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结核分枝杆菌体内诱导抗原初步研究

高志勇  
【摘要】: 全世界已有近20亿人感染过结核分枝杆菌,每年有新发病例1000多万,300万人死亡,世界卫生组织在1993年和1997年两度发出警告。我国是世界上22个结核病高负担国家之一,结核病患者数量居世界第二位,据2000年全国结核病流行病学调查,我国现有结核杆菌感染者4亿人,结核病患者500万人,其中传染性肺结核病患者200万人,每年因患结核病死亡的人数达13万人,严重危害人民群众的生命健康。 病原体在宿主体内诱导表达的基因在其致病过程中起关键性作用,这些功能基因被称为体内诱导基因(in vivo induced gene,ivi gene)。体内诱导基因及其产物的研究很有可能为新的疫苗、诊断试剂和抗菌药物的开发提供新的目标。体内诱导抗原技术(in vivo-induced antigen technology,IVIAT)是一个近两年刚出现的一个研究体内诱导基因的方法,它不使用动物模型,直接利用患者血清来探查病原体在患者体内特异表达的抗原基因,与以往研究病原体体内诱导基因的方法相比更加简便、准确。 结核分枝杆菌的体内诱导基因的研究很少,国内外尚无相关文献。本研究拟利用体内诱导抗原技术,找到一些结核分枝杆菌的体内诱导基因,并分析它们的功能,从而进一步了解结核分枝杆菌致病的具体机制,为将来发现新的药物靶标,研发新的疫苗和诊断试剂提供一些新的线索。 方法 1.结核分枝杆菌基因组表达文库的构建:提取结核分枝杆菌基因组染色体,用Sau3A Ⅰ不完全酶切,回收1-4kb基因组DNA片段。限制性内切酶BamH Ⅰ酶切 郑州大学硕士学位论文 结核分枝杆菌体内诱导抗原初步研究 原核表达载体pKK223一8,回收线性载体。将上述两种DNA片段进行连接反应,电 击转化大肠杆菌DH5a,之后鉴定文库。 2.结核分枝杆菌基因组表达文库的筛选:收集感染人型结核分枝杆菌患者血 清,用大肠杆菌DH5a和人型结核分枝杆菌超声产物吸附病人血清,采用菌落原 位免疫的方法筛选文库,寻找阳性克隆。 3.体内诱导抗原基因的序列分析:将筛选到的阳性克隆提取质粒,按照表达 载体插入位点两侧的质粒DNA序列设计并合成测序专用引物,对插入片段进行 测序,以测得序列为基础,用BLAST软件在Genbank上搜索同源序列。 结果 1.构建了人型结核分枝杆菌基因组表达文库,文库容量1.02 x104,已满足了 我们研究工作的需要,为进一步筛选结核杆菌体内诱导基因莫定了良好的基础。 2.采用体外培养的大肠杆菌DH5a和结核分枝杆菌超声产物与患者血清共温 育的方法处理血清,筛选近7000个文库克隆,获得28个阳性克隆。 3.对阳性克隆中外源DNA插入片段进行测序,在Genbank上进行BLAST, 找到与人加‘口bacterium Tuberculosis H37Rv菌株高度同源的ORF共巧个,按功 能可分为以下五类:脂类代谢、中间代谢、细胞壁、假想蛋白、结构蛋白等。经 验证,初步认为这巧个基因可能为人型结核分枝杆菌的体内诱导抗原基因。 结论 1.本研究在国内首先利用体内诱导抗原技术,率先找到了15个人型结核分枝 杆菌体内诱导抗原基因,为进一步分析其功能打下了基础,并为结核病防治研究 带来新的机会。 2.IVIAT是一个崭新的研究体内表达基因的方法,快速、简便,无须使用动 物模型,仅使用常规的免疫学和分子生物学实验方法,是研究病原微生物体内 诱导基因的一个很有价值的手段。


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3 Douglas B.Yong ,Thomas R.Garle ,陈爱荣;结核分枝杆菌的热休克蛋白及其抗原[J];微生物学免疫学进展;1992年04期
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9 申浩俊;;免疫荧光试验用于结核分枝杆菌抗体的测定[J];国际生物制品学杂志;1981年01期
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13 孙述学;;结核分枝杆菌培养滤液的二维电泳分析及6个新蛋白的纯化和定性[J];国外医学(微生物学分册);1999年02期
14 刘俊华,冯蝶仪,陈建波,陈郁筠;结核分枝杆菌Ag85B基因克隆及表达质粒构建[J];国外医学.临床生物化学与检验学分册;2003年05期
15 刘来成;王淑玲;范雄林;付瑞玲;刘岚;卢贤瑜;;结核菌H37Ra在小鼠体内诱导的免疫应答[J];中国生物制品学杂志;2008年05期
16 王淑玲;刘来成;卢贤瑜;冯文莉;;结核菌H37Ra在小鼠体内诱导的抗结核细胞免疫应答的研究[J];重庆医科大学学报;2008年05期
17 汪广荫,赵春颖,马金青,王宇;结核分枝杆菌胞浆蛋白质抗原的制备与检测[J];齐齐哈尔医学院学报;1999年01期
