行IVF-ET高龄妇女肾气虚的机理探讨与二至天癸颗粒疗效评估
【摘要】：
目的:采用生殖医学的相关观察指标,探讨“五七”妇女肾气虚及二至天癸颗粒提高高龄不孕妇女卵巢反应性的机理。
方法:临床研究将60例参加体外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期的高龄不孕妇女随机分为两组,选用控制性超排卵短方案。分别用二至天癸颗粒联合Gn(治疗组,30例)和单用Gn(对照组,30例)治疗,观察临床肾虚症状改善情况,分别对促性腺激素(FSH)的用量,不同时期血清抑制素B(INHB)水平,HCG注射日子宫内膜和卵泡膜血流测定,获卵数,优质卵率,受精率,卵裂率,优质胚胎率,妊娠率和卵泡液E2、FSH、INHB的表达进行评定。实验研究采用12月龄的,阴道细胞学表现动情期延长的昆明雌性小鼠作为初老小鼠模型。随机分为模型对照组,二至天癸颗粒高、中、低剂量组,阳性对照组,采用血清药理学方法,以不同含药量的初老小鼠血清,与体外培养的小鼠颗粒细胞共同培养48h,收集培养液,测定其E2、孕酮(P)以及INHB的含量;观察各组小鼠卵巢组织形态学改变并且采用原位杂交方法检测卵巢颗粒细胞InhibinαmRNA、FSHRmRNA的表达量。
结果:临床研究:中西药物联合应用方案与单用西药方案比较,在不影响临床诱导排卵疗效的前提下,可明显改善患者肾虚症状,与促排卵西药发挥协同作用,减少药物的周期用药量及用药天数,缩短治疗周期,并降低患者的经济负担。能协调生殖内分泌激素环境,通过对卵泡液中细胞因子INHB表达的调控,及增加卵泡膜及子宫内膜血流灌注,以提高高龄不孕妇女卵细胞质量及改善子宫内膜容受性。发现肾虚证候与FSH、INHB、AMH等客观指标均存在相关性。实验研究:二至天癸颗粒含药血清可明显增加颗粒细胞雌激素、孕酮、抑制素B的分泌量,且有一定的剂量依从性。与阳性对照组比较,二至天癸颗粒组能促进生长卵泡生长,上调卵巢颗粒细胞InhibinαmRNA、FSHRmRNA的表达而促进颗粒细胞的功能,提高卵巢储备功能。
结论:二至天癸颗粒配合Gn可明显减少r-FSH用量,提高卵巢反应,改善卵子质量,提高妊娠率,提示二至天癸颗粒提高高龄不孕妇女卵巢反应性的机理与其增加颗粒细胞雌激素、孕酮、抑制素B的分泌量和上调InhibinαmRNA、FSHRmRNA的表达有关。推论INHB、AMH增高是高龄妇女出现肾虚证候的原因,是“五七阳明脉衰”的现代辩证依据,进一步丰富了“肾主生殖”的内涵。
【关键词】：体外受精-胚胎移植 二至天癸颗粒 卵巢储备 卵巢反应 卵细胞质量 细胞因子 卵泡液
【学位授予单位】：山东中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R714.8;R271.9
【目录】：
【学位授予单位】：山东中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2008
【分类号】：R714.8;R271.9
【目录】：
- 提要3-4
- Abstract4-11
- 引言11-14
- 第一部分 课题研究背景14-20
- 一、卵巢储备降低的判断14-17
- （一） 年龄14
- （二） 基础雌二醇（estradiol,E_2）水平14
- （三） 基础FSH 水平（basal FSH bFSH）14
- （四） 血清抑制素B(inhibinB，INHB)水平14-15
- （五） 抗苗勒管激素（anti-mullerian hormone AMH）15
- （六） 窦卵泡计数（antral follicle count AFC）15-16
- （七） 卵巢体积测定16
- （八） 早卵泡期卵巢基质血流观察16
- （九） 克罗米芬(Clomifene CC)刺激试验16
- （十） 促性腺激素释放激素激动剂(GnRH-a)刺激试验（GnRHa stimulation test GAST)16-17
- （十一） Gn 刺激实验17
- 二、中医药在体外受精－胚胎移植中的作用17
- 三、微观辨证研究现状17-18
- 四、展望18-20
- 第二部分 临床研究20-52
- 一、研究对象20-22
- （一） 病例来源20
- （二） 诊断标准20-21
- （三） 病例选择标准21
- （四） 患者准备21-22
- 二、研究方法22-26
- （一） 临床分组22
- （二） 药物、实验室设备及培养液22-23
- （三） 方法23-26
- （四） 观察指标26
- （五） 统计学分析26
- 三、一般资料26-28
- （一） 治疗组与对照组患者年龄（岁）分布比较（见表1 ）26-27
- （三） 治疗组与对照组患者病史比较（见表3 ）27
- （四） 治疗组与对照组患者治疗前肾虚证候积分比较（见表4 ）27
- （五） 治疗组与对照组患者IVF 启动日基础激素水平比较（见表5 ）27-28
