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《山东师范大学》 2011年
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阿片肽在束缚—浸水应激致大鼠胃黏膜损伤中的作用的研究

李鹏飞  
【摘要】:在大鼠束缚-浸水应激(restmint water-immersion stress,RWIS)导致胃溃疡的过程中,下丘脑视上核、室旁核、延髓的迷走复合体等核团的神经元参与了调节。在这些参与反应的神经元中,已经确定有精氨酸加压素(AVP)能、催产素(OT)能、儿茶酚胺(NE)能神经元,但是他们只占了参与反应神经元的一部分。那么其余神经元是何种类型?阿片肽能神经元是否参与反应?未见报道。 前人的研究表明脑啡肽在纹状体、下丘脑、间脑、脑干和脊髓内许多部位都有分布,在下丘脑,脑啡肽通常与AVP、OT神经递质共存。腹腔注射甲硫-脑啡肽类似物,可预防冷束缚应激引起的胃黏膜损伤。可见,甲硫-脑啡肽(M-ENK,阿片肽的一种)对胃黏膜损伤有重要的调节作用。因此,本研究采用甲硫-脑啡肽与Fos蛋白免疫双标和脑内微量注射的技术,探索参与RWIS反应的神经元中有无甲硫-脑啡肽能神经元,该神经元活动对应激致胃黏膜损伤的作用。本研究分成四个部分: 第一部分,不同方法预处理对RWIS大鼠中枢内M-ENK表达的影响。分别采用腹腔注射生理盐水、秋水仙素1mg/k(g体重)和侧脑室注射秋水仙素100μg/kg(体重)的方法对大鼠进行预处理,观察不同的处理方法对大鼠M-ENK免疫组化阳性表达的影响。结果发现,腹腔注射与侧脑室注射效果相似,均能明显的显示出神经元胞体。生理盐水组则不能显示出胞体。由此我们选择方法简便易行的腹腔注射法进行后续试验。 第二部分,RWIS对大鼠下丘脑、延髓内M-ENK表达的影响。采用免疫组化单标及双标技术,分别确定RWIS中下丘脑视上核,室旁核等,脑干迷走复合体内M-ENK阳性表达及M-ENK+Fos蛋白表达情况。结果显示,在迷走背核,孤束核,疑核有明显的M-ENK免疫阳性表达,但是应激组与对照组比较,无显著性差异(P0.05);无论M-ENK免疫反应的单标,还是M-ENK与Fos免疫双标,视上核,室旁核均无阳性的胞体。提示在RWIS 1小时,对延髓中M-ENK的表达没有显著影响作用,同时对延髓中的M-ENK神经元的活动没有显著影响作用。另外,纹状体内有大量M-ENK神经末梢的分布,实验组与对照组比较无显著性差异(P0.05)。 第三部分,侧脑室内微量注射M-ENK对RWIS致大鼠胃粘膜损伤的影响。采用侧脑室埋管,微量注射M-ENK(10ug/5ul/只)、纳洛酮(10ug/5ul/只)后再进行RWIS的方法,观察M-ENK和纳洛酮对RWIS导致的胃溃疡产生是否有明显影响。结果表明,M-ENK组、纳洛酮组与对照(生理盐水)组的胃黏膜损伤指数间比较均无显著性差异(P0.05),提示外源性、内源性的M-ENK对RWIS导致的胃黏膜损伤无显著影响作用。 第四部分,RWIS对大鼠几个内分泌腺Fos蛋白表达的影响。采用免疫组化的方法,检测松果体,甲状腺,肾上腺,胰腺在束缚-浸应激中Fos蛋白阳性表达情况。结果显示,与对照(未应激)组相比,实验组中甲状腺、肾上腺髓质及皮质球状带中的Fos蛋白阳性细胞个数及累计光密度值(IOD)明显增加(P0.05);松果体Fos蛋白在实验组和对照组中表达都很强,两组间差别不明显(P0.05);在实验组和对照组,肾上腺皮质网状带、胰岛中均未发现Fos蛋白的表达。提示大鼠甲状腺,肾上腺球状带及髓质细胞都参与了RWIS反应。 综上所述,通过对下丘脑和延髓的观察,M-ENK阳性神经元胞体仅见于孤束核;延髓的迷走背核、疑核有阳性神经纤维末梢的分布;最后区、室旁核、视上核中无M-ENK阳性神经元胞体及纤维末梢;纹状体内有大量M-ENK神经末梢的分布。RWIS对延髓中孤束核内M-ENK神经元活动影响并不显著;对迷走神经背核、疑核内M-ENK阳性神经末梢的活动影响也不显著。中枢内的M-ENK含量的变化对束缚浸水应激致胃黏膜损伤、主要内分泌腺活动均不起主要作用。
【学位授予单位】:山东师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R573.1

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【参考文献】
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