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《聊城大学》 2009年
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细胞红蛋白的基因表达、分离纯化与性能研究

田素燕  
【摘要】: 细胞红蛋白(Cytoglobin, Cygb)是近期在脊椎动物组织中发现的第四种珠蛋白,它虽具有典型珠蛋白“three-over-three”类型的α-螺旋三明治折叠结构,但其蛋白肽链E-螺旋中的His81却与血红素配位,形成与神经红蛋白(Neuroglobin, Ngb)相似的六配位结构。在Cygb的血红素附近有一个与外部相连的大的疏水性蛋白基质空腔,可能用于提供配体进出的路径。Cygb几乎在人体各类组织中都有表达,可能具有携氧、储氧、氧感受器以及过氧化物酶等功能,此外它也可能与胶原形成有关,但其具体的生物功能仍未完全明确。因此本文对细胞红蛋白进行了基因表达和分离纯化,并研究了其基本的化学生物学性质以及可能的生物功能。主要的工作有: 一、细胞红蛋白的基因表达、分离纯化与谱学表征。将带有人细胞红蛋白基因pET3a质粒转化至E. Coli BL21(DE3)plys中进行发酵表达,细胞红蛋白以可溶性和包涵体两种形式同时表达。可溶性蛋白依次经硫酸铵分级沉淀,Hiprep 16/10 Q FF阴离子交换柱,Hiload16/60 Superdex 75凝胶过滤柱和CM Sepharose FF阳离子交换柱纯化,得到电泳纯的可溶性蛋白(Scygb);包涵体蛋白经盐酸胍变性溶解、外加血红素重组和柱层析得到了电泳纯的可溶性蛋白(Icygb)。 电喷雾质谱测得Scygb的分子量为21403.8 Da,Icygb的分子量则为21556.8 Da。紫外可见光谱表明,Scygb和Icygb的氧化态都在416 nm处有强的吸收峰,500 nm~600 nm间有宽的弱吸收峰,还原态都在428 nm,531 nm和561nm有吸收峰,但两者的A428(R)与A416(O)峰值比有所差别。荧光光谱表明,Scygb和Icygb的发射光谱的最大波长都为340 nm。但相同浓度时,Scygb的荧光强度要比Icygb的荧光强度高一倍左右。圆二色光谱表明,Scygb和Icygb的α-螺旋相对含量分别为64.4%和62.0%。还原态均在424 nm和555 nm处有正峰,氧化态都在257 nm和412 nm处有正峰,在285 nm处有负峰。但与Icygb相比,Scygb的还原态在425 nm处呈现一负峰,氧化态在453 nm处呈现一负峰。两者的热稳定性和酸碱稳定性的变化情况也不相同。通过以上对比,得出由可溶性形式纯化出的Cygb应该更接近于天然态,因此主要对这种形式的蛋白进行了深入研究。 二、细胞红蛋白的荧光光谱和圆二色光谱研究。利用同步荧光光谱、荧光探针和荧光猝灭研究了Cygb的荧光特性以及溶液pH和巯基乙醇(2-ME)对Cygb构象的影响。波长差为20 nm和80 nm时Cygb在不同浓度下的同步荧光光谱结果表明,蛋白浓度对肽链中色氨酸和酪氨酸的荧光强度的影响不相同。波长差为20 nm和80 nm时Cygb在不同pH值溶液中的同步荧光光谱结果表明,在酸性环境中色氨酸和酪氨酸荧光峰的强度迅速增大,在碱性环境中两者荧光峰的强度明显降低。ANS荧光探针表明,在酸性环境中蛋白分子的构象发生了改变,出现能够结合ANS的疏水区。利用丙烯酰胺和I-、Cs+离子在有或无2-ME存在下对Cygb内源荧光进行猝灭作用的研究表明,三种猝灭剂对Cygb的荧光猝灭遵循Stern-Volmer方程,但它们的猝灭效率明显不同。当向蛋白溶液中加入2-ME后,三种猝灭剂对Cygb荧光基团的猝灭常数均有所增加。 利用圆二色光谱研究了环境因素对Cygb二级结构的影响。结果表明,在蛋白浓度较低时,蛋白含有较高的α-螺旋。随着温度的升高,Cygb的α-螺旋含量逐渐减小。即使温度达到95℃,它仍保持有20%的α-螺旋结构,说明Cygb具有较高的热稳定性。在弱酸性和弱碱性溶液中,Cygb的二级结构都会有不同程度的破坏。在甲醇和乙醇中,Cygb的α-螺旋含量明显增加,这说明醇类可以诱导其α-螺旋的生成。三、细胞红蛋白的去折叠研究。利用紫外可见光谱、荧光光谱和圆二色光谱研究了酸诱导细胞红蛋白的去折叠过程。结果表明,随着酸度的增加,Cygb分子中血红素逐渐脱离蛋白链;蛋白的荧光强度显著增加;二级结构中α-螺旋含量逐渐降低。