收藏本站
《郑州大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

杜氏盐藻寡糖基转移酶亚基STT3a的基因克隆与功能分析

王翠  
【摘要】: N-连接糖基化是真核生物细胞中最常见的蛋白质修饰,这个过程是由位于糙面内质网膜上的寡糖基转移酶(OST)催化的。Stt3p为OST的催化亚基,它在已知的OST亚基中是最保守的。研究发现酵母的Stt3p编码一个78 kDa的蛋白,并且几乎所有的真核生物基因组中都存在编码酵母Stt3p蛋白的同系物。哺乳动物的基因组编码酵母Stt3p的两种同系物STT3a和STT3b,它们的表达具有组织特异性差异,并能调节OST的活性,且含有一个STT3a亚基的OST比含有STT3b亚基的OST对于选择完全装配的长链寡糖供体(Glac3Man9Glc NAc2-PP-Dol)更具有特异性。最近的研究发现拟南芥OST的STT3a亚基作为一种跨膜蛋白在高盐应激反应中发挥一定作用。 杜氏盐藻(Dunaliella salina, D. salina)是一种高度耐盐的单细胞双鞭毛真核绿藻,它没有细胞壁,能够在0.5-5 mol/L NaCl盐浓度下生存,具有很强的渗透调节能力。近年来,虽然人们围绕盐藻的耐盐机制进行了大量的研究,但是目前对其耐盐机制还不是十分清楚。另外,我们前期的研究发现:在高盐条件下,盐藻的运动性明显降低,而作为盐藻运动器官的鞭毛直接参与了盐藻的运动。 为了解跨膜蛋白STT3a在盐诱导反应中的作用及盐藻的盐耐受性和鞭毛介导的运动性之间是否有潜在的联系,本研究根据衣藻、拟南芥等STT3a蛋白的氨基酸高度保守序列VCVFTA、DVDYVL设计一对简并引物,采用RT-PCR及RACE的方法扩增获得杜氏盐藻STT3a基因全长的cDNA序列。然后将杜氏盐藻STT3a的cDNA全长序列定向克隆于原核表达载体pET-28a(+)中构建重组质粒,利用SDS-PAGE方法,分析STT3a融合蛋白在大肠杆菌BL21中的表达情况。并通过Primer Premier 5.0在STT3a结构域中设计一对特异性引物,分别提取不同盐浓度培养条件及鞭毛再生状态下的杜氏盐藻cDNA,通过实时荧光定量PCR分析STT3a在杜氏盐藻盐诱导及鞭毛再生过程中的作用。另外,运用改进的银染法对杜氏盐藻鞭毛及藻体进行银染,并根据公式V=(S2—S1)/t(其中V为相对生长速率,S2和S1分别为相邻两个时间点的鞭毛长度平均值,t代表间隔时间),最终求出杜氏盐藻鞭毛再生不同时期的相对生长速率。 序列分析显示克隆得到的杜氏盐藻STT3a基因cDNA全长序列为2574 bp,包括114 bp的5'UTR、279 bp的3'UTR以及2181 bp的开放阅读框(open reading frame, ORF),编码727个氨基酸残基,其蛋白质的理论等电点为9.11,分子量为80.25 kDa。对所得氨基酸序列进行同源性分析,BLAST结果显示,克隆所得的序列为杜氏盐藻STT3a蛋白的基因序列。SDS-PAGE结果显示:在80 kDa左右出现一条特异性条带,与预测的蛋白分子量大小一致。实时荧光定量PCR结果显示杜氏盐藻STT3a mRNA水平随着盐浓度的升高而逐渐增加,其水平在3.5mol/L NaCl浓度时比在1.5mol/L NaCl浓度时升高了11倍(P<0.01)。另外,与没有脱鞭毛的杜氏盐藻相比,STT3a mRNA在鞭毛再生过程中持续高表达。杜氏盐藻鞭毛再生前15 min鞭毛增长比较明显,至420 min时基本上完成鞭毛再生。本研究显示杜氏盐藻STT3a基因的高表达在盐藻盐适应和鞭毛再生过程中发挥重要作用。
【学位授予单位】:郑州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:Q943

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 曾磊;潘卫东;王翠;薛乐勋;;杜氏盐藻叶绿体转化载体pchlN-CAT-BAR的构建[J];郑州大学学报(医学版);2010年06期
2 柳丽平;李杰;王翠;阎赟梦;薛乐勋;;杜氏盐藻cDNA文库的构建及KCBP基因的克隆[J];郑州大学学报(医学版);2010年06期
