收藏本站
《郑州大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

HLA-G基因14bp缺失多态性与重度子痫前期的相关性研究

王婧彦  
【摘要】: 妊娠高血压疾病(hypertensive disorder complicating pregnancy) HDCP是指妊娠20周后出现的特发性高血压综合征,其病理、生理变化涉及全身各系统,包括妊娠期高血压、子痫前期(Preeclampsia)、子痫、慢性高血压并发子痫前期以及妊娠合并慢性高血压共五种类型。发生率在我国为9.4%-10.4%,国外为7%-12%,是孕产妇和围生儿病死率增加的主要原因,严重影响母儿安全。 重度子痫前期(Severe pre-eclampsia)是妊娠期高血压疾病的一种常见类型和重要的发病阶段,患者出现一过性的高血压、水肿、蛋白尿,其特征性病理变化是子宫螺旋小动脉生理性重铸障碍和内皮细胞损伤。关于重度子痫前期的发病机制存在很多学说却无统一定论,主要包括:免疫学说、遗传学说、异常滋养层细胞侵入子宫肌层、血管内皮受损、营养缺乏和胰岛素抵抗。其中免疫学说、遗传学说相互影响、相互渗透,逐渐形成了免疫遗传学说,成为子痫前期机制研究领域中最活跃的部分。 免疫遗传的核心为组织相容,人类白细胞抗原(human leukocyte antigen, HLA)作为病因学上一个重要的免疫遗传因子,是引发同种移植排斥反应的主要抗原,现多数学者认为携带父源性基因的胎儿对母体而言是一种同种半异体移植物。正常情况下,母、胎间存在免疫耐受,可保证母胎和平共处。在子痫前期状态下该免疫耐受被打破,可导致一系列类似于急性移植排斥反应的病理学改变,而胎儿一经娩出,则患者症状即可逆转。据此推测,妊娠是一种特殊的生理状态,无论正常或异常,均是母胎双方共同作用的结果。故致病基因既可能来自母体,也可能来自胎儿,或由母胎双方基因相互作用而致病。 人白细胞抗原-G(human leucocyte antigen-G, HLA-G)是一种非经典的HLA-G I b类抗原,主要表达于母胎界面绒毛外细胞滋养细胞(extravillous cytotrophoblast,EVCT)上。这种严格的组织学分布及其在妊娠免疫耐受中所起的重要作用特别引人瞩目。作为免疫耐受分子之一,它可通过多种机制参与机体免疫耐受的诱导与维持,参与病理妊娠的发生与发展,是研究HLA与子痫前期发病机制中最为关键的一部分。 包括本课题组在内的以往大量研究表明:子痫前期孕妇胎盘HLA-G mRNA和HLA-G蛋白表达异常或降低。当HLA-G表达缺陷时,可能导致母胎界面的免疫排斥反应增强,保护性反应减弱,滋养细胞侵入能力受损,导致胎盘浅着床,胎盘供流不足,最终引发子痫前期。近年来的研究发现,HLA-G基因多态性的存在可能是导致这一级联反应的始发原因。HLA基因的高度多态性导致了个体间免疫应答能力的不同和对疾病易感性出现差异。现在许多与HLA相关的疾病都需要以基因分型技术来重新研究,以便把易感基因定位于分子水平,为基因治疗奠定基础。 HLA-G基因多态性包括编码区和非编码区的多态性。其中编码区的多态性有限,多是无意义的突变和缺失,该核苷酸序列的变化不引起氨基酸种类的改变,不改变蛋白的数量和功能,最新研究发现HLA-G 3'-非翻译区(3-untranslated region,3'-UTR)第8外显子(8th Exon,Exon 8)中的14bp缺失/插入位点多态性影响HLA-G的转录和表达,与病理妊娠密切相关。关于此多态性与复发性流产的易感性已被证实,但与重度子痫前期的关系尚未明确,需要做进一步的研究。