收藏本站
《郑州大学》 2011年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

雷公藤红素逆转K562/A02细胞多药耐药的实验研究

胡婕  
【摘要】:白血病是造血系统常见的恶性肿瘤,是一组异质性起源的恶性克隆性疾病,年发病率3-4/10万。目前治疗白血病的方法主要是化疗,随着化疗方案的改进和新化疗药的出现、支持治疗的加强及干细胞移植技术的应用,白血病的治疗效果有了明显的改善。然而,多药耐药的产生则成为目前部分白血病患者不能获得缓解,或缓解后复发的主要原因。因此,寻找新的抗肿瘤药物、探索新的治疗方案具有重要的意义。 近年来,中药及其有效的成分逆转白血病多药耐药引起了人们的注意。雷公藤泛指卫矛科雷公藤属植物,是我国传统的中药材。雷公藤红素是雷公藤单体之一,是一种三萜类天然化合物,又名南蛇藤素,分子式为C29H38O4。,分子量为450。文献报道雷公藤红素有免疫抑制、抑制血管内皮细胞体外增值、抑制HMC-1细胞的黏附及其黏附分子的表达;雷公藤红素还能体外诱导非小细胞肺癌细胞株H1299、人急性髓系白血病细胞株HL-60、恶性胶质细胞瘤株、视网膜母细胞瘤等肿瘤的凋亡。本研究以人慢性粒细胞白血病急变K562细胞株和耐阿霉素K562/A02细胞株为靶细胞,采用CCK-8方法和流式细胞术,探讨雷公藤红素对K562/A02细胞的逆转作用,并检测了雷公藤红素对K562/A02细胞内ADM浓度和P-gp的表达的影响。 方法: 1、K562和K562/A02细胞的培养 K562细胞培养于含10%新生牛血清、100U/ml青霉素和1000ug/ml链霉素的RPMI-1640培养基中,K562/A02细胞培养于含阿霉素(ADM 1μmol/L)的上述培养基中,将2种细胞置于37℃、5%CO2培养箱中常规培养,2-3天传代1次,其中K562/A02细胞在实验前两周改用无阿霉素的培养基培养。取对数生长期细胞用于实验。 2、CCK-8法检测ADM、雷公藤红素的细胞毒性及耐药细胞的耐药倍数 取对数生长期细胞,采用台盼兰染色活细胞计数方法。取30 u 1细胞悬液,用台盼兰染色后镜检100个细胞并计算活细胞百分率,其中拒染细胞为活细胞,染成蓝色的细胞为死细胞。取存活率大于95%的细胞为实验细胞。将K562和K562/A02细胞(2~3×109cells/孔)于96孔板中,由高到低浓度分别加入ADM(160、80、40、20、10、5、2.5、1.25μmol/L),雷公藤红素(320、160、80、40、20、10、5、2.5μmol/L),每孔设3个复孔,终体积150 u l。在37℃、5%CO2培养箱中培养72小时后,每孔加入CCK-8试剂10μ1,继续培养2小时,以空白孔调零,在全自动酶标仪450nm处测吸光度值,参比波长650nm。所测数据采用SPSS16.0统计软件计算生长抑制率在50%的药物浓度即半数抑制率(IC50)。抑制率(%)=(1-实验组0D值/对照组OD值)×100%;耐药倍数=(耐药细胞的IC50/敏感细胞的IC50)。实验重复3次,取平均值。 3、CCK-8法检测雷公藤红素耐药逆转性 取对数生长期、存活率大于95%的K562/A02细胞(2~3×104cells/孔)于96孔板中。实验分组:①K562/A02、②K562/A02+雷公藤红素、③K562/A02+VLP。所加ADM等药物浓度同上,每孔设3个平行孔,终体积150μl。并用维拉帕米(VLP)组5μg/L作为阳性对照。在37℃,5%CO2培养箱中孵育72小时后加入10μl CCK-8,继续培养2小时后,以空白孔调零,检测波长同上。计算半数抑制率(IC50)。实验重复3次。逆转倍数=(耐药细胞逆转前的IC50/耐药细胞逆转后的IC50)。 