收藏本站
《郑州大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

禽流感病毒H5N1亚型河南分离株NP基因的原核表达及T细胞表位筛选

邬成业  
【摘要】: 禽流感(Avian Influenza AI)是由正黏病毒科、流感病毒属、A型流感病毒引起的一种禽类全身性或呼吸器官性传染病。禽流感呈世界性流行,是目前影响世界养禽业的最严重疫病之一,它不仅给养禽业造成了巨大的危害,而且也能感染人并导致死亡,给人类的健康带来了巨大的威胁。针对禽流感流行的严峻状况和目前尚无治疗的特效药物,迫切需要研制一种能预防高致病性禽流感的广谱性疫苗,从而有效地预防和控制禽流感,促进畜牧业的迅发展,保障人们的身体健康。 在禽流感病毒主要组成蛋白中,核衣壳蛋白(NP)基因在A型流感病毒中同源性较高,保守性较强,具有型特异性,因此建立在NP蛋白基础上的多肽疫苗对AIV的预防将更具有意义。 参考Genbank上发表的H5型禽流感病毒(A/chicken/Henan/01/2004(H5N 1))基因序列,利用PCR方法从质粒T-NP上扩增NP基因,然后构建成重组表达质粒pET32a-NP并转化大肠杆菌Rosetta,经酶切及PCR方法鉴定筛选出阳性克隆。测序证明,目的基因正确插入表达载体,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,收集不同诱导时间的菌液进行SDS-PAGE,结果表明AIV NP基因在大肠杆菌中以可溶的形式高效表达,分子量约为70kD,且能与H5N1亚型AIV阳性血清特异性反应,具有良好的抗原性。将表达蛋白经镍柱纯化后作为抗原对2月龄鸡进行免疫,三免后测得免疫后鸡抗体效价达104以上。同时用计算机预测NP的T细胞抗原表位并利用固相多肽合成(SPPS)方法将其合成,分离免疫鸡的外周血单核细胞(PBMC)调整浓度至2×106个/mL铺96孔细胞培养板,过夜后将预测合成的多肽用PBS溶解后以20μg/孔加入细胞中,用加入终浓度为15μg/mL的ConA为阳性对照后,MTT法检测结果表明P1-2(NP36),P1-3(NP380),P3-9(NP155)反应效果较好,可能是禽流感病毒核衣壳蛋白T细胞抗原表位。
【学位授予单位】:郑州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S852.65

