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《郑州大学》 2003年
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造血移植物中CD34~+细胞CXCR4表达及其淋巴细胞免疫表型的研究

吕璐璐  
【摘要】: 目的:异基因造血细胞移植(allogeneic hematopoietic cell transplantation,allo-HCT)是临床治疗恶性血液病、非恶性血液病、自身免疫病、先天性疾病及某些恶性实体瘤的重要手段。成功的移植要求正常供者造血干/祖细胞(hematopoietic stem/progenitor cells,HSPC)归巢到受者骨髓微环境,实现迅速而持久的造血和免疫重建。HSPC的动员和归巢、移植后免疫重建、移植物抗宿主病(graft-versus-host disease,GVHD)和移植物抗白血病(graft-versus-leukemia,GVL)效应是影响移植成败的重要病理生理过程,其发生与移植物中细胞成分密切相关。研究表明,HSPC的归巢和动员由HSPC的定向迁移决定。基质细胞衍生因子(stromal cell-derivedfactor 1,SDF-1)与其配体CXCR4的结合在HSPC的归巢和动员中起重要作用。此外,移植物中辅助细胞成分在促进移植物跨过异基因屏障植入受者骨髓的过程中也起到重要作用。资料表明:GVHD是临床异基因造血细胞移植的主要障碍,供体T淋巴细胞对宿主抗原识别、活化并产生各种类型细胞因子在GVHD的发生中起重要作用;造血细胞移植后免疫重建与移植后感染及二次肿瘤的发生密切相关;GVL效应是异基因造血细胞移植根治恶性血液病的主要机制,临床过继性免疫治疗是治疗微小残留病及逆转复发的有效手段。以上病理生理过程与移植物中淋巴细胞亚群的数量及功能密切相关。正常人骨髓、脐血及动员后外周血是异基因造血细胞移植造血干细胞的主要来源,含有解剖定位不同的HSPC,具有不同的移植特点,作者采用CD34 MultiSort Kit免疫磁珠分离系统纯化得到不同来源CD34~+细胞,流式细胞仪检测纯化后CD34~+细胞表面CXCR4的表达,采用三色免疫荧光标记流式细胞术检测 郑州大学2003年硕士论文 造血移植物中CD34+细胞CXCR4表达及其淋巴细胞免疫表型的研究 不同来源移植物中淋巴细胞亚群,旨在探讨不同来源CD34+细胞表面CxCR4表达的 异同及移植物中细胞成分与异基因造血细胞移植后造血/免疫重建、GVHD、GVL效 应、外周血HSPC动员的关系。 方法:采用CD34 Multisort儿t免疫磁珠分离系统纯化得到不同来源CD34+细 胞,流式细胞仪检测纯化后CD34+细胞表面CXCR4的表达,采用三色免疫荧光标 记流式细胞术检测不同来源移植物中淋巴细胞亚群。即选择正常人骨髓细胞(取自 骨髓移植健康供者)、脐血(取自足月剖宫产健康产妇),动员后外周血(取自外周 血干细胞移植健康供者动员后采集的标本),外周血(取自同一外周血干细胞移植健 康供者动员前的外周血标本)各10份为研究对象。脐血和骨髓标本先经轻乙基淀粉 去除红细胞后,淋巴细胞分离液提取单个核细胞,加入MiniMACS磁性细胞分离 试剂盒试剂,混匀,4℃冰箱孵育进行磁标记,将分离柱固定于MACS磁场内,将 标记好的细胞悬液加入分离柱,淘汰出CD34一细胞,最后脱离分离器进行加压洗脱 得到纯化的CD34+细胞。取9只试管,管1和管2加入纯化后CD34+细胞,管3至 管9每管加入纯化前标本,依次加入抗体组合,CXCR4一PE/CD34一Pecys、 CDS一FITC/CD4一R一PE/CD3一TC、CD45RA一ITC/CD45RO一PE/CD4一Peeys、CD45RA- FITe/eD45Ro一P曰eDs一Peeys、eo3一FITe/eD16一56一pE及相应同型对照,室温避光 孵育30 min,加入溶血素0.5ml裂解红细胞30 min,使用EPICS一EUTE流式细胞 仪及其配套软件记数和分析。统计分析软件采用SPSS10.O。样本均数比较采用单因 素方差分析(one.way ANoVA),分析前作正态分布和方差齐行检验,非正态分布 或方差不齐者作变量转换,转换后仍非正态分布或方差不齐者作秩和检验。检验水 准a=0 .05。 结果:(1) cD34+细胞表面cxcR4表达为正常人骨髓(40.21士6.72)%,脐血 (2 0.93士3.96)%,动员后外周血(2 4.56士3.41)%,脐血和动员后外周血cD34+细胞 CXCR4表达均低于骨髓(P0.05),脐血和动员后外周血差异无统计学意义(P0.05)。 (2)en3+eos,Ow,eD3+en4一eos,ow亚群占en3+细胞亚群的比例在骨髓中最高,为 (8.61士1.40)%,在动员后外周血和脐血较低,为(5.11士0.76)%和(3 .31士0.88)% (P0.01)。(3)CD4+CD45RA十CD45RO一细胞亚群占CD4+细胞亚群的比例为脐血最 高,为(83.83士12.24)%,动员后外周血次之,为(43.58士4.54)%,骨髓最低为(28.1 士4.52)%(P0.01);en4+en45RA+eD45Ro一与en4+en45RA一eD45Ro+细胞亚群的 郑州大学2003年硕士论文 造血移植物中CD34+细胞CXCR4表达及其淋巴细胞免疫表型的研究 比例为脐血最高,动员后外周血次之,骨髓最低;CDS+CD45RA+C D45RO一细胞亚 群占cDS+细胞亚群的比例为脐血最高,为(86.69士6.12)%,动员后外周血次之,为 (57.64士4.77)%,骨髓最低为(4 1.86士3.31)%(p0.01);CDS+CD45双+eD45Ro一细胞 亚群与cDS+ cD45RA一cD45Ro十细胞亚群的比例为脐血最高,动员后外周血次之, 骨髓最低。(4)动员后外周血“初始”T细胞亚群(CD4+CD45RA+CD45RO一和 CDS+CD45RA+CD45Ro一)血浓度较动员前增高的倍数高于“记忆”T细胞亚群 (eD4+CD45RA一CD45Ro+和eDS+Cn45RA一en45Ro+)增高的倍数,“初始”T细胞 亚群较“记忆”T细胞亚群优先动
【学位授予单位】:郑州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R55

【参考文献】
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