2.补肾中药提高颗粒细胞GDNF、GFRα-1mRNA的表达,改善颗粒细胞分泌功能,这可能是补肾中药改善IVF结局的机制之一。3.补肾中药促进小鼠GV期卵母细胞生殖泡的破裂(GVBD)和第一极体(PB1)的排出;提高小鼠卵母细胞GFRα-1mRNA的表达,并改善了小鼠受精卵的卵裂、形成囊胚的能力。推断:补肾中药提高颗粒细胞GDNF、GFRα-1mRNA的表达,提高小鼠卵母细胞GFRα-1mRNA的表达,促进卵母细胞GVBD和PB1的排出,从而改善了卵母细胞成熟度,提高卵细胞质量,从而提高胚胎质量及临床妊娠率。这可能又是补肾中药改善IVF结局的机制之一。
【学位授予单位】:山东中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R271.9

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