4、流式细胞术检测K562和K562/A02细胞内的ADM浓度 取对数生长期、存活率大于95%的细胞于24孔板中,实验分6组①K562/A02、②K562/A02+ADM、③K562/A02+ADM+雷公藤红素(IC50)、④K562/A02+ADM+雷公藤红素(IC50)、⑤K562、⑥K562+ADM。第③、④组分别先加入IC10和IC50的雷公藤红素,24h后在第②③④⑥组中再加入ADM10μg/ml,药物作用3小时,收集细胞1×106个细胞,冷PBS(4℃,0.01mol/L,Ph7.4)洗涤2次,再重悬于冷PBS液中,4℃保存至上样进行流式细胞仪检测(激发波长Ex=488nm,发射波长Em=575nm)。 5、流式细胞术检测P-gp表达 取对数生长期、存活率大于95%的细胞于24孔板中,实验分4组,分别为①K562/A02、②K562/A02+ADM(IC50)、③K562/A02+雷公藤红素(IC50)、④K562/A02+ADM(IC50)+雷公藤红素(IC50),置培养箱孵育48h后,收集细胞,约3×105个细胞,用冷的PBS液洗2遍,按操作说明加入P-gp抗体,室温下避光孵育30分钟后上流式细胞仪检测,并给出相应的P-gp表达率。 结果: 1、雷公藤红素对K562、K562/A02细胞的增值抑制作用结果 雷公藤红素对K562和K562/A02细胞的IC50分别为411.59±26.551μmol/L和295.58±23.288μmol/L,两者差异明显(P0.05)。ADM对K562、K562/A02的IC50分别为0.749±0.741μmol/L、59.755±6.883μmol/L,耐药倍数为79.78倍,说明K562/A02对ADM有明显的耐药性(P0.05)。细胞毒剂量的雷公藤红素可降低ADM对K562/A02细胞的IC50,提高对ADM的敏感性,应用雷公藤红素后,IC50为0.507±0.070μmol/L,较单用ADM明显减低(P0.05),耐药性逆转倍数(RF)为117.860倍;而加入5μg/L维拉帕米后的IC50为17.196±6.303μmol/L,也明显低于单用ADM组(P0.05),RF为3.745倍。 2、流式细胞仪检测细胞内阿霉素浓度和细胞膜P-gp的表达结果 经流式细胞仪检测发现加入雷公藤红素后,细胞内的ADM的浓度明显增加,加入IC,。浓度的雷公藤红素和IC50浓度的雷公藤红素后细胞内的阿霉素浓度分别为73.727±8.626、102.86±4.518;增加倍数分别为1.102和1.537倍。且两组细胞内的阿霉素浓度有明显差异(P0.05)。单用阿霉素时,K562/A02细胞的P-gp的表达波峰无明显影响;单用雷公藤红素后,K652/A02细胞的P-gp的表达波峰明显降低;当雷公藤红素和阿霉素合用后,K562/A02细胞的P-gp的表达也比单用阿霉素有明显的降低。 结论: 1、阿霉素和雷公藤红素对K562/A02、K562的半数抑制率浓度(IC50)均有显著差异。K562/A02细胞对ADM的耐药性是K562细胞的79.78倍。 2、细胞毒剂量的雷公藤红素作用后,ADM对K562/A02细胞的IC50显著下降。 3、细胞毒剂量和非细胞毒剂量的雷公藤红素处理后的K562/A02细胞和K562细胞内的ADM浓度显著增加。 4、雷公藤红素能明显下调K562/A02细胞的P-gp表达。
【学位授予单位】:郑州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R285.5

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 蔡讯,陈芳源,韩洁英,顾春红,钟华,欧阳仁荣;槲皮素恢复柔红霉素在白血病耐药细胞K562/ADM和HL-60/ADM中的分布[J];癌症;2004年12期