【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 许黎黎;;甲型H1N1流感病毒鼠肺适应株的建立及潜在分子机理研究[J];中国实验动物学报;2011年04期
2 宋建领;张文东;王金萍;李作生;冯子良;胡媛媛;郭松辉;张应国;范泉水;宋学林;邱薇;张富强;;禽流感病毒型及亚型特异性免疫荧光技术的研究[J];云南大学学报(自然科学版);2007年S3期
3 刘志杰;李如举;周莉;曾智勇;汤德元;王彬;甘振磊;王凤;;禽流感病毒基因组及检测方法概述[J];山地农业生物学报;2011年03期
4 李雪雁;王羽翔;刘海雄;周琳;;基于HA和NA基因序列的鸭源H5N1禽流感病毒系统发育分析[J];畜牧与兽医;2011年03期
5 初亚男;成思佳;梁超;周国华;;可视化等温扩增法快速筛查并分型禽流感病毒[J];中华实用诊断与治疗杂志;2011年07期
6 李昀海;赵焕云;张文东;吕粤;岳亮;宋建领;范泉水;张应国;张富强;;云南2株H4N6亚型禽流感病毒株的分离与鉴定[J];畜牧与兽医;2011年06期
7 王延树;李建丽;梁武;尤永君;杨保收;邹立宏;刘浩;;13株H9N2亚型禽流感病毒HA基因变异分析[J];中国家禽;2011年15期
8 朱广蕊;潘耀谦;夏银可;刘兴友;;甲型H1N1流感病毒致病机理研究进展[J];动物医学进展;2011年08期
9 石佳;郑世军;崔胜;郭英;任立明;徐小宁;;禽流感病毒M2胞外区(M2e)多拷贝片段的原核表达及其免疫原性分析[J];细胞与分子免疫学杂志;2011年07期
10 宋建领;叶丛华;田建国;张文东;赵焕云;吕粤;岳亮;邱薇;刘加茂;冯子良;张思东;范泉水;张应国;张富强;;云南2008~2009年H9N2亚型禽流感病毒血凝素和神经氨酸酶基因序列分析[J];畜牧与兽医;2011年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张洪军;;禽流感后养禽业如何走出低谷[A];“科技进步推进畜牧业现代化”科技论文集[C];2011年
2 单芬;郑煦灿;韦良孟;徐成刚;罗开健;任涛;辛朝安;焦培荣;廖明;;一株H5N2亚型鹦鹉源禽流感病毒分子进化分析[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
3 李艳华;佟恒敏;于康震;;抗禽流感病毒中草药的研究[A];中国畜牧兽医学会2003年学术年会论文集[C];2003年
4 高雪丽;;抗禽流感病毒免疫的研究进展[A];2008年中国病理生理学会第十一届肿瘤和第十二届免疫专业委员会学术会议论文集[C];2008年
5 何义林;叶冬青;;禽流感病毒对人类感染机制的研究进展[A];第二届全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2008年
6 李英霞;杨丽丽;高睿;;禽流感的危害与防制[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十四次学术研讨会论文集[C];2008年
7 孙恩泽;谢敏;赵海粟;黄碧海;刘书琳;张万坡;张志凌;王汉中;庞代文;;量子点标记禽流感病毒[A];第六届全国化学生物学学术会议论文摘要集[C];2009年
8 陈化兰;;中国H5N1禽流感病毒的进化和疫苗研究研制及应用[A];全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2006年
9 刘桂林;张小辉;王锦平;;禽流感病毒H6N2亚型NA基因序列相关肽链特性及其二级结构分析[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
10 ;热电在AnalyticaChina 2006展出禽流感检测仪器[A];第三届科学仪器前沿技术及应用学术研讨会论文集(二)[C];2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 张小军 肖成林;世卫组织专家认为禽流感病毒“聪明”可怕[N];新华每日电讯;2005年
2 中国疾病预防控制中心应急办副主任 余宏杰;禽流感病毒不怕冷[N];健康报;2008年
3 沈防指;东台海安发现禽流感病毒[N];新华日报;2008年
4 记者 齐芳;我禽流感病毒研究获突破性进展[N];光明日报;2009年
5 记者 李大庆;我科学家揭开禽流感病毒“神秘面纱”[N];科技日报;2009年
6 记者 李天舒;禽流感病毒面目部分被揭示[N];健康报;2009年
7 邵阳市疾病控制中心 伍新华;禽流感病毒怕热不怕冷[N];大众卫生报;2009年
8 吴晶晶;我国禽流感病毒研究获重大突破[N];中国食品质量报;2009年
9 宋晓晖 等供稿;1997年,禽流感病毒开始感染人[N];大众科技报;2009年
10 记者 周婷玉;甲流和禽流感病毒重配风险性很低[N];新华每日电讯;2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 胡思顺;禽流感病毒H9N2亚型和鸡毒霉形体HS株主要抗原性基因的克隆与表达研究[D];华中农业大学;2005年
2 侯小强;促炎细胞因子及p53蛋白在哺乳动物禽流感致病中的作用研究[D];吉林大学;2010年
3 张文韬;基于量子点的禽流感病毒检测新方法探索[D];武汉大学;2010年
4 宋翠平;H5N1禽流感和鹅Ⅰ型副粘病毒分离株的生物学特性及感染性的研究[D];中国海洋大学;2010年
5 朱光剑;中国南方H9N2禽流感病毒的分子进化分析及其对小鼠致病性研究[D];华东师范大学;2012年
6 鞠湘武;H5N1型禽流感病毒损伤细胞溶酶体的机制研究和南极极端环境下科考队员的应激反应研究[D];北京协和医学院;2012年
7 柴洪亮;黑龙江地区野生鸟类禽流感的分子流行病学调查研究[D];东北林业大学;2012年
8 邹镇;H5N1型禽流感病毒和甲型H1N1流感病毒致急性呼吸损伤的机理研究[D];北京协和医学院;2012年
9 李永强;H5N1禽流感病毒PB1 T677M 位点与PB2 I63T位点对病毒毒力的影响[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年
10 刘旭东;H9N2重组病株药物分子动力学与代谢核心研究[D];大连理工大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 邬成业;禽流感病毒H5N1亚型河南分离株NP基因的原核表达及T细胞表位筛选[D];郑州大学;2010年
2 蒲娟;禽流感病毒型特异性单克隆抗体的制备及初步应用[D];中国农业大学;2005年
3 赵会连;不同处理和不同保存时间对重组(H5N1亚型,Re-5株)禽流感病毒效力的影响[D];河南农业大学;2010年
4 刘红彦;H9N2 AIV的NS1基因原核与真核表达及NS1蛋白对几种细胞凋亡的影响[D];西北农林科技大学;2010年
5 孙宇;禽流感病毒血凝素的分离纯化以及快速评估其宿主特异性方法的研究[D];西北大学;2010年
6 王建琪;禽流感野鸭源分离株H2N2亚型和H3N8亚型基因特征及遗传进化分析[D];东北林业大学;2011年
7 柳斌;禽流感病毒核蛋白基因的克隆、表达及其相互作用蛋白的筛选[D];湖南农业大学;2007年
8 王乃福;安徽株H5N1 NP的原核表达及与宿主蛋白相互作用的初步研究[D];中国疾病预防控制中心;2008年
9 林彬彬;禽流感病毒H9亚型福建分离株的全基因组测定及遗传演化分析[D];福建农林大学;2011年
10 张强哲;H5亚型禽流感病毒HA DNA疫苗的研究[D];西北农林科技大学;2003年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026