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淫羊藿多糖的分离纯化结构分析和免疫活性研究

李德耀  
【摘要】:本文对淫羊藿多糖的提取、分离、纯化和免疫活性进行了系统的研究,对所得到的一个大分子量单组分进行了理化性质研究和结构测定。主要内容包括以下几点: 1、建立了多糖、蛋白和糖醛酸的含量测定方法;在此基础上,采用4因素3水平正交试验,对淫羊藿多糖的提取工艺进行了研究,确定的最佳提取方案为:加15倍量的水,在100℃条件下,提取3次,每次1.5小时。按上述工艺进行提取,多糖的实际收率为7.78%。 2、采用大孔吸附树脂法对淫羊藿多糖的脱色、除蛋白工艺进行了研究。对树脂脱色和除蛋白的影响因素,如树脂类型、处理时间、鞣酸、pH值、上样量等进行了考察,研究表明ADS-7的脱色、除蛋白效果最好。结果表明:该方法对淫羊藿粗多糖中的色素和蛋白具有较高的去除效率,淫羊藿粗多糖中的蛋白含量由1.2%下降到0.035%,经冻干所得产品为灰白色。 3、淫羊藿多糖首先进行脱盐,然后经DEAEA-25、DEAE Sepharose CL-6B、Sephacryl S-200HR、Sephacryl S-400HR分离纯化得到10种多糖。所得多糖分别经毛细管电泳和HPGPC进行纯度测定和分子量测定。对其中纯度较高、量较大的EPSBⅡ2进行结构表征,确定其主链结构是→4)-α-D-GalpA(1→4)-α-D-GalpA(1→重复的单元。 4、对淫羊藿多糖进行免疫活性测定,发现EPSAⅠ1,EPSAⅠ22,EPSAⅡ和EPSBⅢ3具有较强的免疫活性。


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