越来越多的研究表明妊娠期母体免疫系统对胚胎移植抗原的免疫耐受的形成不仅仅是妊娠期母体免疫系统的功能被抑制,而是母胎间免疫调节达到平衡状态的结果。国内外许多研究也均证实单从母亲一方面考虑HLA-G基因多态性与重度子痫前期的关系是不全面的,这种特殊的妊娠状态可能是由于母胎双方基因相互作用所致。并且此多态性的分布会因地域、种族和人种的不同而存在差异,尚需做进一步的探讨。 目的 本研究采用聚合酶链反应技术(PCR),对河南地区汉族妇女中42对重度子痫前期孕妇及其新生儿和45对正常晚孕者孕妇及其新生儿,进行HLA-G基因第8外显子14bp缺失多态性的等位基因分型,分别比较两组孕妇之间和两组新生儿之间等位基因及基因型的频率分布,通过母/儿基因型配伍,比较两组间基因型配伍频率分布的差异。进而来研究河南地区汉族妇女重度子痫前期与此多态性的关系,为进一步探讨重度子痫前期的发病机制提供重要线索,也为临床上利用母胎间信息预测子痫前期的发病风险提供实验证据。 材料与方法 1研究对象 选择2008年10月至2009年2月在郑州大学第三附属医院产科住院,经临床确诊的42对重度子痫前期孕妇及其新生儿为病例组。诊断标准按人民卫生出版社第七版《妇产科学》,并排除内分泌疾病、慢性高血压病、肾脏疾病、糖尿病、肿瘤、炎症等,且所有患者均随访至产后12周。患者平均年龄(30.60±5.76)岁,平均孕周为(35.95±3.22)周。另选择同期的正常晚孕的孕妇及其新生儿45对为对照组,平均年龄(30.09±4.80)岁,平均孕周为(36.52±1.56)周。两组孕妇均为河南地区居民、汉族、无异族通婚史、无血缘关系,并且孕妇年龄、孕周及孕产次比较,均无显著性差异(P0.05)。 2方法 2.1标本采集 分别抽取重度子痫前期和正常晚孕组孕妇外周静脉血2ml,同时于两组孕妇分娩时无菌抽取脐静脉血2ml,母、脐血均采用枸橼酸钠抗凝,-20℃冰箱冻存待检。 2.2盐析法提取基因组DNA提取 取冰冻全血室温解冻,裂解红细胞后在离心沉淀的白细胞中加入白细胞裂解液震荡悬浮,55℃水浴30min,冷却至室温,饱和氯化钠盐析后取上清液加入750μL无水乙醇充分颠倒混匀后,见絮状析出,70%乙醇500μL洗涤,室温至干,溶于三蒸水中,用紫外分光光度计测量其含量及纯度。调节DNA浓度至100ng/μl左右,-80℃保存备用。 2.3HLA-G基因分型 2.3.1引物设计 根据PCR法进行设计,由上海英骏生物公司合成。 Exon8部分片段:上游:5'-GTGATGGGCTGTTTAAAGTGTCACC-3'下游:5'-GGAAGGAATGCAGTTCAGCATGA-3' β-actin:上游:5'-GTGGGGCGCCCCAGGCACCA-3'下游:5'-GTCCTTAATGTCACGCACGATTTC-3' 2.3.2 PCR扩增反应体系 采用25μl反应体系,包含10×Taqbuffer缓冲液2.5μl;2mM dNTPMix 2.5μl; 5μM HLA-G引物2μl;5μM内对照引物2μl;2.5U/LTaq DNA聚合酶0.5U;25mM MgCl2 1.5μl;基因组DNA 1μl;三蒸水13μl。96孔PCR反应板加盖石蜡油。 2.3.3 PCR反应条件 94℃预变性为5min,94℃30s,64℃1min,72℃2min,共循环35次,最后72℃延伸10 min。 2.4 PCR扩增产物的电泳 取5μl PCR产物直接加入含有0.5μg/ml 0.5×1000 Gelred核酸染色剂的3.5%琼脂糖凝胶电泳槽,100V电泳45min,于凝胶图象分析系统观察,拍照。