收藏本站
《郑州大学》 2002年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

p16基因上游序列与胃癌细胞核基质的相关性

李卓  
【摘要】: 近年来研究表明,肿瘤的发生与G1/S、G2/M检查点(checkpoint)失控,使原来有遗传缺陷的细胞选择性无限制性增殖有关。G1/S检查点与p16基因有密切关系,P16蛋白是CDK4/6的抑制剂,同CyclinD1竞争与CDK4/6结合,发挥负性调节作用,共同完成对细胞增殖周期的调控。真核基因转录需要基因上游序列的顺式调控元件识别、结合转录因子,发挥调节作用,基质相关区域(matrix attached regions MARs)作为一种新型的顺式调控元件,日益受到人们的重视。MAR是核基质蛋白的作用位点,它结合在核基质上,限制DNA环。核基质是细胞核内的精细网架体系,参与DNA复制、RNA转录与加 郑州人学2002 M研究主毕业论义pl6基因上游序列与胃癌细胞核基质的相关性 工,并与肿瘤发生密切相关。核基质蛋白与肿瘤相关基因转录 表达的相关性分析是目前肿瘤研究的新领域。 以往对… 基因的研究多集中在结构基因的改变和表达异 常方面,核基质的异常与P16基因,尤其是与… 基因上游序 列调控作用的相关性分析目前尚报道甚少。本研究采用十二烷 基磺酸钠-聚丙烯酚胺凝胶电泳uDS干AGE)探讨核基质蛋白 在胃癌中的改变;采用 Southwestern blot技术探讨…6基因 上游序列-869hP中是否含有基质相关区域(。atrix attached regions,MARs人 以及n16基因上游序列与胃癌细胞核基质的 才关性。 万法:p16 promoter-luc-pGLZ-Basic主告基因表达质粒 上用 EcoR和 Hindlll双酶切,提取 890hp 片段(包含 p16基 因外显于 la上游E 片段人 采用地高辛随机引物法标记 探针,应用DNA斑点杂交法检测探针的灵敏度。22例新鲜胃癌 手术标本,含相应的癌组织、癌旁组织及正常组织。其中高中 分化1*但,* 分化1*仔:卜11期9例门1且W期1*仔。经蔗 糖梯度离心得到细胞核后,低盐、高盐缓冲液提取得到核基质, 并收集提取过程中溶解的可溶性蛋白质。核基质分成2份,1 份经SDS-PAGE分析胃癌细胞核基质,另1份经SDS-PAGE后, 2 郑州人学2002 M研究生毕业论文 一6刹圳:游序列勺胃癌细胞核基质的相关件 电转移至硝酸纤维素膜上,标记探针与核基质进行DNA-蛋白质 结合检狈(Southwestern blot)。提取过程中低 盐、高盐缓 冲液溶解的可溶性蛋白质经SDS干AGE后,与核基质蛋自进行 比较。蛋自质电泳条带和杂交条带采用Genetoo*软件进行 分析,结果采用秩和检验进行统计分析。 一 结果显示: 1.地高辛随机引物法标记的探针灵敏度达 lgg/ul,特异 性高,符合实验要求。 2.经蔗糖梯度离心后得到的细胞核无胞浆污染。 3.SDS干AGE结果:细胞核经低盐、高盐缓冲液提取过程中 溶解的可溶性蛋白质多集中在 43KDa以下,尤其在 15亿0KDa 范围内。核基质蛋白电泳发现细胞核基质蛋白成分复杂,电泳 条带较多。应用秩和检验分别发现胃癌组织30、28KD条带变 浅,且与正常组织相比差异皆有统计学意义计州.05X 高中 一 分化与低分化胃癌组织中,此二条带差异无统计学意义 D (*0.05):工11期和111-W期相 b 差异无统计学意义 (P>0.05)。 4·Southwestern blot结果显示正常组织主带位于 28、 30、40、43、50KD,癌组织主带位于 40、66KD处,40KD在癌 3 郑州人学2002 f研穴生毕业论义pl6基冈上游序列与胃癌绷胞核乐质的扣关性 和正常组织区别不大,其它条带明显减弱。应用秩和检验发现 癌组织66KD 明显,与正常组织相比差异有统计学意义 u州.05人 高中分化与低分化癌组织相比差异无统计学意义 (P>0.05八 I-11期与*-IV期相比差异无统计学意义 (P>0.05)。 . 结论: 1.胃癌细胞核基质30、28KD蛋白表达量减少,与正常组 织相比差异有统计学意义,高中分化和低分化胃癌差异无统计 学意义,I刁期和11卜IV期肿瘤差异无统计学意义,提示胃癌 核基质的改变可能在肿瘤的早期己经发生,是胃癌的早期分于 事件。 2.P16基因外显子 IQ 上游-869hP片段上存在MAR序歹, 提示此段 DNA对 pl6基因表达调控具有重要意义。 3.P16基因外显于IQ上游十 片段与正常组织中核基 质蛋白结合主带位于 28。30、40、43、50KD处,癌组织中主