但酸诱导细胞红蛋白的去折叠并不彻底。 利用紫外可见光谱、荧光光谱、荧光相图法和圆二色光谱研究了在有或无2-ME存在时,尿素和盐酸胍诱导细胞红蛋白的去折叠过程。结果表明:Cygb具有较强的抗尿素变性作用,即使尿素浓度达到10.0 mol/L时,变性也不完全;二硫键的破坏,降低了蛋白分子的稳定性。Cygb在尿素中的变性为“三态模型”,N→Iurea→U。在2-ME存在的尿素溶液中,其变性过程变为复杂的“四态模型”。Cygb在盐酸胍中的变性较为彻底,其血红素明显脱落。无2-ME存在时,当盐酸胍浓度达到4.5 mol/L时,蛋白变性完全,其变性中点Tm为3.5 mol/L。Cygb在盐酸胍中的去折叠过程为的“三态模型”,N→U→R。2-ME存在下蛋白从0.5 mol/L盐酸胍即开始变性,变性中点Tm降为2.0 mol/L,仍为“三态模型”。 利用紫外可见光谱、荧光光谱和圆二色光谱研究了细胞红蛋白在甲醇和乙醇溶液中的去折叠和再折叠过程。去折叠过程的研究结果表明,随着醇浓度的增加,紫外可见吸收光谱中Soret带的最大吸收峰发生蓝移;荧光发射光谱的最大峰位发生红移;二级结构中α-螺旋含量明显升高。通过比较,乙醇的变性能力大于甲醇。再折叠过程的研究结果表明,再折叠过程与去折叠过程是可逆的,说明Cygb中肽链与血红素重组的路径和解离过程基本相同。 四、细胞红蛋白的性能研究。利用紫外可见吸收光谱和动力学过程研究了细胞红蛋白的过氧化物酶催化活性。研究结果表明,Cygb具有一定的类过氧化物酶的酶活性。Cygb催化H2O2氧化邻甲氧基苯酚的最大反应速率Vm为54.9μmol?L-1?min-1,米氏常数Km为5.11×10-3 mol?L-1,转化数为Kcat = 11.0 min-1。在碱性环境和较高温度下,酶促反应的初速度明显增大。 利用紫外可见吸收光谱研究了细胞红蛋白与硫化氢的相互作用。随着H2S浓度的增大,细胞红蛋白416 nm处的吸收峰逐渐降低并红移至428 nm,之后再逐渐增大,在531 nm、560 nm和606 nm处形成较明显的吸收峰,这说明H2S可以还原氧化态的Cygb。当温度高于45℃时,Cygb与H2S的反应速率明显增大。在pH 6.0时Cygb与H2S的反应速率最大。 五、脱辅基细胞红蛋白(Apocygb)与金属卟啉的重组及脱辅基蛋白的稳定性研究。紫外可见光谱结果表明,Apocygb与Fe(III)PPIX重组后,立即在412 nm处形成新吸收峰,后移至416 nm处,还原态在428 nm处形成强吸收峰。Apocygb与Fe(III)PPIX的重组动力学过程包括小于0.2 s的快反应阶段和直到5 min还未完全平衡的慢反应阶段。Apocygb与Co(III)PPIX和Mn(III)PPIX的重组具有相似的过程。 利用内源性荧光、外源性荧光探针ANS的荧光光谱和圆二色光谱研究了脱辅基细胞红蛋白在酸、尿素和盐酸胍中的去折叠过程。结果表明,Apocygb在pH7.5~6.0范围内以天然态存在,在pH5.5~4.0之间出现了一个较稳定的中间态。在pH6.0~2.5范围内,ANS逐渐与Apocygb结合,其荧光强度迅速增大,最大峰位由478 nm蓝移至466 nm。尿素和盐酸胍诱导脱辅基细胞红蛋白的去折叠过程表明,随着变性剂浓度的增加,肽链中的荧光基团逐渐暴露于极性环境中,蛋白肽链逐渐去折叠。变性剂不论采用尿素还是盐酸胍,加入2-ME后,变性中间点都提前1.0 mol/L,但对变性过程态没有较大影响。
【学位授予单位】:聊城大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:Q78

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【参考文献】
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1 帖建科,常文保,慈云祥;金属卟啉作为过氧化物模拟酶在分析化学中的应用[J];分析化学;1994年05期
2 祁超,李伟国,张玉静,刘立岩,赵大庆;圆二色谱和紫外可见光谱研究抗体-卟啉的相互作用[J];分析化学;2002年05期
3 沈星灿,梁宏,何锡文,王新省;圆二色光谱分析蛋白质构象的方法及研究进展[J];分析化学;2004年03期
4 李锐;任海平;孙艳亭;姚英艳;卢奎;马丽;;小分子与生物大分子间非共价相互作用分析方法研究进展[J];分析化学;2006年12期