3 王翠;李杰;柳丽平;曾磊;薛乐勋;;杜氏盐藻寡糖基转移酶亚基STT3a功能结构域的克隆与表达分析[J];生物工程学报;2010年06期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘烈刚,刘恭平,姚平,郝丽萍,杨雪峰,孙秀发,朱清华;维生素A缺乏对小鼠胚胎Hox-3.5 mRNA表达与胚胎发育关系的研究[J];癌变.畸变.突变;2003年03期
2 安兰敏,杨军,徐兵;铅对大鼠脑细胞凋亡的诱发作用及对P53基因表达影响的研究[J];癌变.畸变.突变;2003年04期
3 王欣,褚建新,傅汝林,赵钧铭;清热解毒方对可移植性小鼠淋巴细胞白血病及其微小残留病疗效的比较研究[J];中医药临床杂志;2005年02期
4 赵莉;邓晓玲;蔚应俊;;水稻叶片mRNA差异显示技术中总RNA的提取和检测[J];安徽农业科学;2006年17期
5 詹爱军;王新卫;王宪文;;抗H9亚型AIV血凝素单克隆抗体的制备及亚型鉴定[J];安徽农业科学;2008年03期
6 张海军,张小爱,程双怀,耿红,聂刘旺,阚显照;扬子鳄Sox基因的PCR-SSCP分析[J];安徽师范大学学报(自然科学版);2001年03期
7 陈冬生,聂刘旺,王朝林,谢万树;扬子鳄DMRT1基因DM保守区的克隆及序列分析[J];安徽师范大学学报(自然科学版);2004年04期
8 姜宏,李麓芸,卢光琇;PCR法直接筛选重组阳性克隆[J];安徽医学;2005年02期
9 张桂芝,黄桂君,厉为良,吴国明,钱桂生;联合抑制人肺腺癌细胞的MCT1基因及NHE1基因表达对其增殖生长的影响[J];癌症;2002年07期
10 石卫民,范义湘,陈龙华,高蕾;两株人肝癌细胞QSG-7701和HepG2放射敏感性的体外研究[J];癌症;2002年09期
中国重要会议论文全文数据库 前5条
1 李新民;党琦;;天佛参口服液(TFS)诱导人喉癌细胞Hep-2凋亡及机理探讨[A];2011年中华名中医论坛暨发挥中西医优势防治肿瘤高峰论坛论文集[C];2011年
2 杨彬;兰喜;殷相平;李学瑞;李宝玉;方玉萍;柳纪省;;口蹄疫病毒双效疫苗载体的构建及其体外表达研究[A];第二届全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2008年
3 杨彬;兰喜;殷相平;李学瑞;李宝玉;方玉萍;柳纪省;;口蹄疫病毒双效疫苗载体的构建及其体外表达研究[A];首届中国兽药大会——兽医生物制品学、兽医微生物学学术论坛论文集(2008)[C];2008年
4 孟宪荣;周蕾蕾;栗绍文;周祖涛;毕丁仁;陈辉;齐冰玉;;猪骨骼肌肌钙蛋白Ⅰ基因的表达及其单克隆抗体的制备[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集(上册)[C];2009年
5 李西玉;许信刚;周继章;邱昌庆;曹小安;宫晓炜;王光华;;猪流产嗜性衣原体MOMP基因的克隆及原核表达[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 乔小放;RNA干扰SUMO1基因对结肠癌Hct116细胞生物学行为的影响[D];吉林大学;2011年
2 张立全;利用转基因技术创建紫花苜蓿耐盐新种质的研究[D];内蒙古大学;2011年
3 朱伟;摄食抑制因子NUCB2/Nesfatin-1对机体胰岛素敏感性的影响[D];重庆医科大学;2011年
4 朱静媛;志贺菌属细菌整合子与多重耐药性研究[D];郑州大学;2010年
5 王宏田;牙鲆免疫系统和抗病力的研究[D];中国科学院海洋研究所;2000年
6 王桂琴;核心蛋白聚糖DECORIN在肝纤维化形成机制中的作用[D];第二军医大学;2000年
7 吴艳涛;新城疫病毒F48E8株融合蛋白基因和表达该基因的重组鸡痘病毒[D];扬州大学;2000年
8 冯晓勤;基因重组 人FasAD多肽的研制及其对移植物抗宿主反应的免疫抑制效应初探[D];第一军医大学;2000年
9 傅启高;绍兴鸭优良产蛋性能的内分泌及分子生物学机制研究[D];南京农业大学;2000年
10 朱建中;对虾白斑综合征病毒在螯虾的增殖与动态分布及其基因组片段的测序、克隆与表达[D];南京农业大学;2000年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 辛宁;PDX-1真核表达载体构建及其在大鼠骨髓间充质干细胞中的表达[D];郑州大学;2010年