2 贾莉,孔力,苗小艳,袁宏;蝎毒逆转K562/ADM细胞多药耐药性的初步研究[J];白血病.淋巴瘤;2002年02期
3 鲍一笑,张璐定,李莉,韩连书,孔宪涛;雷公藤红素对HMC-1细胞凋亡相关基因表达的影响[J];第二军医大学学报;2001年09期
4 鲍一笑,叶挺军,韩连书,廖建春,孔宪涛;雷公藤红素诱导人鼻息肉肥大细胞凋亡及机制[J];第二军医大学学报;2000年02期
5 何崇生,黄剑飞,朱惠君;膀胱癌中多药耐药相关因子的表达及其临床研究[J];南通医学院学报;2004年01期
6 高晓东,陈烨;雄黄对HL-60/ADR作用的初步研究[J];南通医学院学报;2001年04期
7 许晨,吴兆龙;雷公藤红素防治狼疮性肾炎肾小球硬化的研究[J];中国中西医结合肾病杂志;2002年03期
8 潘启超,田晖;多种中药单体逆转肿瘤多药耐药性[J];科学通报;1995年20期
9 周幽心,孙成法,许期年,沈海林,黄煜伦;雷公藤红素抑制血管内皮细胞株增殖的体外研究[J];实用癌症杂志;2004年06期
10 鲍一笑,张登海,张玲珍,孔宪涛;雷公藤红素诱导CEM-6T细胞凋亡的机制研究[J];上海免疫学杂志;2003年03期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 李燕;姜黄素体外逆转人胃癌细胞SGC7901/VCR多药耐药性[D];第四军医大学;2006年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 邢益阳;;中药逆转肿瘤多药耐药的研究进展[J];中医药临床杂志;2007年01期
2 梁晶;;鸦胆子油乳致肝损害9例临床分析[J];安徽医药;2007年01期
3 林明雄,王发渭,窦永起;中药拮抗肿瘤多药耐药机制研究近况[J];安徽中医学院学报;2002年04期
4 刘晓辉,韩明向,刘健;雷公藤及其制剂治疗类风湿性关节炎的研究进展[J];安徽中医学院学报;2003年05期
5 曹美云,陈斌,曹明成;灯盏花素滴丸质量标准研究[J];安徽中医学院学报;2004年05期
6 李俊丽,严瑞琪,王辉云,黄玫玲,黄小延;甘草甜素等对黄曲霉毒素B_1致大鼠肝癌作用的影响[J];癌症;1993年02期
7 丁怡,张杰,赵庆亮,侯立军,王秋林,王树人;雷公藤甲素对血管内皮细胞尿激酶型纤溶酶原激活物表达的影响[J];癌症;2005年07期
8 常徽;糜漫天;顾艳艳;袁家林;凌文华;林辉;;植物黄酮抗人白血病HL-60细胞增殖的结构-效应关系[J];癌症;2007年12期
9 张世卿,张水成;芝麻素研究进展[J];氨基酸和生物资源;2005年03期
10 郁仁存,王笑民,唐武军,徐咏梅;中西医结合防治肿瘤研究进展[J];癌症进展;2003年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 胡浩斌;郑尚珍;郑旭东;;东紫苏挥发油化学成分的研究[A];西北地区第三届色谱学术报告会暨甘肃省第八届色谱年会论文集[C];2004年
2 王瑞平;薛维伟;;中药抗肿瘤血管生成研究近况[A];肿瘤药物及肿瘤传统医学治疗研究[C];2005年
3 班立丽;黄健;张慧;罗敏;杨兵兵;韩宏升;李玛琳;;毛萼乙素抑制人正常及肝癌血管生成作用的实验研究[A];2006第六届中国药学会学术年会论文集[C];2006年
4 李明;;木棉叶化学成分研究[A];2006第六届中国药学会学术年会论文集[C];2006年
5 徐青;王荣;陆秋艳;叶文博;曹晓卫;吴霞琴;章宗穰;;氨基乙硫醇修饰企电极直接测定芦丁含量的研究[A];第十三次全国电化学会议论文摘要集(下集)[C];2005年
