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《山东中医药大学》 2017年
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肥大细胞功能对脐疗治疗寒凝血瘀型痛经的作用机制研究

李玉婕  
【摘要】:目的1.观察脐疗对寒凝血瘀型痛经模型大鼠扭体反应的影响,为脐疗的镇痛效应提供实验室依据。2.观察寒凝血瘀型痛经模型大鼠神阙穴区和子宫肥大细胞功能与脐疗镇痛效应的关系。3.观察脐疗对寒凝血瘀型痛经模型大鼠子宫肥大细胞受体TLR2及TLR4表达水平的影响,探索脐疗镇痛效应信号通路。方法:将90只成年雌性wistar大鼠随机分为9组,对照组、模型组、药物贴脐组、隔药灸脐组、艾条灸脐组、色甘酸钠+模型组、色甘酸钠+药物贴脐组、色甘酸钠+隔药灸脐组、色甘酸钠+艾条灸脐组。除对照组外,其他各组均采用全身冷冻法结合苯甲酸雌二醇注射法构建寒凝血瘀型痛经模型,并于造模第6天股部皮下注射苯甲酸雌二醇后,予相应的脐疗治疗,注射色甘酸钠组需于脐疗前神阙穴区皮下注射色甘酸钠20ul/次,脐疗每日1次,共治疗5日。第10日治疗结束后,给每组大鼠尾静脉注射缩宫素,然后观察各组大鼠扭体反应情况。采用改良甲苯胺蓝染色法进行大鼠穴区、子宫肥大细胞计数、并计算穴区、子宫肥大细胞脱颗粒率,观察脐疗对肥大细胞功能的影响。通过蛋白质免疫印迹法、实时荧光定量PCR技术,对各组大鼠子宫TLR2、TLR4蛋白及TLR2mRNA、TLR4mRNA进行定量检测,观察脐疗对TLR2、TLR4受体与肥大细胞的相关性的影响。结果1.脐疗对寒凝血瘀型痛经大鼠寒凝血瘀状态及扭体反应的影响与模型组比较,脐疗组(药物贴脐组、隔药灸脐组、艾条灸脐组)可明显减轻寒凝血瘀状态。行为学方面,脐疗组可延长扭体潜伏期、减少扭体次数、降低扭体评分,隔药灸脐组优于药物贴脐组与艾条灸脐组(P0.05);肥大细胞功能受抑制后,色甘酸钠+模型组扭体反应较模型组减弱(P0.05),色甘酸钠+脐疗组(色甘酸钠+药物贴脐组、色甘酸钠+隔药灸脐组、色甘酸钠+艾条灸脐组)镇痛效应受到不同程度的削弱,扭体反应增强,尤其是色甘酸钠+隔药灸脐组(P0.01)。2.脐疗对寒凝血瘀型痛经大鼠穴区、子宫组织肥大细胞功能的影响与对照组与模型组比较,脐疗组穴区肥大细胞计数增多、脱颗粒率增高(p0.05)。脐疗组间穴区肥大细胞计数比较无明显差异(P0.05);穴区肥大细胞脱颗粒率方面,隔药灸脐组明显多于药物贴脐组与艾条灸脐组(P0.01)。肥大细胞功能受抑制后,色甘酸钠+脐疗组穴区肥大细胞计数、脱颗粒率低于脐疗组(P0.05)。与模型组比较,脐疗组子宫肥大细胞计数、肥大细胞脱颗粒率明显减少(P0.01)。脐疗组间比较,隔药灸脐组子宫肥大细胞脱颗粒率低于药物贴脐组与艾条灸脐组(P0.05)。注射色甘酸钠后,色甘酸钠+模型组子宫肥大细胞计数、脱颗粒率低于模型组(P0.05),色甘酸钠+脐疗组子宫肥大细胞、脱颗粒率增加,尤其是色甘酸钠+隔药灸脐组与色甘酸钠+艾条灸脐组(P0.05),但均不高于色甘酸钠+模型组。3.Western blot技术观察脐疗对寒凝血瘀型痛经大鼠子宫TLR2、TLR4蛋白表达量的影响与对照组比较,模型组子宫TLR2、TLR4蛋白表达量明显增多(P0.01);脐疗组TLR2、TLR4表达量均有不同程度增高,但均低于模型组(P0.01)。脐疗组间比较,药物贴脐组最多,其次为艾条灸脐组,隔药灸脐组最少(P0.05)。注射色甘酸钠后,色甘酸钠+模型组TLR2、TLR4受体蛋白表达量明显低于模型组(P0.01)。色甘酸钠+脐疗组TLR2受体蛋白表达量高于脐疗组(P0.05),但不高于色甘酸钠+模型组,色甘酸钠+脐疗组间TLR2受体蛋白表达量比较无差异。色甘酸钠+隔药灸脐组、色甘酸钠+艾条灸脐组TLR4受体表达量增高,但不高于色甘酸钠+模型组。色甘酸钠+脐疗组间比较,色甘酸钠+隔药灸脐组TLR4受体表达量最低(P0.05)。4.qRT-PCR技术观察脐疗对寒凝血瘀型痛经大鼠子宫TLR2mRNA、TLR4mRNA表达量的影响模型组与脐疗组TLR2mRNA、TLR4mRNA表达量明显多于对照组(P0.05),脐疗组TLR2mRNA、TLR4mRNA表达量低于模型组(P0.01)。脐疗组间比较,隔药灸脐组与艾条灸脐组TLR2mRNA表达量低于药物贴脐组(P0.01),隔药灸脐组TLR4mRNA表达量最低(P0.05)。注射色甘酸钠后,色甘酸钠+模型组TLR2mRNA、TLR4mRNA表达量低于模型组(P0.01)。色甘酸钠+脐疗组TLR2mRNA、TLR4mRNA表达量均有不同程度的增高,但不高于色甘酸钠+模型组。色甘酸钠+脐疗组间比较,色甘酸钠+隔药灸脐组与色甘酸钠+艾条灸脐组TLR2mRNA、TLR4mRNA表达量低于色甘酸钠+药物贴脐组(P0.05),色甘酸钠+隔药灸脐组与色甘酸钠+艾条灸脐组TLR2mRNA、TLR4mRNA表达量无差异。结论1.脐疗可明显改善寒凝血瘀型痛经大鼠的寒凝血瘀状态、减轻扭体反应,具有显著的镇痛效应。2.神阙穴区肥大细胞在脐疗镇痛效应的产生过程中起重要作用,穴区肥大细胞脱颗粒参与了脐疗镇痛效应的始动过程,而色甘酸钠则对脐疗信号的转导有抑制作用。3.脐疗通过降低子宫TLR2、TLR4受体表达量抑制其介导肥大细胞参与免疫应答,达到对痛经的镇痛效应,而色甘酸钠通过抑制穴区肥大细胞功能,使脐疗的镇痛效应减弱。4.隔药灸脐法在激活神阙穴区肥大细胞,缓解寒凝血瘀型痛经疼痛症状方面优于药物贴脐法、艾条灸脐法。
【学位授予单位】:山东中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R271.113

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