根据14bp缺失多态性的不同,HLA-G基因的Exon 8 PCR扩增产物的电泳结果有三种,分别判读为:扩增产物为一条带,长度为210bp,可判读为缺失纯合子(-14bp/-14bp);扩增产物为一条带,长度为224bp,可判读为插入纯合子(+14bp/+14bp);扩增产物为两条带,长度分别为210bp和224bp,可判读为缺失杂合子(-14bp/+14bp);长度为548bp的是内参片段β-actin。2.5 224bp和210bp扩增产物测序 选取电泳图像均为单独一条带扩增产物,缺失纯合子(-14bp/-14bp)和插入纯合子(+14bp/+14bp)的PCR反应原液,送Invit rogen公司纯化并测序。测序结果与GenBank Blast比对,与HLA-G Exon8片段相符(GenBank登录号J52705)。224bp产物比210bp产物多了一段长度为14bp的基因序列:ATTTGTTCTTGCCT。 3统计学处理 采用SPSS13.0软件包进行统计学分析,应用拟合优度χ2检验判断基因型的分布是否符合Hardy-Weinberg平衡;两组间计量资料比较用单因素方差分析;直接计算法计算各组等位基因频率;等位基因的频率分布差异采用四格表法进行χ2检验,对不适合χ2检验条件的数据用Fisher精确概率法计算P值。当两组间等位基因、基因型频率或者基因型配伍具有显著差异(P0.05)时,进一步计算其关联强度比值比(OR值)及95%可信区间(CI)。以a=0.05为检验水准。 1两组孕妇临床一般资料比较 分析重度子痫前期组和正常晚孕组孕妇临床资料,进行比较可知两组孕妇在年龄、分娩孕周上的差异均无统计学意义(P0.05); 2HLA-G基因14bp缺失多态性分析 重度子痫前期组和正常晚孕组孕妇及其新生儿的HLA-G基因14bp缺失多态性的基因型频率分布,均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P0.05),该群体基因符合遗传平衡;2.1两组孕妇HLA-G14bp缺失多态性的等位基因、基因型频率比较 重度子痫前期组孕妇HLA-G14bp缺失多态性等位基因频率:+14bp为34.5%、-14bp为65.5%,正常晚孕组依次为26.7%、73.3%,两组比较,差异无统计学意义(χ2=1.266 P=0.260);两组孕妇间基因型比较:重度子痫前期组中缺失纯合子(-14bp/-14bp)、缺失杂合子(-14bp/+14bp)、插入纯合子(+14bp/+14bp)基因型的分布频率依次为42.9%、45.2%、11.9%,正常晚孕组中的频率依次为51.1%、44.4%、4.4%,各基因型分布频率进行比较,差异均不具有统计学意义(P0.05) 2.2两组新生儿HLA-G14bp缺失多态性的等位基因、基因型分布频率比较 重度子痫前期组新生儿HLA-G14bp缺失多态性等位基因频率:+14bp为44.4%、-14bp为56.0%,正常晚孕组依次为30.0%、70.0%,两组比较差异无统计学意义(χ2=3.678 P=0.055);两组新生儿间基因型比较:重度子痫前期组中缺失纯合子(-14bp/-14bp)、缺失杂合子(-14bp/+14bp)、插入纯合子(+14bp/+14bp)基因型的分布频率依次为28.5%、54.8%、16.7%,正常晚孕组中的频率依次为48.9%、45.2%、8.9%,各基因型分布频率进行比较,差异均不具有统计学意义(P0.05); 2.3两组母/儿HLA-G14bp缺失多态性的基因型配伍比较 重度子痫前期组中母/儿为缺失纯合子(-14bp/-14bp)的基因型配伍的频率为14.3%,显著低于正常晚孕组的33.3%,两组比较,差异具有统计学意义[χ2=4.304,P=0.038;OR=3.000(95%CI 1.036-8.690)]。余基因型配伍类型在两组间比较差异均无统计学意义(P0.05) 结论 1中国河南地区汉族孕妇中,HLA-G基因14bp缺失多态性与重度子痫前期的易感性之间存在相关性; 2母/儿为缺失纯合子(-14bp/-14bp)基因型配伍时,孕妇发生重度子痫前期的风险可能会降低。
