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《郑州大学》 2004年
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鼻咽癌中DNA聚合酶β基因突变及与EB病毒相关性研究

郑红  
【摘要】:目的:许多证据表明肿瘤的发生与细胞DNA损伤修复能力下降有密切关系。DNA聚合酶β(DNA polymerase β,polβ)是DNA聚合酶家族的一员,广泛分布于哺乳动物细胞内,主要功能是DNA错配修复。其基因组DNA序列及互补DNA(cDNA)序列已有报导,且报道在结肠癌、直肠癌、胃癌、乳腺癌、肝癌、肺癌、膀胱癌、前列腺癌、食管癌中发现有pol β基因的突变,其中结、直肠癌患者中突变频率高达80%。然而有关鼻咽癌中有无pol β基因突变尚未见报道。该课题利用国内外这些年来对pol β的研究基础,采集非高发区鼻咽癌及癌旁组织标本,对pol β的变异进行研究,以了解该基因在鼻咽癌中突变的情况,为探索鼻咽癌的发病机制提供新的理论依据。有研究表明,EB病毒(Epstein-Barr virus EBV)感染可能引起癌基因和抑癌基因突变,从而在鼻咽癌发生中起重要作用。但EBV感染引发鼻咽癌的过程与修复基因pol β的突变有无关系,国际上还未见报道。该课题提取鼻咽癌及其癌旁组织的DNA并利用特异性EBV引物加以扩增,探讨EBV感染与DNA聚合酶β突变及鼻咽癌发生的相关性。 材料与方法:鼻咽癌标本26例均在河南省内医院切取活检时收集(编号为NPCa-z),均经病理检查诊断为鳞状上皮细胞癌;同时切取癌旁标本26例(编号JCTa-z)。实验中使用的试剂、质粒载体、菌种除本室保存外,均购于国内外各公司。第一部分:提取总RNA;反转录合成cDNA;巢式PCR扩增;用SSCP筛选突变基因序列;以一对全基因引物扩增在SSCP中被发现的异常标本的pol 郑州大学2004届硕士学位论文鼻咽癌中DNA聚合酶日基因突变及与EB病毒相关性研究 p完整DNA序列:选择pGEM一T为载体,以几DNA连接酶连接目的基因Pol p和质粒DNA;选用JM 109为宿主菌,用氯化钙共沉淀法制备感受态细胞并将 重组体转入宿主菌。在用插入灭活法、蓝白筛选、小量质粒提取后限制性内切 酶切割以及通用引物扩增等方法鉴定重组体;最后通过大量质粒提取测定DNA 序列,测得序列用DNASIs、OMIGA软件与GenBank中查到的DNA聚合酶p 基因序列进行同源性比较分析,推测其蛋白序列并分析蛋白同源性及结构改变 情况。第二部分:提取26例鼻咽癌及其癌旁组织的DNA,用EBV引物进行扩 增,观察是否出现阳性结果,分析出现EBV-PCR阳性与pol日突变及鼻咽癌发 生之间的相关性。 结果:本研究polp一SsCP结果显示,在26例癌旁组织中polp无突变。26 例鼻咽癌组织中存在polp基因变异的有8例,突变率为30.8%。从中随机抽取 3例polp基因变异的鼻咽癌标本(编号NpCI,NpCZ,NpC3)及1例癌旁正 常组织标本(编号JCTI),polp测序结果显示:NPCI的第454位核普酸由T 变为C,其氨基酸变异为第114位氨基酸由Phe变为Ser;第4“位核昔酸由G 变为A,其氨基酸变异为第118位氨基酸由Gly变为Glu。NPcZ的第148位核 普酸由A变为G,其氨基酸变异为第28位氨基酸由Asn变为Ser。NPC3的第 287位核营酸由A变为G,其第58位氨基酸谷氨酸(Glu)未改变。JCTI的核 普酸序列无改变。提取DNA用EBV引物进行扩增,26例鼻咽癌标本中出现阳 性的有24例,阳性率为92.3%,与文献中用其他方法得出鼻咽癌患者EB病毒 感染率为89一100%一致;对应的癌旁组织出现一致的反应。实验结果发现有pol p突变的病例均有EBV感染。 结论:1.本研究发现鼻咽癌中存在polp基因突变。2.在鼻咽癌中有多种 郑州大学2004届硕士学位论文 鼻咽癌中DNA聚合酶日基因突变及与EB病毒相关性研究 polp突变形式,多种类型的突变形式可能导致氨基酸序列、二级空间结构的改 从而导致酶活性的变异,在鼻咽癌的发生中可能起重要作用。3.在鼻咽癌 发现EBv感染与polp的变异之间有一定的相关性。 变中
【学位授予单位】:郑州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R739.63

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【引证文献】
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