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《郑州大学》 2009年
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替尼泊甙与草酸铂、顺铂联合用药对胃癌细胞杀伤作用的实验研究

高明  
【摘要】:胃癌在我国是最常见肿瘤之一。目前据Parkin最新报道其发生率位居第四位,死亡率仅次于肺癌占第二位。手术是主要的治疗措施,但由于多数患者有不同程度微转移的存在,术后复发转移的晚期胃癌患者临床上十分多见,因此化疗在胃癌综合治疗中处于非常重要的地位。目前国内外常用的化疗方案有效率在50%~70%,但是仍有一部分胃癌患者治疗失败。近年来研究表明恶性肿瘤细胞对化疗药物的敏感性下降是影响治疗效果的主要原因。 替尼泊甙(VM-26)是拓扑异构酶Ⅱ抑制剂,被美国FDA批准应用于多种肿瘤的治疗。VM-26作用机制是通过抑制TopoⅡ,干扰DNA的双链断裂再连接作用,阻止细胞的复制转录功能,将细胞阻滞在G2/M期,诱导细胞的凋亡。该药在临床上的应用十分广泛。该药因良好的脑膜通透性,在小细胞肺癌,脑瘤,血液系统肿瘤和淋巴瘤等治疗上占有重要的位置,但在胃癌方面报道较少。在胃癌的临床治疗中,省医肿瘤科首次将VM-26,DDP,5-FU这三种有协同作用的药物联合组成了VDF方案治疗中晚期胃癌,有效率达71%,并与常用的EDF(VP-16+DDP+5-FU)方案(有效率48.8%)比较,差异有显著意义。实验室基础研究结果也进一步说明了VDF方案设计的合理性和科学性。 草酸铂和顺铂均为胃癌化疗的一线药物,这两种药物虽然都是铂类,作用位点都是细胞的DNA(草酸铂对RNA亦有作用),但两药无交叉耐药性,并且副作用不叠加,有报道提到两药有协同作用,但两药联用国内外报道较少,替尼泊甙(VM-26)与草酸铂两药联用及替尼泊甙(VM-26)、草酸铂与顺铂三药联用报道更少。 本实验目的主要讨论:1.双药(替尼泊甙与+草酸铂)联合应用是否强于单药(草酸铂)对胃癌细胞的杀伤作用及增效机制;2在上述基础上三药(替尼泊甙+草酸铂+顺铂)联合应用能否强于双药(替尼泊甙+草酸铂)联用对胃癌细胞的杀伤作用增效机制3.在求证以上结果的试验中,进一步明确三药(替尼泊甙+草酸铂+顺铂)联用时可否减少药物用量并取得增效结果,从而为以后的临床工作提供理论依据。 材料与方法: 1.细胞选用人胃腺癌细胞株BGC-823; 2.实验药物选用VM-26(teniposide)以及常用的化疗药物顺铂(cisplatine,DDP),草酸铂(oxaliplatine,OXA) 3.MTT比色法测定单药及联合用药的不同浓度处理后细胞的生长抑制率, 4.并选用较小的浓度组用流式细胞仪检测细胞的周期分布和凋亡率的变化 5.免疫组化测定凋亡相关基因capase-9,livin的蛋白表达的影响。 6.实验数据采用SPSS10.0统计软件处理,计量资料,采用正态性检验,方差齐性检验均数间的两两比较采用LSD方法;率的比较采用X~2检验,单样本t检验,以α=0.05为检验水准。 结果: 1.MTT法结果显示不同浓度的OXA,OXA/VM-26,OXA/VM-26/DDP处理细胞48h后,处理组与对照组以及各处理组之间OD值的差异均有统计学意义(P<0.05),各组药物的IC50值分别为20.00μg/ml、3.38/1.51μg/ml、0.87/0.39/0.52μg/ml。结果表明,OXA,OXA/VM-26,OXA/VM-26/DDP等药物可有效的抑制胃癌细胞BGC-823的生长,其抑制效应在一定的浓度范围内存在着剂量效应关系。双药抑制效应比单药的抑制效应强,三药抑制效应比双药的抑制效应强,个处理组之间有统计学差异(P<0.05)。在相同摩尔浓度下,对胃癌细胞的抑制作用由强到弱为OXA/VM-26/DDP>OXA/VM-26>OXA。 2.免疫组化结果显示,2.5μg/ml的OXA,OXA/VM-26,OXA/VM-26/DDP处理胃癌细胞BGC-823 48h后,凋亡相关基因caspase-9的蛋白表达阳性率明显增加,livin蛋白的表达阳性率明显减少。处理组与对照组及各处理组之间差异有统计学意义(P<0.05)。 3.流式细胞仪结果显示,三组药物处理细胞后流式细胞图上均出现典型的亚二倍体凋亡峰。单药组(OXA)在0、12、24、48h细胞的凋亡率为3.80%、5.89%、13.52%、31.68%;双药组(OXA/VM-26)在0、12、24、48h细胞的凋亡率为3.90%、11.99%、38.25%、69.11%;三药组(OXA/VM-26/DDP)在0、12、24h,细胞的凋亡率为3.73%、42.79%、85.25%(本组细胞48h时大量凋亡,未做统计)。三组药物处理细胞后,在0、12、24、48h,单药组G_2/M细胞为24.86%、17.89%、11.32%、3.76%;S期细胞为29.32%、33.57%、38.92%、43.27%;双药组为G_2/M细胞为27.02%、21.53%、16.32%、2.06%;S期细胞为30.42%、34.67%、39.81%、46.72%;三药组为G_2/M细胞为29.02%、18.35%、7.15%、0.76%;S期细胞为28.32%、39.74%、52.63%、65.86%。各组与Oh相比,细胞凋亡和周期的变化均有统计学意义(P<0.05)。 结论: 1.OXA,OXA/VM-26,OXA/VM-26/DDP可抑制胃腺癌细胞BGC-823的生长,这种抑制作用在一定浓度范围内呈剂量依赖性。在相同摩尔浓度下,对胃癌细胞的抑制作用由强到弱为OXA/VM-26/DDP>OXA/VM-26>OXA。 2.OXA,OXA/VM-26,OXA/VM-26/DDP均可上调凋亡相关基因caspase-9的蛋白表达,可下调凋亡抑制基因livin蛋白的表达,且此作用OXA/VM-26/DDP>OXA/VM-26>OXA。调控细胞基因的表达是这三组药物诱导细胞凋亡的机制之一。 3.诱导凋亡是化疗药物杀伤肿瘤细胞的主要机制,对细胞周期分布影响和对凋亡基因的表达调控和药物诱导凋亡的机制有关。诱导细胞凋亡的能力OXA/VM-26/DDP>OXA/VM-26>OXA,三组的细胞周期分布不同。
【学位授予单位】:郑州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R735.2

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