5 王守业,徐小龙,刘清亮,解永树;荧光光谱在蛋白质分子构象研究中的应用[J];化学进展;2001年04期
6 黄汉昌;姜招峰;朱宏吉;;紫外圆二色光谱预测蛋白质结构的研究方法[J];化学通报;2007年07期
7 赵超;李连之;王莉;冀海伟;;重组人神经红蛋白的圆二色光谱研究[J];科学通报;2006年13期
8 刘超;徐小超;吕鸿周;李建;孔杨;刘金枝;鲍锦库;;荧光淬灭作用研究黄精凝集素Ⅱ微环境与构象的关系[J];四川大学学报(自然科学版);2006年03期
9 钟守琳;周剑涛;夏德宜;;脊椎动物球蛋白家族新成员——胞红蛋白[J];生命的化学;2006年03期
10 杨立涛;刘爽;于常海;;脑红蛋白和细胞红蛋白:携氧蛋白质家族2个新成员[J];中国生物化学与分子生物学报;2006年04期
【共引文献】
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1 沈玉华,谢安建,王一敏,方芳;水溶液中人胆汁糖蛋白与碳酸钙的结合研究[J];安徽大学学报(自然科学版);2000年03期
2 胡乃梁;陈燕;杨家祥;宋继梅;徐季昭;;一种西夫碱化合物的合成及其在汞测定中的应用[J];安徽大学学报(自然科学版);2008年06期
3 高贵珍;刘小阳;;荧光光谱法研究茜素红S与壳聚糖的结合反应[J];安徽大学学报(自然科学版);2010年04期
4 刘炜;毕和平;张连华;汤颖;陈光英;;阿司匹林与DNA相互作用的光谱研究[J];安徽农业科学;2009年15期
5 张建刚;李生泉;张丽;;微量淀粉含量测定的新方法研究[J];安徽农业科学;2009年26期
6 赵霞;范阔海;;荧光探针法研究铅离子对小牛胸腺DNA构象的影响[J];安徽农业科学;2009年34期
7 罗长辉;但忠;赵凯;符乃方;雷博林;蒋盛军;;红茶菌固体发酵SC5木薯块根-银合欢蛋白饲料的研究[J];安徽农业科学;2010年09期
8 韩小铮;王兰;;铜和镉联合作用对长江华溪蟹酯酶同工酶的影响[J];安徽农业科学;2010年12期
9 蔡渡江;王联结;;基于电子效应的氨基酸分类与二级结构的倾向性分析[J];安徽农业科学;2010年36期
10 黄丽华;江泽鸿;李赛男;李充璧;;抗流感病毒特异性转移因子对试验小鼠的抗流感效果[J];安徽农业科学;2012年03期
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1 吕名秀;杨柳;卢奎;赵龙涛;高琳;;紫外光谱法研究苯丙氨酸二肽与ct-DNA的相互作用[A];河南省化学会2010年学术年会论文摘要集[C];2010年
2 张伟;林琳;刘睿;李永红;;对磺酸基杯芳烃与胃蛋白酶相互作用的光谱研究[A];第十五届全国光散射学术会议论文摘要集[C];2009年
3 赵东欣;姚永峰;卢奎;;光谱法研究NA和NA-Tyr-Tyr与ct-DNA的相互作用[A];中国化学会第十二届全国应用化学年会论文集[C];2011年
4 刘彦文;孟小林;朱应;梁东瑞;;文山松毛虫核型多角体病毒的生物学特性及理化性质研究[A];杀虫微生物[C];1992年
5 郭丽梅;白玉琢;;油松花粉多糖分离纯化及鉴定[A];花粉·可持续发展(纪念联络组成立20周年)——第十一届全国花粉资源开发与利用研讨会论文集[C];2010年
6 李卫华;刘文清;刘建国;张玉钧;杨立书;赵南京;丁志群;;激光诱导荧光法测定水中溶解有机物[A];2004全国光学与光电子学学术研讨会、2005全国光学与光电子学学术研讨会、广西光学学会成立20周年年会论文集[C];2005年
7 周卫红;尹宇新;刘小兰;缪方明;;N-甲基,二(2-苯并咪唑亚甲基)胺和五水硫酸氧钒配合物的合成及晶体结构[A];第八届全国X射线衍射学术会议论文集[C];2003年
8 李德发;马曦;孙鹏;;大豆抗原蛋白研究进展[A];动物营养研究进展——中国畜牧兽医学会动物营养学分会第八届全国代表大学暨第十届学术研讨会论文集[C];2008年
9 吕爱星;卢春华;邱彬;陈国南;;荧光淬灭法测定奈韦拉平的含量[A];中国化学会第十三届有机分析与生物分析学术会议论文集[C];2005年
10 徐媛媛;陈欣;王晋;孙舒婷;杜斌;魏琴;;现代分析技术对蛋白质结构的分析进展[A];中国化学会第26届学术年会分析化学分会场论文集[C];2008年