【学位授予单位】:郑州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R714.245

【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 朱晓明;杨瑛;姚元庆;;HLA-G亚型蛋白在正常妊娠及重度子痫前期患者胎盘中的表达差异[J];实用医学杂志;2006年04期
2 贾艳菊;陈叙;崔洪艳;张春红;李延杰;;子痫前期易感基因HLA-G SNPs的生物信息学分析和筛选[J];中国妇幼保健;2010年33期
3 蔡颖;姜锋;闵保华;王珺;穆秋莲;尹国武;;重度子痫前期患者与正常足月妊娠妇女外周静脉血中可溶性HLA-G水平比较研究[J];科学技术与工程;2008年12期
4 夏洁;子痫前期胎盘中的非经典组织相容性抗原HLA-G的表达[J];国外医学.妇产科学分册;1995年01期
5 刘霞;HLA-G——母胎界面的一个免疫耐受分子[J];免疫学杂志;2001年S1期
6 赵春;HLA-G及其临床意义的研究进展[J];四川医学;2002年08期
7 朱颖;HLA-G与妊娠免疫[J];国外医学.妇产科学分册;2002年03期
8 韩子英;HLA-G结构与功能研究进展[J];国外医学.免疫学分册;2000年02期
9 肖漓,石炳毅;HLA-G:移植免疫相关的新分子[J];解放军医学杂志;2005年05期
10 孔庆波;HLA-G与妊娠疾病[J];榆林学院学报;2003年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 凌玲;孙丽洲;肖云山;;子痫前期患者血清及尿液胎盘生长因子水平的变化特征[A];全国围产医学专题学术研讨会论文汇编[C];2007年
2 郑明阳;马晓艳;;子痫前期及子痫患者血小板膜糖蛋白Ibα(CD42b)及PLT水平测定及意义[A];东北三省第四届妇产科学术会议论文汇编[C];2008年
3 张冬丽;夏亚军;;bFGF对子痫前期患者内皮细胞ICAM-1表达影响的实验研究[A];东北三省第四届妇产科学术会议论文汇编[C];2008年
4 刘全;贺晶;董旻岳;胡文胜;王浛知;;子痫前期患者血清巨噬细胞集落刺激因子水平的变化及意义[A];中华医学会第五次全国围产医学学术会议论文汇编[C];2005年
5 潘永苗;郑斐;贺晶;;重度子痫前期并发胸腹腔积液15例临床分析[A];2009年浙江省围产医学学术年会暨“围产医学热点问题”专题学术论坛论文汇编[C];2009年
6 张向丽;刘凤英;周什元;;子痫前期患者血清TPA与完整hCG的相关性变化[A];中华医学会第五次全国围产医学学术会议论文汇编[C];2005年
7 乐怡平;林建华;林其德;;早发型子痫前期-子痫抗凝治疗疗效多中心临床研究[A];中华医学会第三次全国妊娠期高血压疾病学术研讨会论文汇编[C];2011年
8 李雪兰;赵正杭;李春芳;苟文丽;;重度子痫前期胎盘血管平滑肌细胞L-型钙电流检测[A];中华医学会第三次全国妊娠期高血压疾病学术研讨会论文汇编[C];2011年
9 李雪兰;冯丹艳;王咏梅;苟文丽;;探讨母体铁储存与重度子痫前期心脏损害的关系[A];中华医学会第三次全国妊娠期高血压疾病学术研讨会论文汇编[C];2011年