6 李杰;郭伟剑;;乳腺癌多药耐药性及其逆转的基础与临床研究[A];中国临床肿瘤学教育专辑(2002)——中国抗癌协会第六届临床肿瘤协作中心(CSCO)学术年会论文集[C];2002年
7 王振斌;马海乐;马晓珂;;无花果残渣中抗肿瘤成分提取技术[A];2006年中国机械工程学会年会暨中国工程院机械与运载工程学部首届年会论文集[C];2006年
8 项柏康;;胃癌多药耐药基因研究的进展[A];第九届全国中西医结合普通外科学术交流大会暨胆道胰腺疾病新进展学习班论文汇编[C];2005年
9 钟明;曾建国;陈应庄;谈满良;罗炼辉;;博落回中微量生物碱的研究进展[A];2007年中华中医药学会第八届中药鉴定学术研讨会、2007年中国中西医结合学会中药专业委员会全国中药学术研讨会论文集[C];2007年
10 李学庆;王承;索丽霞;;中西药物治疗肿瘤的研究进展[A];全国中医药科研与教学改革研讨会论文集[C];2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王延年;沙漠嘎种子化学成分及质量研究[D];北京中医药大学;2004年
2 关宏伟;人胃癌细胞SGC7901/ADR耐药相关蛋白质分子的差异比较研究[D];大连医科大学;2006年
3 王天晓;逆转肿瘤MDR的新药开发研究[D];吉林大学;2005年
4 肖诚;雷公藤对CIA模型肠道黏膜免疫的影响[D];中国中医研究院;2005年
5 张毅敏;穴位敷贴抗哮喘豚鼠气道炎症及其机制研究[D];广州中医药大学;2005年
6 陈刚;川芎嗪对大鼠胶原性关节炎血管生成与巨噬细胞分泌VEGF的影响[D];重庆医科大学;2005年
7 张金廷;凋亡抑制在口腔表皮样癌耐药细胞株KBv200耐药机制中的作用及其逆转[D];河北医科大学;2004年
8 崔刘福;肝癥口服液治疗肝癌的免疫机制研究[D];河北医科大学;2004年
9 刘雪强;乌头碱逆转耐药性人口腔上皮鳞状癌细胞分子机制研究[D];北京中医药大学;2005年
10 宋宇;吴茱萸碱抗肿瘤作用及其作用机制的研究[D];北京中医药大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 游方;羟基喜树碱、雷公藤甲素、阿克拉霉素影响兔血管平滑肌细胞周期进程的研究[D];福建医科大学;2004年
2 王利;人参皂甙逆转K562/A02细胞耐药性的实验研究[D];重庆医科大学;2001年
3 李瑞峰;前列宁Ⅰ号治疗慢性非细菌性前列腺炎的实验研究[D];河北医科大学;2004年
4 刘远环;天然药物的毛细管电泳研究与应用[D];福州大学;2004年
5 赵永辰;川芎嗪干预急性白血病多药耐药相关蛋白基因表达研究[D];北京中医药大学;2002年
6 吴建元;雷公藤甲素药代动力学及其对卵巢癌细胞活性影响的研究[D];武汉大学;2005年
7 张蕾;NF-κB的活化与视网膜细胞损伤的关系[D];青岛大学;2006年
8 李炜;六神丸抗血管生成的实验研究[D];山东中医药大学;2005年
9 齐晓娟;雷公藤及鸦胆子提取液瘤体内注射对荷瘤小鼠抑瘤作用的研究[D];黑龙江中医药大学;2005年
10 蒋毅;雷公藤防治哮喘气道重塑作用的分子机制研究[D];山西医科大学;2005年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 郭娟娟,潘祥林,冯长伟,邹俊晖;冬凌草甲素诱导多药耐药细胞系K562/A02凋亡、逆转耐药性的研究[J];安徽中医学院学报;2000年03期
2 杨岚,杨平地,梁蓉,袁跃传,田琼!防原教研室,陕西西安710032;川芎嗪联合环胞霉素A逆转白血病多药耐药的研究[J];癌症;2000年04期
