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《曲阜师范大学》 2007年
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对Leifsonia xyli subsp.cynodontis pLXC100质粒主动分配机制ParB蛋白的研究

蒋丽娜  
【摘要】: 基因组能够被平等分配到子细胞中是保证遗传物质稳定传代的条件之一。在真核细胞中,基因的分配过程已经研究较为清楚,但是人们对原核细胞的质粒和染色体分配过程仍知之甚少。目前已发现原核细胞的质粒和染色体编码两个反式作用蛋白和一个顺式作用位点参与质粒和染色体的分配过程,这种分配方式称为主动分配机制(active partition mechanism)。两个反式作用蛋白中一个蛋白是典型的ATP酶,具有ATP酶活性;另一个蛋白是DNA结合蛋白,能够结合到顺式作用位点,并与ATP酶共同作用形成分配复合物来介导分配过程。目前大多数研究主要针对革兰氏阴性菌,而对革兰氏阳性菌质粒主动分配机制研究较少。我们之前报道了革兰氏阳性菌Leifsonia xyli subsp.cynodontis天然质粒pLXC100的初步研究,这个质粒也存在两个蛋白(ParA、ParB)和一段DNA序列(parS)与主动分配相关,ParB是DNA结合蛋白,ParA是ATPase,并且活性受到ParB、pars的调节,三者可以形成复合物。这是在革兰氏阳性菌质粒中首次发现完整的主动分配元件。初步推测这种分配元件属于主动分配机制中的Ib类型。 本研究以革兰氏阳性菌Leifsonia xyli subsp. cynodontis天然质粒pLXC100为材料,建立在前面的研究基础之上,应用多种生化技术对其分配元件ParB蛋白进行定性分析,展开对ParB蛋白性质的探索。此研究用IMPACT-TWIN蛋白纯化系统得到不含外源多肽标签的纯ParB蛋白,通过EMSA、DnaseI footprinting和SPR等技术,证实了ParB蛋白的DNA结合活性,得到结合DNA的动力学参数;基于二级结构的预测,克隆表达得到了五个突变体蛋白,应用EGS化学交联、HPLC和CD等方法,探讨了ParB蛋白结合DNA的氨基酸和二级结构,证实K70对ParB蛋白维持DNA结合活性是非常重要的。本研究对ParB蛋白的研究结果,丰富了革兰氏阳性菌Ib型主动分配机制的研究内容,推进了原核细胞质粒和染色体分离的研究进展。
【学位授予单位】:曲阜师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:Q933

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【共引文献】
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1 张怡轩;钩端螺旋体致病相关基因的鉴定与功能研究[D];沈阳药科大学;2004年
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