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《曲阜师范大学》 2011年
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降解柴油酵母菌的分离纯化及性质研究

倪娜  
【摘要】:石油工业迅速发展的同时带给人类日益严重的环境污染问题。水体和大气受到污染,土壤质量下降破坏农业生产,污染物进入食物链造成人体损伤。因此,原油污染土壤的修复处理对消除环境污染保障人体健康以及社会的可持续发展具有重要意义。用微生物处理油污土壤是一种可行的方法,因其费用低、操作简单、无二次污染,应用前景广阔。酵母菌作为真菌类微生物,其分解酶与细菌相比有一定特异性,在承受污染负荷、需氧量和耐渗透压方面具有极大优势,另外,酵母菌可以发酵生产单细胞蛋白,因此酵母菌是进行油污土壤修复的优势微生物。 本研究致力于筛选一种能够利用石油烃的酵母菌,对其降解性能进行研究,并对其在油污土壤中的生物修复作用进行初步探索。从胜利油田长期被石油污染的土壤中经富集分离纯化获得一株能够降解柴油的酵母菌,采用现代分子生物学方法提取酵母菌的基因组DNA,并选用通用引物对菌株的18S rDNA基因序列进行扩增、测序和比对分析,并结合传统的形态学观察和生理生化特性研究将分离到的酵母菌种鉴定为假丝酵母属的奥默毕赤酵母单倍体种。以柴油作为唯一碳源,对分离到酵母菌的降解特性进行研究,通过单因素实验、无重复双因素实验及正交实验对该酵母菌种降解柴油的条件进行优化,并确定最佳的液体降解条件为:最适氮源为(NH4)2SO4,最适磷源为KH2PO4+Na2HPO4,最佳C:N:P为50:5:1,最适pH为6,最适温度30℃,通气量(锥形瓶容积)500mL,接种量(OD600=2.0)为3%。其中温度对菌株降解柴油的影响最大,耐适较宽范围的pH值和较高的盐度。通过条件优化后,酵母菌对柴油的降解率达到46.8%。采用色谱法对酵母菌降解前后柴油的组成进行了分析,经GC分析结果可知本研究获得的酵母菌对柴油有很好的降解作用,尤其对柴油中的直链烷烃有很好的降解效果,而对含有支链、双键及苯环的复杂烷烃降解能力有限。 在油污土壤生物修复实验中,采用本土微生物生物强化法进行室内堆腐模拟实验,即将分离到的酵母菌应用于原获得地的油污土壤的生物修复。采取胜利油田长期被石油污染土壤并在花盆中进行为期35天的室内堆腐试验,在试验过程中保持土壤含水率为25%,每隔5天对土壤微生物菌落数、土壤脱氢酶活性、土壤pH值及土壤残油率进行检测。实验结果表明分离获得的酵母菌对油污土壤的生物修复过程有一定的促进作用,使得生物修复效率显著提高大约20%,缩短了生物修复时间。另外研究发现,在被石油污染的土壤中,通过单一添加N、P无机盐和改善通气条件可以显著提高微生物对石油烃的利用。
【学位授予单位】:曲阜师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:X172

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【参考文献】
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