【学位授予单位】:郑州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:R735.2

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 劳萍,徐炎,章静波,陈延文,刘世广,孙英丽;大鼠精子发生中核基质-核纤层-中间丝体系的研究[J];解剖学报;1999年04期
2 王刚,王世阆;人类肿瘤p16~(INK4a)/CDKN2A基因失活机制及应用[J];浙江肿瘤;2000年04期
3 施文钧,刘乐和;EBV转化淋巴细胞与EBV相关细胞核基质蛋白分析[J];浙江肿瘤;1999年02期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王继英,杜立新;转基因动物制作及提高外源基因表达的策略[J];中国畜牧兽医;2002年02期
2 韦珂,黄艳,何勇强;植物转基因沉默及控制[J];广西植物;2003年01期
3 张钦宪,丁一,苏永,乐晓萍,邢文英,朱晓燕,张娓;胃癌组织核基质与p16基因上游序列的相关性研究[J];河南医学研究;2004年02期
4 郭旺珍,张天真,朱协飞,袁小玲;染色体重排引起转基因双价抗虫棉变异[J];科学通报;2000年19期
5 吕怀盛,段秀方,秦景,张建中;Rb蛋白在胃癌及癌旁组织中表达的意义[J];宁夏医学杂志;2002年11期
6 王健美,张可伟,叶文静,郑成超;MAR序列研究进展[J];山东农业大学学报(自然科学版);2002年02期
7 陈火英;庄天明;张晓宁;刘杨;张英;夏聪美;;HVA1基因转化番茄及转基因番茄耐盐性的初步鉴定[J];上海交通大学学报(农业科学版);2006年01期
8 王爱英,祝建波,崔百明;棉花转基因植株的试管内筛选[J];石河子大学学报(自然科学版);2000年02期
9 金万枚,巩振辉,李桂荣,张桂华;植物遗传转化方法和转基因植株的鉴定[J];陕西农业科学;2000年01期
10 孙丽翠;MAR的结构、功能及其应用研究现状[J];生物技术;2004年01期
中国重要会议论文全文数据库 前2条
1 徐惠君;庞俊兰;杜丽璞;叶兴国;李连城;辛志勇;程顺和;吴宏亚;;基因枪转化小麦黄花叶病毒抗性基因创造小麦新种质[A];农业科技创新与生产现代化学术研讨会论文集[C];2001年
2 徐惠君;杜丽璞;张新梅;庞俊兰;马有志;叶兴国;程顺和;吴宏亚;陈炯;陈剑平;;小麦黄花叶病转基因研究[A];全国作物细胞工程与分子技术育种学术研讨会论文集[C];2003年
中国博士学位论文全文数据库 前8条
1 张应华;核基质结合区(MAR)调控的胰岛素样生长因子-1表达载体构建与转化甘蓝的研究[D];西南农业大学;2004年
2 周思军;大豆抗虫基因转移及其转化系统优化研究[D];东北农业大学;2000年
3 杜海莲;禽流感病毒(H5N1)基因(h5n1a)在马铃薯中的转化与表达研究——附:乙肝表面抗原(HBsAg)基因转化的对比研究[D];福建农林大学;2000年
4 汪琳;外源基因在家蚕中靶向整合及线粒体载体研究[D];西南农业大学;2002年
5 奚亚军;叶片衰老抑制基因P_(SAG12)-ITP转化小麦的研究[D];西北农林科技大学;2002年
6 张景昱;利用转基因植物生产生物可降解塑料(PHB)的研究[D];中国科学院研究生院(植物研究所);2002年
7 郑月茂;转基因山羊乳腺上皮细胞系建立与转基因克隆胚发育[D];西北农林科技大学;2005年
8 赵春红;核基质蛋白在人成骨肉瘤MG-63细胞诱导分化中的变化研究[D];厦门大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 黄慧珍;烟草和杨树核基质附着区(MARs)的分离及其功能分析[D];西北农林科技大学;2005年
2 崔岩;大豆利用花粉管通道技术导入抗病虫目的基因的研究[D];东北农业大学;2000年
3 侯爱菊;黄瓜抗真菌基因遗传转化体系的研究[D];东北农业大学;2001年
