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《郑州大学》 2010年
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碱性蛋白酶产生条件和酶学性质及其基因克隆的研究

敬蔚然  
【摘要】: 以本实验室保存的枯草芽孢杆菌115为材料,通过单因子实验法优化了其发酵产碱性蛋白酶的培养基和发酵条件,福林法测定酶活性,并研究了碱性蛋白酶的部分酶学性质。研究结果显示:玉米淀粉1.2%和豆饼粉0.3%可作为最适经济碳氮源。培养基初始pH 8.0,37℃,16h达到最大产酶量3384U/mL;碱性蛋白酶的最适反应pH和温度分别是pH 8.0和65℃,该酶具有较好的pH和热稳定性,pH 11时仍有最大酶活性的90%,在pH 7-11保存24 h仍然能保持至少82%的酶活。40-50℃保存3 h,酶活性几乎没下降。70℃条件下半衰期为2.5 h。Ca2+能有效激活酶活力,PMSF几乎完全抑制酶活性,推测该酶应属于丝氨酸碱性蛋白酶,该酶对表面活性剂和温和型去垢剂具有超强的耐受性。 另外,我们用PCR法从枯草芽孢杆菌115总DNA中克隆了碱性蛋白酶基因(sap),基因在GenBank中的登录号为GQ339614.1。比对了碱性蛋白酶和其他已经报道的丝氨酸碱性蛋白酶的氨基酸序列,结果表明其同源性达到99%,证实了我们之前的推测:该碱性蛋白酶属于丝氨酸碱性蛋白酶。然后我们利用网络资源对该酶的信号肽进行了预测。结果显示,前29个氨基酸是该酶的信号肽。同时我们还成功构建了表达载体pET-25b-sap,但将诱导后的宿主菌BL 21的培养液点在脱脂奶粉平板上未见蛋白酶活性,培养液上清中也未见蛋白酶活性。
【学位授予单位】:郑州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:Q814

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【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 黄文晶;高产碱性蛋白酶重组菌及其发酵性能[D];江南大学;2012年
【参考文献】
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【共引文献】
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【同被引文献】
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【二级参考文献】
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8 何凤云;耐高温碱性蛋白酶生产菌20101的选育及酶学性质研究[D];吉林农业大学;2012年
9 姜健美;黄酒糟蛋白酶法提取工艺研究[D];浙江大学;2007年
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