不同糖浓度培养雪旺细胞NGF和CGT表达变化及Egb761干预后的变化

【摘要】： 背景与目的 雪旺细胞(Schwann Cell, SC)是周围神经系统的胶质细胞,除了与周围神经的发生、发育、形态、功能等方面密切相关外,在周围神经损伤后的再生与修复过程中也起着非常重要的作用,SC还能分泌多种活性物质诱导、刺激和调控轴突的再生和髓鞘的形成。 神经生长因子(nerve growth factor, NGF)是最早发现的细胞生长调节因子,也是迄今为止研究得最清楚的一个神经营养因子。NGF在神经元的发育、轴突的生长、递质的合成及细胞的凋亡等阶段均起着重要的作用。当外周神经受损伤时,SC成为其主要来源。 半乳糖神经酰胺转移酶(Galactosylceramide transferase, CGT)是合成神经髓鞘主要成份半乳糖神经酰胺的限速酶,在髓鞘以及体外培养的SC中表达。CGT是微粒体酶,主要在神经、脑、肾脏中表达,它催化半乳糖转移到神经酰胺而合成半乳糖神经酰胺(Galactosylceramide, GalC)。GalC是髓鞘中最丰富的脂质之一,在中枢或周围神经系统中,占髓鞘干重的20%,对髓鞘的结构和功能起重要作用,但其过度的表达可诱导SC的凋亡。 银杏叶提取物具有抗脂质过氧化,对缺血-缺氧性损伤、机械损伤的神经元具有保护作用,并且具有抑制细胞凋亡的作用。 目前,国内对于髓鞘形成细胞SC的研究大多集中在组织工程方面的研究,而对于其本身分泌活性物质对于周围神经的作用研究并不多见。不同浓度葡萄糖水平对SC所分泌的NGF及CGT影响的研究颇少见及关于银杏叶提取物在糖尿病周围神经保护方面的作用研究报道较少,特别是低糖对SC分泌的活性物质的影响尚未见报道。本实验的目的就是为了观察不同的糖浓度对SC NGF mRNA.CGT mRNA的影响及银杏叶提取物干预所设定的低糖及高糖组SC NGF mRNA.CGT mRNA表达的变化。 材料与方法 1实验方法 本实验首先将所培养的雪旺细胞分别于10mmol/L、25mmol/L、50mmol/L糖浓度下培养,采用RT-PCR技术,分别于培养后72h对各组的NGF mRNA,CGT mRNA表达进行测定。之后,用银杏叶提取物Egb761分别干预10mmol/L、50mmol/L糖浓度培养的SC,分别与未用Egb761干预的10mmol/L,50mmol/L糖浓度组进行比较,各组均培养72小时,采用RT-PCR技术,对各组的NGF及CGT基因表达进行测定。 2统计学方法 采用SPSS10.0统计软件进行统计分析,数据以均数±标准差(x)表示。数据经检验符合正态分布、方差齐,两组之间的比较用t检验,组间比较采用单因素方差分析(ANOVA),三组间的两两比较用LSD检验。以α=0.05为检验水准。 结果 1 SC细胞于不同的糖浓度培养过程中的形态学观察 倒置显微镜下观察25mM糖浓度下细胞形态呈长梭形或多个细胞呈多角形连接在一起,类似成纤维细胞,细胞核位于细胞中间,呈圆形,1OmM及50mM糖浓度下细胞成类圆形,细胞核不明显。 2不同糖浓度培养SC NGFmRNA、CGTmRNA表达的变化 经过扫描及统计分析发现,高糖及低糖时雪旺细胞CGT mRNA表达明显增高,而NGF mRNA表达降低,组间进行比较得出：高糖组、低糖组与正常糖浓度组比较差异均有统计学意义,P0.05；低糖与高糖组比较差异无统计学意义,P0.05。 3 Egb761干预后NGF mRNA、CGT mRNA表达的变化 经过扫描及统计分析发现Egb761干预的高糖组与低糖组分别与空白对照组进行比较,NGF mRNA的表达差异均有统计学意义(P0.05),CGTmRNA表达无统计学意义P0.05。 结论 1、本实验于低糖及高糖浓度培养SC,与正常糖浓度相比NGF mRNA的表达减少,CGT mRNA的表达增加,且差异均具有统计学意义,提示高糖及低糖均可能导致周围神经的损伤 2、银杏叶提取物Egb761分别干预10mmol/L、50mmol/L糖浓度培养的SC72h,测定NGF mRNA的表达分别与未加Egb761干预组比较均增加,差异均具有统计学意义,提示银杏叶提取物对可能对周围神经损伤的修复具有一定促进作用。

【关键词】：雪旺细胞 低糖 高糖 神经生长因子基因 半乳糖神经酰胺转移酶基因 银杏叶提取物
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R587.2
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