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《郑州大学》 2011年
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GSH改善冷冻对精子氧化应激损伤的初步研究

武明莉  
【摘要】:背景与目的 近年来,随着社会经济的发展,人们面对着逐渐加剧的精神压力和及环境污染等一系列社会问题,男性不育症的发病率正成逐年上升的态势,而对精子进行有效的冷冻可作为一种保存男性生育力的积极手段。辅助生殖技术近年来已有了长足进步,但对于不孕不育患者双方,其成功率却远无法达到他们所期盼。男性精子的质量直接影响着临床结局,这其中包含两方面的意义,一是精子的数量和活力;二是精子中所含遗传物质的完整性。前者的检测多见于精液常规检查、精子形态学分析检查等,仅能体现精液的一般“质量”,而无法直接体现精子所含遗传物质的完整性。近年来,氧化应激理论成为男性学研究中的一个热门话题。少量、持续的活性氧((Reactive Oxygen Species, ROS)有利于维持细胞的正常功能,当ROS过量时可可引起氧化应激损伤((Oxidative Stress, OS),损害机体的氧化防御系统。精子膜含有大量的多聚脂肪酸,而细胞质中的氧化物清除酶含量较低,决定了其更易于受到ROS诱导的损伤。精液中的ROS主要来自于白细胞和未成熟的精子,在行辅助生殖技术时,例如离心、冷冻-复苏过程,可产生大量的活性氧对精子造成损伤,而使用受损后的精子行助孕,不仅会降低临床结局,甚至可对后代产生严重影响,故对精子损伤进行有效的检查,可早期筛选对后代致畸的风险,这对于临床尤为重要。 谷胱甘肽(GSH)是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸以肽键形式缩合而成的一种化合物,广泛存在于有机体中。它可以运输氨基酸通过细胞膜,且GSH的-SH基可保护细胞膜上的高度不饱和脂肪酸免遭氧化,在细胞的脂质过氧化损伤中发挥着重要的作用[1]。它既可以作为谷胱甘肽过氧化物酶的底物,清除细胞内脂质氧化物及过氧化氢,又可以单独与自由基结合发挥自由基清除剂的作用。辅助生殖技术中常用的冷冻保护剂分为渗透性(甘油、乙二醇、二甲亚砜)和非渗透性(氨基乙酸、蔗糖、乳糖)等,甘油仍然是人类精液冷冻保存首选的保护剂。一般分为单一甘油型、甘油复合型。甘油复合型冷冻保护液是以甘油为基础,加入蛋黄或白蛋白或蔗糖等高分子物质,以及两性离子缓冲系统,这是目前应用最为广泛和成熟的冷冻保护液。然而,受高水平活性氧刺激的不育患者,精液冷冻复苏效率往往不能令人十分满意。本课题拟通过在冷冻复苏过程中添加少量的GSH,研究其在保护精子抗冷冻-解冻过程中氧化应激损伤的影响,及其临床结局 材料与方法: 1.选择2011年2月至2011年5月在郑州大学第一附属医院生殖中心就诊或拟行助孕的男性患者精液标本,共计60份; 2.以血细胞计数板对每份精液标本行常规检查,包括:活力(a级+b级)、活动率及总密度; 3.苏木精-伊红染色法行精子形态学分析,记录正常形态精子比率; 4.利用流式细胞仪测定TUNEL细胞阳性比率作为反映精子DNA完整性的指标; 5.采用硫代巴比妥酸(TBA)比色法,测定MDA(丙二醛)的含量,作为精子膜脂类过氧化反应程度的指标; 6.追踪此60位患者在我中心行辅助生殖助孕的临床结局,包括女方取卵数、受精率、卵裂率、优质胚胎率; 结果: 1.冷冻可对精子造成一定的损伤,尤其是对重度少弱精组患者损伤较为明显;加入GSH后复苏,对轻度少弱精症患者精液的抗氧化应激损伤能力改善较为明显: 2.冷冻复苏对大量吸烟患者精子的损伤明显大于少量吸烟或不吸烟患者的精子,差异具有显著性;但加入GSH后对其改善作用并不明显; 3.加入GSH后复苏对既往曾有前列腺炎史患者精液抗氧化应激损伤的能力改善较大; 4.在行IVF或ICSI助孕中,二者临床结局无明显差异性,其TUNEL细胞阳性率和MDA含量亦无明显差异; 5.当TUNEL细胞阳性率超过65%时,可大大影响临床结局。 结论: 1.体内长期存在高水平活性氧刺激的不育患者,体外添加GSH并不能很好的改善精子抗氧化应激损伤的能力; 2.已存在有长期受活性氧刺激的不育患者,进入周期前,先行治疗或解除此刺激后有望改善临床结局; 3.以TUNEL细胞阳性率结合MDA含量可有效表达精子受损程度。
【学位授予单位】:郑州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R698.2

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