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《郑州大学》 2018年
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Cav-1基因敲除小鼠下颌第一磨牙牙胚Shh信号通路的时空表达模式研究

白书锋  
【摘要】:胞膜窖(Caveolae)是细胞质膜表面特异性内陷微区,主要由脂类和蛋白质组成。窖蛋白(Caveolins)是Caveolae的表面标记蛋白,是构成Caveolae的完整膜蛋白。窖蛋白至少有3种亚型,其中Caveolin-1(Cav-1)是Caveolae最重要的表面功能蛋白。胞膜窖和窖蛋白在多种细胞生物学功能中起关键作用。已有的研究表明Cav-1参与牙胚发育过程。Shh是高度保守的信号通路,参与多个器官的发育过程。在牙胚发育中Shh信号持续存在,调控牙源性上皮区域的确定,牙尖的发育和牙根的形成,并在确定牙齿数目中有重要作用。研究表明Cav-1可协助Shh从胞内运输至细胞表面。虽然Cav-1和Shh都参与牙胚发育,两者又有功能上的联系,但牙胚发育过程中Cav-1与Shh信号通路间是否存在调控关系尚不明确。目的通过对比观察Cav-1基因敲除小鼠与野生型小鼠下颌第一磨牙牙胚早期发育过程中Shh信号通路的表达,探讨Cav-1与Shh信号通路时空表达模式的关系,为深入研究Cav-1在牙齿发育中的作用提供参考。方法收集胚胎发育13.5,14.5,15.5,16.5,17.5及18.5天的Cav-1基因敲除小鼠(KO)和同源野生型小鼠(WT)的下颌第一磨牙牙胚,经聚合酶链式反应(PCR)及免疫组织化学技术鉴定基因型。免疫组织化学技术检测Shh、Ptc-1、Ptc-2、Gli-1、Gli-2在不同发育时期牙胚组织中的表达,并行统计学分析。结果Shh、Ptc-1、Ptc-2、Gli-1、Gli-2在E13.5-E18.5,WT和KO胎鼠的下颌第一磨牙牙胚中均有表达,并呈现出不同的表达模式。Shh蛋白在上皮芽的顶端可见阳性表达,帽状期特异性地表达于釉结部位,钟状期表达于成釉细胞层。Ptc-1在E13.5表达于上皮芽及周围间充质中,E14.5-E17.5天表达于外釉上皮、内釉上皮、星网状层、中间层及邻近内釉上皮的牙乳头细胞中,E18.5天,外釉上皮、成釉细胞、中间层仍可见Ptc-1表达,但牙乳头中未检测到Ptc-1表达。Ptc-2在成釉器中的表达模式类似于Ptc-1,但在牙乳头中未能检测到Ptc-2的表达。Gli-1,Gli-2表达模式相似,E13.5表达于上皮芽及周围间充质中,E14.5-E18.5天,表达于成釉器的各层细胞和牙乳头细胞。而同时期的WT和KO两者之间Shh信号通路的蛋白表达水平无显著性差异。结论Cav-1基因敲除对小鼠下颌第一磨牙牙胚早期发育中Shh信号通路的时空表达模式无显著性影响。
【学位授予单位】:郑州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:R781

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