2 陆玉成;AMF基因在食管鳞癌细胞株中的表达及功能初步分析[D];郑州大学;2010年
3 张磊;杜氏盐藻(Dunaliella salina)GPI多克隆抗体的制备及其在MDCK细胞中的定位[D];郑州大学;2010年
4 冯玖玲;杜氏盐藻RbcS基因家族新成员的克隆及功能研究[D];郑州大学;2010年
5 刘莉;HSV-2 gD模拟抗原表位、IL-18重组核酸疫苗的构建及免疫效果观察[D];泰山医学院;2010年
6 李国庆;重组HIV-1 Vif 158的表达、复性与纯化研究[D];西北大学;2011年
7 郭金金;重组人肾素受体的表达、复性及同时纯化研究[D];西北大学;2011年
8 李争明;激光光镊拉曼系统中高葡萄糖对NIT-1细胞凋亡影响的研究[D];广西医科大学;2011年
9 王敏;内源性硫化氢对柯萨奇病毒B_3性心肌炎小鼠心肌内病毒复制的影响[D];广西医科大学;2011年
10 赵协;猪干扰素诱导蛋白IP-10和Mx1克隆、表达及生物活性检测[D];山东农业大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前5条
1 冯书营;刘红涛;李杰;薛乐勋;;杜氏盐藻基因工程研究现状及应用前景[J];中国生物工程杂志;2007年02期
2 范国昌,苏宁,张中林,钱凯先,沈桂芳;同源重组置换衣藻叶绿体chlL基因及其同质化鉴定[J];中国生物化学与分子生物学报;2000年01期
3 ;Establishment of a Gene Expression System in Rice Chloroplast and Obtainment of PPT-Resistant Rice Plants[J];Agricultural Sciences in China;2009年06期
4 杨全;张卉;王文全;刘春生;魏胜利;;甘草根cDNA文库构建与分析[J];中国中药杂志;2008年12期
5 杨成君;王军;刘关君;王英平;;红果人参叶中cDNA文库的构建[J];植物生理学通讯;2007年04期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 潘卫东;杜氏盐藻(Dunaliella salina)叶绿体转化研究[D];郑州大学;2003年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杜延茹,董立国,杨敏杰;高渗震动对杜氏盐藻细胞跨膜K~+运输的影响[J];植物研究;2000年02期
2 吕玉民,姜国忠,牛向丽,侯桂琴,张贵星,薛乐勋;杜氏盐藻两种碳酸酐酶基因启动子的克隆和功能研究[J];遗传学报;2004年10期
3 贾岩龙,侯卫红,李杰,刘红涛,陈华燕,王建民,薛乐勋;杜氏盐藻硝酸盐还原酶缺陷型突变藻株的分离和初步鉴定[J];郑州大学学报(医学版);2005年02期
4 柴玉荣,陈华艳,王天云,侯卫红,袁保梅,王建民,薛乐勋;杜氏盐藻RbcS基因cDNA片段的克隆和序列分析[J];郑州大学学报(医学版);2005年02期
5 朱松玲,王怡洁;盐度变化对杜氏盐藻的游离氨基酸和脂肪酸含量的影响[J];海洋科学;2005年03期
6 刘红涛;冯书营;陈涛;薛乐勋;;杜氏盐藻分子生物学最新进展及展望[J];中国生物工程杂志;2007年10期
7 郎万中;张永锋;索全伶;李强;许明;王海军;;中空纤维陶瓷膜用于杜氏盐藻采收的实验研究[J];盐业与化工;2009年01期
8 张磊;崔柳青;李杰;刘红涛;薛乐勋;;杜氏盐藻葡萄糖-6-磷酸异构酶重组蛋白的纯化及其多克隆抗体制备[J];郑州大学学报(医学版);2010年06期
9 柴玉荣;刘国红;崔柳青;刘红涛;李杰;薛乐勋;;杜氏盐藻高盐诱导蛋白的分离和鉴定[J];郑州大学学报(医学版);2011年01期
10 王鹏举;王天云;王亚峰;;杜氏盐藻核基质结合区结合蛋白的表达分析[J];河南科技大学学报(医学版);2012年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 洪利亚;徐仰仓;;两种碘盐对杜氏盐藻生长和生物富碘作用的影响[A];中国藻类学会第八次会员代表大会暨第十六次学术讨论会论文摘要集[C];2011年