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6 单海霞;新型烷基咪唑离子液体的合成及应用[D];江南大学;2010年
7 雷红灵;恩施碎米荠富硒生理生化及其含硒蛋白的研究[D];湖南农业大学;2010年
8 尚永辉;主—客体分子间相互作用的光电分析及人工神经网络预估研究[D];西北大学;2011年
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2 李浩丽;Bacillus pumilus CN8菌株高效降解猪血Hb酶的分离纯化与降解机制探讨[D];华中农业大学;2010年
3 冯倩倩;赭曲霉毒素A人工抗原构建及其多克隆抗体的制备[D];华中农业大学;2010年
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6 王令芳;含氮有机阳离子修饰的多酸化合物的定向构筑与结构表征[D];郑州大学;2010年
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10 兰任;基于并行混合粒子群算法的蛋白质结构预测[D];大连理工大学;2010年
【二级参考文献】
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1 慈云祥,王芳;模拟过氧化物酶催化荧光反应的研究(CoTMPyP-HVA-H_2O_2体系)[J];北京大学学报(自然科学版);1989年02期
2 孙淑声,王爱民;过氧化物酶活性部位的模拟及其催化显色反应的研究[J];北京大学学报(自然科学版);1989年06期
3 汪安,吴小蔚,孙淑声,慈云祥;过氧化物模拟酶Fe-TPPS_4-隐性结晶紫-H_2O_2体系的催化显色反应研究[J];北京大学学报(自然科学版);1992年04期
4 刘永春,胡之德;药物与蛋白质相互作用的荧光光谱法研究概述[J];宝鸡文理学院学报(自然科学版);2005年01期
5 吴英才,袁一方,徐艳平;表面等离子共振传感器的研究进展[J];传感器技术;2004年05期
6 俞英,程晓伟;牛血清白蛋白与酸性品红的结合反应[J];分析化学;2000年05期
7 祁超,李伟国,张玉静,刘立岩,赵大庆;圆二色谱和紫外可见光谱研究抗体-卟啉的相互作用[J];分析化学;2002年05期
8 沈星灿,梁宏,何锡文,王新省;圆二色光谱分析蛋白质构象的方法及研究进展[J];分析化学;2004年03期
9 吴会灵,杨芃原,张重杰,何锡文;小分子与核酸相互作用的研究进展[J];分析化学;2004年09期
10 纪竹生,刘买利,胡继明;药物配体与生物大分子受体相互作用核磁共振的研究进展[J];分析化学;2004年11期
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1 田素燕;李连之;李海丽;薛泽春;杜为红;;重组人细胞红蛋白的表达纯化及谱学表征[J];高等学校化学学报;2009年03期
2 李连之,冀海伟,赵超,许涛,刘国富,付崇罗,闫华超;神经红蛋白的表达、分离纯化和谱学表征[J];科学通报;2005年10期
3 李海丽;李连之;郭玉静;田素燕;薛泽春;姜玉岗;;神经红蛋白突变体Tyr44Phe的制备、表征和稳定性研究[J];高等学校化学学报;2009年05期
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2 史宝军;崔细鹏;陈丽芝;吕东海;周镇锋;;毕赤酵母表达的木聚糖酶的分离纯化及其性质研究[A];动物营养与饲料研究——第五届全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2006年
3 陈建华;黄少烈;朱宝璋;游鹏程;;分子蒸馏技术在天然产物分离纯化上的应用进展[A];全国中药标准研究学术研讨会论文集[C];2005年
4 王念跃;赵伟;端木浩;李勇;黄宇峰;;人肝癌组织特异性γ-谷氨酰转移酶分离纯化[A];第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议论文汇编[C];2006年
5 王彩梅;蔡少丽;吴义真;林俊涵;章文贤;施巧琴;林琳;;Cryptococcus laurentii B40胞外脂肪酶的分离纯化及特性分析[A];华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会论文集[C];2006年