- （六） 治疗组与对照组患者IVF 启动日子宫内膜厚度和子宫及卵巢动脉搏动指数比较（见表6）28
- 四、研究结果28-34
- （一） 治疗组与对照组患者治疗前后肾虚证候积分变化比较（见表7 ）28-29
- （二） 治疗组与对照组患者治疗前肾虚证候积分与IVF 启动日血清INHB、AMH、FSH 相关性比较（见表8）29
- （三） 治疗组与对照组患者r-FSH 用药支数及天数比较（见表9）29
- （四） 治疗组与对照组患者注射FSH 第5 天血清内分泌比较（见表10 ）29
- （五） 治疗组与对照组患者HCG 注射日E2水平及及E2/卵子比较（见表11 ）29-30
- （六） 取卵数与HCG 注射日血清E2水平相关性分析（见表12）30
- （七） 治疗组与对照组患者HCG 注射日卵泡膜及子宫内膜血流比较（见表13）30
- （八） 治疗组与对照组患者取卵数、优质卵率、受精率、卵裂率、优质胚胎率比较（见表14）30-31
- （九） 治疗组与对照组患者卵泡液E2、FSH、INHB 比较（见表15）31
- （十） 妊娠组与非妊娠组卵泡液INHB、E2比较（见表16）31
- （十一） 治疗组与对照组患者妊娠率及临床妊娠率比较（见表17 ）31-32
- （十二） 卵泡液INHB 水平与获卵数、优质胚胎率、卵泡液E2相关性分析（见表18)32
- （十三） 注射FSH 第5 天血清INHB 水平与获卵数、r-FSH 总用量、血清E2水平相关性分析（见表19）32-34
- 五、讨论34-51
- （一） 祖国医学对“五七”至“七七”妇女生殖功能的认识34-35
- （二） 高龄妇女降调节后中医病机探讨35-36
- （三） 现代医学对妇女生殖衰老现象的认识36-37
- （四） 二至天癸颗粒组方分析37-39
- （五） 临床资料分析39-51
- 六、小结51-52
- 第三部分 实验研究52-66
- 实验一 二至天癸颗粒含药血清对初老小鼠卵巢颗粒细胞分泌功能的影响52-56
- 一、实验材料52-53
- （一） 实验动物52
- （二） 药物52
- （三） 试剂52-53
- （四） 仪器53
- 二、实验方法53-55
- （一） 造模方法53-54
- （二） 小鼠分组、给药方法与剂量54
- （三） 含药血清及正常血清的制备及灭活54
- （四） 颗粒细胞收集54-55
- （五） 颗粒细胞培养及分组55
- （六） 培养液中E_2、P 和INHB 含量的测定55
- （七） 统计学分析55
- 三、实验结果55-56
- 实验二 二至天癸颗粒对初老小鼠卵巢FSHRmRNA 及INHBαmRNA 表达的影响56-66
- 一、实验材料与方法56-57
- （一） 实验动物56
- （二） 药物56
- （三） 原位杂交试剂56-57
- （四） 仪器57
- 二、实验方法57-59
- （一） 造模方法、分组与药物剂量57
- （二） 给药方法57
- （三） 标本获取57
- （四） HE 染色57-58
- （五） 原位杂交方法58-59
- （六） 统计学分析59
- 三、实验结果59-60
- （一） 各组小鼠卵泡数及黄体数比较（见表21）59-60
- （二） 小鼠卵巢InhibinαmRNA、FSHRm RNA 表达的定位分析60
- （三） 各组小鼠卵巢InhibinαmRNA、FSHRmRNA 的定量分析（见表22）60
- 四、讨论60-66
- （一） 实验方法的选择60-61
- （二） 二至天癸颗粒含药血清对GC 分泌功能的影响61-62
- （三） 二至天癸颗粒对卵巢形态学的影响意义62
- （四） 二至天癸颗粒对颗粒细胞FSHRmRNA 表达的影响62-64
- （五） 二至天癸颗粒对颗粒细胞InhibinαmRNA 表达的影响64-66
- 结语66-68
- 参考文献68-75
- 综述75-93
- 附录93-100
- 致谢100-101
- 查新报告101-108
- 详细摘要108-120
| 【引证文献】 | ||
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| 【参考文献】 | ||
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| 【共引文献】 | ||
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| 【同被引文献】 | ||
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| 【二级参考文献】 | ||
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| 【相似文献】 | ||
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