3 杨俊霞,汤为学;人肝癌顺铂耐药细胞系的建立及其生物学特征[J];癌症;2002年08期
4 杨季云,曾祥元,马布仁;NF-κB信号传导途径对TNF-α诱导的SMMC-7721细胞凋亡的影响[J];癌症;2002年09期
5 赵晓东;张毅;;常规化疗药物疗效预测分子与化疗选药[J];癌症;2006年12期
6 朱爱芝,王祥云,金山,郭振泉;茶多酚对肿瘤细胞多药耐药性逆转作用的研究[J];北京大学学报(自然科学版);2001年04期
7 罗文纪,虞荣喜,朱宁希;苦参碱诱导白血病细胞株HL-60分化的实验研究[J];中国医药学报;2001年05期
8 鲍一笑,叶挺军,韩连书,廖建春,孔宪涛;雷公藤红素诱导人鼻息肉肥大细胞凋亡及机制[J];第二军医大学学报;2000年02期
9 鲍一笑,张璐定,李莉,韩连书,孔宪涛;雷公藤红素对HMC-1细胞凋亡相关基因表达的影响[J];第二军医大学学报;2001年09期
10 司维柯,陈安,李鹏,刘斌,高利宏,姚婕;苦参碱诱导人肝癌细胞系HepG_2凋亡的研究[J];第三军医大学学报;2001年07期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 宛蕾,杨四旬,汪家芳,朱梅英,葛家壁,李晓玉;雷公藤红素对免疫反应的抑制作用[J];中药药理与临床;1991年06期
2 许晨,吴兆龙;雷公藤红素对狼疮鼠肾小球硬化的防治作用[J];中华内科杂志;2002年05期
3 刘瑞麟,刘忠令,李强,邱忠民,吕寒静,杨忠民,洪光朝;雷公藤红素抑制支气管哮喘小鼠气道炎症的实验研究[J];中华结核和呼吸杂志;2004年03期
4 闵红波,黄勤,郭志勇,王建文,步世忠;雷公藤红素诱导视网膜母细胞瘤Y79细胞凋亡及对凋亡核因子-κB的影响[J];中国中医眼科杂志;2004年03期
5 刘飞;黄树模;;雷公藤红素—一种钙调素拮抗剂[J];中国现代应用药学;1990年02期
6 许迅辉,许晨,任豫申,吴兆龙;雷公藤红素对小鼠狼疮性肾炎模型蛋白尿的疗效观察[J];实用中医药杂志;2002年02期
7 宛蕾,杨四旬,汪家芳,李晓玉;雷公藤红素对IL-1和IL-2产生的影响[J];中药药理与临床;1991年05期
8 鲍一笑,叶挺军,韩连书,廖建春,孔宪涛;雷公藤红素诱导人鼻息肉肥大细胞凋亡及机制[J];第二军医大学学报;2000年02期
9 许晨,吴兆龙,张志刚,郭慕依;雷公藤红素对狼疮鼠肾小球Ⅰ和Ⅳ型胶原的影响[J];中华风湿病学杂志;2002年04期
10 严云屏,施守义,施宜平,张照寰,潘德济;雷公藤红素外用治疗类风湿性关节炎局部肿痛[J];中国新药与临床杂志;1989年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 李瑞林;;雷公藤临床安全合理应用与研究进展[A];全国有毒中药在风湿病治疗中的应用与研究进展学习班讲义[C];2010年
2 贝新法;江凤呜;;雷公藤的特征及其鉴别要点[A];全国有毒中药在风湿病治疗中的应用与研究进展学习班讲义[C];2010年
3 李瑞林;;雷公藤研究新进展[A];全国第八届中西医结合风湿病学术会议论文汇编[C];2010年
4 秦万章;;雷公藤研究现状和思考[A];2011全国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2011年
5 贝新法;贝芹;江凤鸣;贝余仙;;雷公藤的特征及其鉴别要点[A];第三届江浙沪中西医结合高峰论坛论文汇编[C];2011年
6 薛云云;王彦;刘颖;阎超;;高效液相色谱法测定雷公藤红素在大鼠血浆中的含量[A];全国生物医药色谱学术交流会(2010景德镇)论文集[C];2010年
