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鸡贫血病毒(CAV)vp1基因克隆与表达的研究

张刚  
【摘要】: 鸡贫血病毒(chicken anemia virus,CAV)是鸡传染性贫血病 (chicken infectious anemia,VIA)的病原,属圆环病毒科 (Circoviridae)。CAV基因组编码三种蛋白:VP1(51.6KD), VP2(24.0KD),VP3(13.6KD),其中VP1是CAV的唯一衣壳蛋白, 是CAV的保护性抗原,与VP2共同诱导鸡产生免疫保护作用。 本研究根据CAV vp1的基因序列设计合成一对引物,通过 PCR方法对vp1基因进行扩增,并把vp1基因连接到克隆载体 pUC18上,在大肠杆菌DH5-α中进行克隆。用末端双脱氧终止法 测定vp1基因的序列,证明vp1基因共含1347bp。DNA Blast分 析表明,该基因与GeneBank中已发表的vp1基因序列的一致性为 95%左右,具有较大差异。这些差异导致vp1基因编码蛋白的氨基 酸发生改变。把克隆的vp1基因亚克隆到表达载体pET30(b~+)上, 并在大肠杆菌DE-3中用IPTG诱导表达。SDS-PAGE电泳鉴定证 明VP1蛋白成功表达,其分子量为51.6KD。 vp1基因的成功克隆与表达,为VP1蛋白的免疫学研究和CAV 基因工程疫苗的研制奠定了基础。


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