10 叶元华;刘玲;詹瑛;彭伟;;子痫前期患者血清可溶性血管内皮生长因子受体1的水平及意义[A];中华医学会第五次全国围产医学学术会议论文汇编[C];2005年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 编译 王炜;孕妇出现子痫前期可增加心脏病风险[N];医药经济报;2009年
2 欧阳吁;妊娠期高血压怎么办[N];家庭医生报;2006年
3 章关春孙美燕;妊高征母婴预后可以改善[N];健康报;2007年
4 北京大学附属第一医院妇产科教授 杨慧霞 陆铁琳;围产医学的四个研究热点[N];健康报;2007年
5 记者 蒋炜宁;死亡孕产妇中2/3家中非法接生[N];宁波日报;2006年
6 本报记者 韩金祥;援疆医疗队巡诊记[N];吉林日报;2011年
7 采写 本报记者 叶芳 通讯员 林巧璇 受访专家 广州医学院荔湾医院妇产科副主任医师 郑菊香;高龄产妇“是非”多[N];广东科技报;2008年
8 首席记者 刘海鹰;春节,忙碌的白衣天使们[N];盘锦日报;2008年
9 钟山编译;牙龈疾病可能增加患心脏病风险[N];中国中医药报;2008年
10 北京妇产医院北京妇幼保健院 游川 刘军;冷天更易发生妊娠高血压[N];健康报;2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 辛虹;膜联蛋白A家族与子痫前期[D];河北医科大学;2011年
2 钟艳;孕早期预测子痫前期、胎儿生长受限相关因素研究[D];中南大学;2012年
3 夏俊霞;骨桥蛋白在子痫前期发病机制中作用的研究[D];华中科技大学;2010年
4 周雪;子痫前期孕妇胎盘和血清中氧化应激损伤与滋养细胞人类白细胞相关性抗原G表达的相互影响[D];南京医科大学;2012年
5 刘大艳;缺氧对重度子痫前期患者胎盘绒毛组织代谢足迹变化的影响[D];南方医科大学;2011年
6 罗欣;Gadd45α介导的信号转导通路参与子痫前期发病的分子机制及实验研究[D];重庆医科大学;2011年
7 朱继文;sFlt-1与子痫前期患者围生结局相关性的研究[D];天津医科大学;2011年
8 陈茜;缺氧条件下绒毛外滋养细胞凋亡和细胞基质蛋白Cyr61表达下调在子痫前期发病机制的相关研究[D];华中科技大学;2011年
9 姜子燕;sFlt-1和低氧介导的内皮功能降低及氧化应激恶性循环在子痫前期滋养细胞凋亡机制中的研究[D];南京医科大学;2012年
10 周丽;RhoA/Rock2与子痫前期[D];华中科技大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王婧彦;HLA-G基因14bp缺失多态性与重度子痫前期的相关性研究[D];郑州大学;2010年
2 王海燕;白血病抑制因子在子痫前期患者胎盘组织中的表达及意义[D];山西医科大学;2011年
3 邱玲;脂蛋白-a及尿酸在子痫前期患者母血、脐血、胎盘后血中变化的研究[D];吉林大学;2010年
4 邢宝相;可溶性endoglin在子痫前期患者胎盘组织中的表达及意义[D];青岛大学;2010年
5 孙媛;胎盘蛋白13和glycodelin在子痫前期患者血清中的表达[D];山东大学;2010年
6 杨丹林;重度子痫前期并发低蛋白血症对妊娠结局的影响[D];福建医科大学;2010年
7 冯敏;子痫前期患者血清及尿液中sFlt-1/PLGF值的变化[D];山西医科大学;2011年
8 王慧;子痫前期患者肝肾功能的损害与妊娠结局的探讨[D];山西医科大学;2011年
9 周琼洁;TFPI-2在子痫前期发病机制中的作用[D];复旦大学;2010年
10 尹红亚;抗磷脂抗体与子痫前期关系的Meta分析[D];河北医科大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026