4 魏振林;HVA1基因转化平邑甜茶的研究[D];安徽农业大学;2001年
5 高俊山;农杆菌介导小麦遗传转化相关因素及转基因植株获得的研究[D];安徽农业大学;2001年
6 金万梅;芥菜(Brassica juncea Coss)植株原位真空渗入遗传转化体系的研究[D];西北农林科技大学;2001年
7 庞俊兰;基因枪转化小麦土传病毒抗性基因创造小麦新种质[D];中国农业科学院;2001年
8 赵英会;人促红细胞生成素鸡输卵管特异表达载体的构建及其转基因鸡的制备[D];山东农业大学;2002年
9 李磊;VEGF,MMP-2在胃癌中的表达及其与浸润和转移的关系[D];郑州大学;2002年
10 张莹;分化剂诱导Eca-109细胞p16基因启动子DNA结合蛋白的研究[D];郑州大学;2003年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前8条
1 汪国顺,罗文捷,潘惟钧,丁明孝,翟中和;HeLa细胞端粒DNA与核骨架的特异性结合[J];中国科学B辑;1993年07期
2 章小维,张琼,郭燕燕;卵巢恶性上皮性肿瘤组织中p16基因缺失的分析[J];中华妇产科杂志;1997年08期
3 王敏,江森,孔北华,孙树三,张淑兰,陆景明;逆转录病毒介导的p16基因对人卵巢癌细胞系生长抑制作用的研究[J];中华妇产科杂志;1999年05期
4 罗京伟!100021北京,梁克!100021北京,徐国镇!100021北京,赵清正!100021北京,殷蔚伯!100021北京,高黎!100021北京;p16基因转染对CNE-2细胞放射敏感性的研究[J];中华放射肿瘤学杂志;1999年04期
5 陈柏华,王秀琴,林晨,吴簇;中国人食管癌 p16 基因突变分析[J];中华医学遗传学杂志;1997年03期
6 杨红,郑维国,辛晓燕,陈必良;P16抑癌基因在卵巢肿瘤中的表达[J];肿瘤防治研究;1998年01期
7 付晓颖,曹世龙,冉瑞琼,邵东敏,张颂文,申宗候,顾建新;p16基因重组质粒的构建及其对人肺癌细胞的抑制作用[J];中国肿瘤生物治疗杂志;1998年01期
8 朱如玮,刘振延;新型抑癌基因 p16[J];肿瘤;1997年03期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈海滨,邱殷庆,张锦堃,陈玲,任显辉,杨蕾;人食管癌细胞核基质的研究[J];解剖学报;2000年01期
2 温博贵,裘峻;人肝癌细胞与人胚肝细胞核基质的免疫相关性[J];癌症;1994年02期
3 李启明,刘勇,熊华淇,吴绮明,邹桂华;人食管癌核基质抗体的免疫组化研究[J];实用肿瘤学杂志;1997年02期
4 李娟;白血病细胞核基质蛋白的研究[J];中国科学基金;1999年05期
5 王天云,柴玉荣,侯卫红,谢华,赵青赞,王宁,薛乐勋;杜氏盐藻核基质的制备[J];郑州大学学报(医学版);2004年01期
6 陈祥生;在体内具有斑点型抗核抗体染色的患者中抗核基质抗体的意义[J];国外医学.皮肤性病学分册;1997年03期
7 陈玮莹,吴健谊,陈爱云,杨棉华;抗食管癌核基质单克隆抗体免疫特异性的检测[J];汕头大学医学院学报;1998年01期
8 钟叔平,温博贵;食管癌细胞核基质蛋白电泳行为的分析[J];汕头大学医学院学报;1994年01期
9 李冠武,温博贵;核基质与基因表达调控研究进展[J];生理科学进展;1998年03期
10 李娟,罗绍凯,彭爱华;体内干扰素作用下慢性粒细胞白血病核基质的变化及其意义[J];实用肿瘤学杂志;1999年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 施产甫;肖祥华;;核基质制备过程中DNA长度变化的分析[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
2 陈秋实;高崇明;李荫蓁;;草履虫的类核纤层结构与核基质纤维[A];中国原生动物学学会第十一次学术讨论会论文摘要汇编[C];2001年
3 陈彦;倪菊华;周爱儒;贾弘褆;;hhLIM基因5′上游序列转录激活功能初步分析[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
