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《郑州大学》 2010年
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FADD、Livin在稽留流产绒毛组织中的表达及其意义

马丽红  
【摘要】: 背景与目的 稽留流产(missed abortion)又称过期流产。若死亡的妊娠物在宫腔内滞留过久,,可发生严重的凝血功能障碍。且胚胎死亡后滞留宫腔,易于子宫肌壁粘连,清宫困难。发生稽留流产的原因较为复杂。本研究主要是检测Fas相关死亡结构域蛋白(Fas-associated protein with death domain, FADD), Livin是凋亡抑制蛋白家族(inhibitor of apoptosis proteins, IAPs)中的成员,两者在稽留流产患者绒毛组织中的表达情况,以研究FADD、Livin与稽留流产的关系。 FADD是Chinnaiyan等克隆出的一种能与Fas相互作用而诱导细胞凋亡的蛋白,是凋亡通路上的关键信号转导因子。FADD是公认的凋亡基因位于人11q13.3,其主要的凋亡传导途径为:Fas触发凋亡是通过FADD来募集并激活caspase-8来实现的。细胞受Fas系统作用后,FADD蛋白移至质膜,FADD的死亡结构域(death domains, DD)与死亡受体Fas的DD部位结合,进而FADD与caspase-8前体的死亡效应结构域(death effector domains, DED)结合。Caspase-8前体经过加工,以活性形式从死亡诱导信号复合体(death-inducing signaling complex, DISC)中释放出来,进而使其他效应子caspase (caspase-3、6、7等)裂解、激活,激活caspase级联反应,分解细胞蛋白,触发细胞凋亡。对FADD进行了深入的研究后,发现FADD不仅在凋亡信号传导通路中起重要作用,而且在胚胎的发育和免疫系统等方面也有一定的作用。 Livin是2000年被发现的,它属于抑制细胞凋亡蛋白(inhibitor of apoptosis protein, IAP)家族的新成员。杆状病毒IAP重复序列(baculovirus IAP repeat,BIR)结构是IAPs蛋白家族发挥抗凋亡作用的关键,而BIR功能区可与半胱天冬酶(caspase)结合。Livin能有效阻断由FADD等多种促凋亡因子诱导的细胞凋亡。它阻断凋亡受体和以线粒体为基础的凋亡途径是通过抑制caspase的活性,尤其是caspase-3/-7和caspase-9的活性达到的。目前研究表明Livin主要在胎儿发育过程中多种组织高表达,如胎儿的脑、胸腺、胎盘、肾和肝,而正常成年组织未见表达(除胎盘)。Hakhyun等采用RT-PCR技术检测到LivinmRNA在胎盘的滋养层细胞中有表达,主要在在绒毛膜细胞滋养层的细胞浆中有表达,在合体滋养层细胞中表达较低,在胚胎发育中起调控作用。 本研究采用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)方法和免疫组化SP法,检测稽留流产绒毛组织及正常早孕绒毛组织中FADD与Livin的表达情况,分析FADD与Livin与稽留流产的关系,及两者之间的相关性。探讨两者在稽留流产发生发展中的作用,进一步揭示稽留流产可能的分子生物学发病机制。 材料与方法 1临床病例资料 标本选自2008年7月至2008年11月在郑州大学第一附属医院和郑州大学第三附属医院妇产科的稽留流产患者30例作为实验组,稽留流产诊断标准为:以第7版妇产科教材为主。以同期无合并症的健康人群行人工流产的早孕妇女30例为对照组。所有研究对象无合并症,无全身感染性疾病,月经周期规律,流产前无用药史。两组样本的基本临床资料如年龄、孕周数无统计学意义。均为早期流产(孕周12周),平均年龄27.6岁(23-37岁)。2实验方法 运用RT-PCR方法从基因水平分别检测正常妊娠与稽留流产患者胎盘绒毛组织中FADDmRNA及Livin mRNA的表达。应用免疫组化SP法从蛋白水平分别检测正常妊娠与稽留流产患者胎盘绒毛组织中FADD蛋白及Livin蛋白的表达。 3统计学分析 采用SPSS13.0统计软件分析,计数资料进行χ2检验和Fisher精确概率检验。计量资料进行t检验。以α=0.05为检验水准。 结果 免疫组化结果发现FADD蛋白在稽留流产组绒毛组织中表达的阳性率为86.67%(26/30),其在正常妊娠组绒毛组织中表达的阳性率为60.0%(18/30)。FADD蛋白的表达稽留流产组高于正常妊娠组,差异具有统计学意义(χ2=5.455,P=0.020)。而Livin蛋白在稽留流产组绒毛组织中表达的阳性率为63.33%(19/30),其在正常妊娠组绒毛组织中表达的阳性率为90.0%(27/30)。Livin蛋白的表达稽留流产组低于正常妊娠组,差异具有统计学意义(χ2=5.963,P=0.015)。 RT-PCR结果为稽留流产组绒毛组织中FADDmRNA表达高于正常早孕组(t=-7.220,P=0.002),而稽留流产组绒毛中LivinmRNA的表达则低于正常早孕组(t=10.661,P=0.000)。 而进行FADD、Livin在稽留流产组胎盘滋养细胞中表达的相关性比较后发现,两者之间不存在关联性。 结论 1 FADD蛋白及FADDmRNA在稽留流产组绒毛组织中的表达显著高于正常早孕组,提示其高表达在稽留流产的发生发展中可能有一定作用。 2 Livin蛋白及LivinmRNA在稽留流产组绒毛组织中的表达显著低于正常早孕组,提示其低表达与稽留流产关系密切。 3 FADD在稽留流产胎盘滋养细胞中的高表达和Livin在稽留流产胎盘滋养细胞中的低表达,提示其可能参与稽留流产的发生与发展。可望为稽留流产的预防、基因诊断和治疗提供新的切入点。
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