18 余传霖;;哺乳动物Toll样受体对结核分枝杆菌的控制[J];国外医学(微生物学分册);2003年06期
19 王宝林,王洪海;结核分枝杆菌DNA疫苗研究进展[J];中华结核和呼吸杂志;2004年11期
20 吴悦涵;结核分枝杆菌的分子免疫学进展[J];国外医学.免疫学分册;2004年02期
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1 张智慧;陈兴;;蛋白芯片技术检测结核分枝杆菌的临床应用[A];中华医学会第七次全国检验医学学术会议资料汇编[C];2008年
2 刘焰;刘胜武;谈蓉;马立新;刘君炎;;结核分枝杆菌Ag85B与ESAT-6双顺反子重组腺表达载体的构建[A];第六届全国免疫学学术大会论文集[C];2008年
3 谢莉;马玙;高微微;李传友;张宗德;陈效友;古书香;刑爱英;郑素华;刘忠良;陈曦;韩喜琴;;三种结核分枝杆菌抗原刺激后γ-干扰素释放反应在结核病和结核分枝杆菌感染诊断中的意义[A];2005年中国防痨协会全国学术会议论文集[C];2005年
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5 冯永红;丁元生;胡忠义;;结核分枝杆菌CE抗原复合物对人单核-巨噬细胞TNF-α产生的影响[A];2006中国防痨协会全国学会会议论文集[C];2006年
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1 董海燕;中国13省市结核分枝杆菌基因多态性分析[D];中国疾病预防控制中心;2011年
2 陈嘉臻;结核分枝杆菌特异的RD2/RD11蛋白应用于结核免疫诊断的研究[D];复旦大学;2009年
3 王平;肺分枝杆菌感染临床特征、耐药模式、预后研究及肺组织结核分枝杆菌巢式PCR检测[D];北京协和医学院;2011年
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6 范雄林;结核分枝杆菌基因疫苗的构建及其免疫学特性的初步研究[D];第四军医大学;2001年
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10 王甦民;1.结构分枝杆菌毒力相关基因的研究 2.结构分枝杆菌DNA指纹技术及其应用研究[D];北京市结核病胸部肿瘤研究所;2001年
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1 高志勇;结核分枝杆菌体内诱导抗原初步研究[D];郑州大学;2003年
2 蔡溢;结核分枝杆菌RmlA的表达、纯化以及酶促反应动力学研究[D];大连医科大学;2006年
3 谢莉;体外γ干扰素检测在结核分枝杆菌潜伏感染及结核病诊断中的临床意义[D];北京市结核病胸部肿瘤研究所;2004年
4 王霞芳;IFN-γ增强BALB/c小鼠对结核分枝杆菌感染的抵抗力[D];苏州大学;2002年
5 曹立雪;应用膜芯片检测结核分枝杆菌rpoB基因突变[D];中国人民解放军军事医学科学院;2003年
6 韩喜琴;噬菌体生物扩增法检测结核分枝杆菌药物敏感性研究及评价[D];北京市结核病胸部肿瘤研究所;2004年
7 王琳;结核分枝杆菌ClpX和ClpP2蛋白酶的克隆表达及其性质研究[D];西南大学;2010年
8 丁卫民;耐多药肺结核与结核分枝杆菌L型感染的临床研究[D];山西医科大学;2003年
9 吴玉敏;1.结核分枝杆菌去标签Mtb8.4-Hspx和Hspx-Mtb8.4基因克隆及表达 2.FTY720对肾移植受者治疗的安全性和有效性系统评价[D];兰州大学;2010年
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1 记者 韩晓玲 通讯员 范敬群 金安江;华中农大研究成果获世界声誉[N];湖北日报;2009年
2 庄愉;新型抗结核疫苗的开发研究[N];中国医药报;2002年
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4 特约撰稿布海 本报记者王旗;中国乳业引爆“无抗原子弹”[N];中国经营报;2002年
5 中国兽医药品监察所 丘惠深研究员;猪瘟的确诊与净化重在抗原[N];中国畜牧报;2002年
6 罗刚 张荔子;人用禽流感疫苗抗原节省免疫效果好[N];健康报;2006年
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8 中国药品生物制品检定所 陈玉琴;让HIV无处遁形[N];医药经济报;2001年
9 骆抗先;乙肝e抗原阴性的慢性乙肝也应重视[N];家庭医生报;2007年
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