6 刘卫平;;马铃薯病毒PVX的分离与纯化的研究[A];中国作物学会马铃薯专业委员会2000年年会论文集[C];2000年
7 姚育翠;李向荣;;大孔吸附树脂分离纯化玫瑰花中原花青素[A];第九届全国中药和天然药物学术研讨会大会报告及论文集[C];2007年
8 郭晓旋;李万社;;框架理论在信号重构中的应用[A];全国第一届嵌入式技术联合学术会议论文集[C];2006年
9 李君珂;姜子涛;李荣;;树脂吸附法分离纯化首乌叶总黄酮[A];管产学研助推食品安全重庆高峰论坛——2011年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨全国食品科学与工程博士生学术论坛论文集[C];2011年
10 郝建芳;吴林志;;蜂窝夹心圆柱壳非线性屈曲分析[A];复合材料——基础、创新、高效:第十四届全国复合材料学术会议论文集(下)[C];2006年
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1 李大刚;奇特的生物功能[N];中国化工报;2002年
2 白毅;我国新药稳定性研究亟待改善[N];中国医药报;2002年
3 马浩剑李昕;王柯:五年做到国内第一[N];常州日报;2007年
4 张云普;大庆局二期攻关微生物驱油技术[N];中国石油报;2007年
5 林诚;卡那霉素分离纯化新技术通过鉴定[N];医药经济报;2002年
6 ;PCC分离纯化工艺进展速览[N];中国医药报;2006年
7 易小雄;攀钢一科研成果国际领先[N];中国矿业报;2003年
8 记者 衣晓峰 通讯员 董宇翔;细菌摄取营养通道或成抗感染新靶点[N];健康报;2010年
9 洛 祁;电子机器人练就生物功能[N];大众科技报;2003年
10 王宏磊;中药苷类有效成分提取 辅料、工艺各不同[N];中国医药报;2006年
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1 陆志科;竹叶生物活性成分提取分离及其抗菌活性研究[D];中南林学院;2004年
2 徐金瑞;黑大豆种皮花色苷抗动脉粥样硬化及其抗氧化机制研究[D];西北农林科技大学;2006年
3 韩俊友;牛蛙皮肤抗菌肽分离纯化、基因克隆表达及生物学特性的研究[D];吉林大学;2007年
4 马春玲;海洋酵母普鲁兰类酵母碱性蛋白酶发酵生产、特性研究及基因克隆[D];中国海洋大学;2007年
5 陈杰;高密度培养盘基网柄菌及重组可溶性人Fas配体表达的研究[D];浙江大学;2008年
6 华颖;纤维蛋白溶解酶的发酵制备、分离纯化及酶学性质研究[D];江南大学;2008年
7 赵萍;家蚕丝氨酸蛋白酶抑制剂研究[D];西南大学;2008年
8 王元凤;茶多糖的分离纯化、结构及构效关系研究[D];江南大学;2005年
9 段冷昕;梅花鹿茸多肽的化学结构及其抗肝纤维化作用[D];吉林大学;2007年
10 陶红;金线鱼胃蛋白酶纯化鉴定及结构研究[D];华南理工大学;2007年
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1 田素燕;细胞红蛋白的基因表达、分离纯化与性能研究[D];聊城大学;2009年
2 徐伟泉;川芎嗪提取分离纯化及稳定性研究[D];北京化工大学;2005年
3 李萍;α-生育酚油酸酯的合成、分离及稳定性研究[D];广西大学;2007年
4 陈夏;白唇竹叶青(Trimeresurus albolabris)蛇毒5'-核苷酸酶分离纯化、理化性质及抑制家兔血小板聚集机制研究[D];重庆师范大学;2008年
5 武广衍;新型真菌源激活蛋白的分离纯化及生物功能的研究[D];福建农林大学;2008年
6 刘春芬;纤维素酶高产菌株的选育及酶的分离纯化研究[D];西南农业大学;2005年
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8 张及禄;岩栖蝮蛇去整合蛋白的分离、纯化与抗肿瘤作用研究[D];吉林大学;2008年
9 李燕;新疆鲜蒜中蒜氨酸酶的分离纯化及性质[D];新疆大学;2004年
10 黄爱民;广西菲牛蛭中菲牛蛭素的分离纯化及体内外抗凝血实验[D];广西医科大学;2005年
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