2 李杰;薛乐勋;;杜氏盐藻硝酸盐还原酶基因5'侧翼区的克隆与功能分析[A];提高全民科学素质、建设创新型国家——2006中国科协年会论文集[C];2006年
3 赵丽娜;陈喜文;陈德富;;盐胁迫下杜氏盐藻甘油代谢相关基因的表达与酶活性分析[A];中国的遗传学研究——遗传学进步推动中国西部经济与社会发展——2011年中国遗传学会大会论文摘要汇编[C];2011年
4 刘贤德;沈允钢;;渗透震荡对杜氏盐藻光合作用的影响[A];全国植物光合作用、光生物学及其相关的分子生物学学术研讨会论文摘要汇编[C];2001年
5 李斌;施巧琴;吴松刚;;杜氏盐藻D-09产Y-亚麻酸能力的研究[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
6 张翅;戴国飞;刘军立;夏炎枝;甘南琴;红凌;;盐胁迫下杜氏盐藻(Dunaliella salina)cDNA文库的构建与新表达序列标签(EST)的获取、分析[A];第六届中国植物逆境生理学与分子生物学学术研讨会论文摘要汇编[C];2010年
7 于涛;徐仰仓;;杜氏盐藻絮凝收集方法的研究[A];中国藻类学会第八次会员代表大会暨第十六次学术讨论会论文摘要集[C];2011年
8 陈辉;姜建国;王强;;盐度变化对杜氏盐藻细胞生长和3-磷酸甘油脱氢酶同工酶活性的影响[A];中国藻类学会第八次会员代表大会暨第十六次学术讨论会论文摘要集[C];2011年
9 王绘砖;陈喜文;陈德富;;阿特拉津氯水解酶基因在绿藻遗传筛选中的初步研究[A];中国遗传学会第八次代表大会暨学术讨论会论文摘要汇编(2004-2008)[C];2008年
10 邹树平;吴玉龙;杨明德;张建安;童军茂;;杜氏盐藻热解动力学研究[A];第三届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(下)[C];2006年
中国重要报纸全文数据库 前1条
1 徐铮奎;微藻不微[N];中国医药报;2011年
中国博士学位论文全文数据库 前8条
1 吕玉民;杜氏盐藻(Dunaliella salina)两种碳酸酐酶基因的克隆和启动子功能研究[D];郑州大学;2003年
2 刘贤德;杜氏盐藻中捕光天线色素蛋白磷酸化水平的调节[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2005年
3 潘卫东;杜氏盐藻(Dunaliella salina)叶绿体转化研究[D];郑州大学;2003年
4 谢华;杜氏盐藻(Dunaliella salina)硝酸盐还原酶基因的克隆、表达及功能鉴定[D];郑州大学;2004年
5 戴军;杜氏盐藻多糖的提取、分离分析及其生物活性的研究[D];江南大学;2007年
6 柴玉荣;杜氏盐藻的RbcS基因及其调控区的克隆和功能鉴定[D];郑州大学;2005年
7 崔柳青;杜氏盐藻盐适应蛋白GPI基因的鉴定及其对食管鳞癌细胞侵袭的影响[D];郑州大学;2010年
8 姜国忠;杜氏盐藻hsp70基因的克隆及其肌动蛋白基因启动子驱动bar基因作为转基因筛选标记[D];郑州大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 洪利亚;杜氏盐藻富碘培养及生物学作用[D];天津科技大学;2012年
2 肖群;超声波对杜氏盐藻的辐射刺激效应研究[D];暨南大学;2010年
3 闫红霞;杜氏盐藻硝酸盐还原酶缺陷型突变株的功能互补分析[D];郑州大学;2007年
4 汪本凡;杜氏盐藻纯化及生物学特性研究[D];安徽农业大学;2004年
5 王月;几种理化因素对杜氏盐藻的生理学效应[D];辽宁师范大学;2007年
6 吕文兵;杜氏盐藻异养转化藻株的鉴定及初步功能分析[D];郑州大学;2010年
7 武昌俊;杜氏盐藻高产玉米黄素突变株的诱变筛选及生物学特性的研究[D];安徽农业大学;2010年
8 李慎柯;杜氏盐藻硝酸盐还原酶突变株的筛选和鉴定[D];郑州大学;2006年
9 李克锦;杜氏盐藻外源基因转化系统的建立[D];大连理工大学;2007年
10 柴丹丹;杜氏盐藻S-腺苷同型半胱氨酸水解酶相互作用蛋白的筛选与鉴定[D];郑州大学;2012年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026