7 刘永平;陈懿;曾辉;曾治平;管茶香;;雷公藤红素干预对博莱霉素致小鼠肺纤维化的初步研究[A];传承与发展,创湖南省生理科学事业的新高——湖南省生理科学会2011年度学术年会论文摘要汇编[C];2011年
8 余润泉;鲍一笑;;雷公藤红素对人急性T淋巴细胞白血病株CEH-6T及MOLT-3细胞作用的研究[A];中华医学会第八次全国血液学学术会议论文汇编[C];2004年
9 韩晓曦;赵名;于晓妉;;雷公藤红素上调HIF-1α表达及其调控机制研究[A];第九届全国肿瘤转移学术大会暨2011年黑龙江省医学会肿瘤学年会摘要集[C];2011年
10 李惠民;鄢艳红;李晓进;;白血病K562、K562/A02细胞株中侧群细胞与多药耐药性关系的初步研究[A];2010’全国肿瘤分子标志及应用学术研讨会暨第五届中国中青年肿瘤专家论坛论文汇编[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前2条
1 本报记者;三明今年申报院士专家对接项目做到“三突出”[N];福建科技报;2009年
2 杨连禄 姚乐松;市科协围绕院士项目攀“高亲”[N];三明日报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 徐曾涛;雷公藤红素诱导人类风湿关节炎纤维样滑膜细胞凋亡、周期阻滞和DNA损伤作用机制的研究[D];福建中医药大学;2013年
2 王冀;雷公藤红素对人胆管癌TFK-1细胞株抑制作用的实验研究[D];华中科技大学;2012年
3 力弘;小鼠狼疮样综合征模型的建立以及雷公藤红素抗炎免疫抑制作用的研究[D];复旦大学;2006年
4 郑岚;雷公藤红素诱导人肺腺癌A549细胞凋亡机制及与PI3K/Akt通路关系的研究[D];湖北中医药大学;2011年
5 林源吉;K562及其耐药株K562/A02细胞膜蛋白与耐药机理的研究[D];浙江大学;2010年
6 杨军;雷公藤单体T4抗大鼠心脏移植免疫抑制机理的实验研究[D];中国协和医科大学;1993年
7 顾玲;RNA干扰逆转白血病细胞耐药性的研究[D];四川大学;2005年
8 冯璞;雷公藤多甙与TGP的协同免疫抑制作用及其对实验性变态反应性脑脊髓炎的防治作用研究[D];中国协和医科大学;1998年
9 陈宏;人核糖体蛋白L6基因对白血病细胞耐药性的影响和作用机制的研究[D];中南大学;2006年
10 李红茹;超临界流体在中药雷公藤制剂中的应用及其溶解度的理论研究[D];天津大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 胡婕;雷公藤红素逆转K562/A02细胞多药耐药的实验研究[D];郑州大学;2011年
2 孙红莉;雷公藤红素衍生物的化学合成及其活性研究[D];暨南大学;2010年
3 陈兰;雷公藤红素提取、纯化和测定研究[D];中南大学;2010年
4 李艳华;雷公藤红素对实验性脑缺血大鼠神经保护作用及其机制的研究[D];河北医科大学;2012年
5 王进;雷公藤红素自微乳注射液的研究[D];湖北工业大学;2013年
6 薛璟;雷公藤主成分肠吸收动力学研究[D];南京中医药大学;2010年
7 孙成法;雷公藤红素抑制血管内皮细胞体外增殖与血管生成机理的实验研究[D];苏州大学;2003年
8 范正超;雷公藤红素增强TNF-α杀伤前列腺癌细胞及其机制探讨[D];中国人民解放军军医进修学院;2012年
9 鄢艳红;白血病K562、K562/A02细胞株中侧群细胞与多药耐药性的关系及相关基因的初步研究[D];昆明医学院;2010年
10 杨溦;ABT-737与雷公藤红素联合抗肿瘤活性的机制研究[D];浙江大学;2012年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026