4 高书颖;于洁;;鼻咽癌细胞ezrin基因启动子上游序列转录调控特性的研究[A];中国的遗传学研究——遗传学进步推动中国西部经济与社会发展——2011年中国遗传学会大会论文摘要汇编[C];2011年
5 卢汉平;龙浩;何军芳;张旭;廖建英;高锦辉;;Tamoxifen作用后人乳腺癌核基质雌激素受体的变化特性[A];首届全国肿瘤核医学新技术研讨会论文集[C];2007年
6 王小忠;丁明孝;;Sindbis病毒的非结构蛋白nsP2与宿主细胞核基质相结合[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
7 于文斗;丁明孝;翟中和;;痘苗病毒的DNA复制中间纤维的关系[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
8 王慧珍;崔京涛;王晓虹;王永潮;;中国红斑狼疮患其血清中抗Lamin抗体的研究[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
9 杨佑明;Yingru Wu;Danny J Llewellyn;李召虎;徐楚年;Elizabeth S Dennis;;棉花ChMyb25启动子的克隆和功能的初步分析[A];中国棉花学会2006年年会暨第七次代表大会论文汇编[C];2006年
10 张小伟;颜晓菁;陈赛娟;陈竺;;砷剂靶向结合RBCC结构域调节PML-RARα和PML蛋白—砷剂治疗APL的药物分子靶点研究[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张应华;核基质结合区(MAR)调控的胰岛素样生长因子-1表达载体构建与转化甘蓝的研究[D];西南农业大学;2004年
2 马炳田;基因工程改良杂交籼稻的抗虫性[D];四川农业大学;2002年
3 迟胜起;核基质结合区对马铃薯Y病毒非翻译CP基因及反向重复片段介导抗病性的影响[D];山东农业大学;2004年
4 陈超;肿瘤热物理治疗损伤区域精确控制的理论研究[D];上海交通大学;2011年
5 沈传陆;在肿瘤坏死因子α作用下血管内皮细胞PDGF-B链基因转录调控的研究[D];中国协和医科大学;1998年
6 陈玮莹;五味子对CCl_4中毒大鼠肝细胞修复作用分子机理的研究[D];汕头大学;2003年
7 洪焰;大鼠肝氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ基因5'端上游DNA特异结合蛋白的研究[D];中国协和医科大学;1989年
8 王丽;SATB1介导的MAR元件相互作用参与人β-globin基因簇活性染色质结构的建立[D];中国协和医科大学;2007年
9 卢永忠;钝顶节旋藻cpcB基因上游序列结构功能的研究[D];中国海洋大学;2005年
10 于春雷;自身免疫调节因子蛋白的分子动态学及与1型糖尿病的相关性分析[D];吉林大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李卓;p16基因上游序列与胃癌细胞核基质的相关性[D];郑州大学;2002年
2 张可伟;植物MAR序列的分离鉴定与高效表达载体的构建[D];山东农业大学;2003年
3 熊术道;膀胱癌相关NMPs分析及其与EGFR基因相互关系的研究[D];汕头大学;2001年
4 张萌萌;烟草核基质结合(MAR)序列的机理研究和应用[D];山东农业大学;2005年
5 张莹;分化剂诱导Eca-109细胞p16基因启动子DNA结合蛋白的研究[D];郑州大学;2003年
6 宋智;分子克隆和分析一种丝状真菌米曲霉(Aspergillus oryzae)的六个基因5’端上游区域[D];广西大学;2003年
7 马鸿雁;p16基因上游序列与急性白血病细胞核基质蛋白结合的实验研究[D];郑州大学;2005年
8 张宏;食管癌核基质与p16基因上游序列的相关性研究[D];郑州大学;2007年
9 庄宗兰;粉棒束孢蛋白酶的克隆、表达及两种蛋白酶的诱导转录的研究[D];安徽农业大学;2011年
10 秦红;核基质MINT N端片段(365-1084 aa)相互作用蛋白的筛选及鉴定[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026