柄海鞘（Styela clava）活性物质的提取分离、纯化及活性研究

【摘要】： 目前,国外对海洋被囊动物海鞘生理活性物质的研究进展迅速,分离获得了众多的活性物质,并且很多进入临床研究。但是,国内对海鞘的研究,尤其是海鞘中的天然产物的分离及其活性方面的研究尚处于起步阶段,不论在深度和广度上都有待提高。而我国海洋海鞘资源丰富,尤其是山东省沿海海域海鞘资源更是极其丰富,与国外相比,不仅没有得到有效开发利用,反而困扰着渔业和航海的发展,因此,应当引起人们极大的关注。本论文以生物碱为主要目标物,对柄海鞘(Styela clava)鞘体活性物质进行了初步的研究。 首先,将采集到的新鲜柄海鞘冷冻保存,将柄海鞘的鞘体和鞘囊进行精细剥离,避免了物质的相互干扰,更好的进行活性物质的定位。对柄海鞘鞘体组织匀浆,冷冻干燥,用10%氨水充分湿润鞘体粉末,氯仿浸提,浓缩氯仿浸提液,浓缩液盐酸酸化,乙醚萃取去除脂溶性杂质,氢氧化钠碱化后分别用乙醚、氯仿重新萃取,浓缩蒸干得到碱化乙醚相(JY)和碱化氯仿相(JL);残渣继续经乙酸乙酯浸提,浓缩蒸干得到红褐色膏状物,经高效液相半制备得到样品YSYZ-P;而残渣经甲醇再次浸提,浓缩得到红棕色粘稠物,经盐酸酸化处理,结晶纯化得到无色透明晶体JC-C。 其次,对样品进行了结构解析,样品YSYZ-P常温下为浅黄色液态,风干为凝固膏状物,冻干为小滴状。高效液相色谱分析表明样品较纯,根据其紫外光谱图、一维、二维核磁共振波谱图,并对照化合物数据库进行比对分析,初步推断其为胸苷。样品JC-C为无色透明晶体,呈长方体状,晶型较为规整,硬度较大,经粉末X-射线衍射分析,为未知物,无法断定其准确结构,初步推测为生物碱盐类。 最后,利用细胞培养技术,采用MTT法初步检验柄海鞘鞘体提取物的抑瘤活性,实验数据显示,精制样品YSYZ-P体外抑瘤活性不稳定,没有浓度和时间规律性,200μg/ml浓度下作用于肝癌HepG2细胞24h抑制率最大,为49.42%;样品JC-C的抑瘤活性不呈现规律性的浓度和时间变化,200μg/ml浓度下作用于肝癌HepG2细胞72h时的抑制率最高,为48.97%。 根据目前掌握的资料,本实验从柄海鞘中分离纯化出胸苷在国内尚属首例,在国内本领域的研究工作中具有一定的创新性,在本论文基础上,进一步深入开展广泛的筛选工作、化学及其生理活性的研究,可望发现结构新颖的生物活性物质,从而开发成为新药或作为药物设计的先导化合物,也可为基础生命科学研究提供有价值的工具药。相信,进一步的实验研究,必然会推进我国在此领域天然产物研究与开发的进度,开创海鞘生理活性物质研究的新局面。