收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

高产碱性蛋白酶菌种的选育及发酵过程优化

孙倩  
【摘要】:碱性蛋白酶是一类重要的工业用酶,广泛应用于食品、医药、洗涤剂、皮革、酿酒等行业。当前,食品工业用酶主要来自微生物,尤其是碱性蛋白酶的应用最为广泛。利用碱性蛋白酶水解大豆蛋白可以得到风味好、营养价值高的大豆肽,为筛选用于制备大豆肽的高效、优质的碱性蛋白酶生产菌,并进行大豆肽的工业化生产,本文主要进行了菌种的选育、摇瓶条件及发酵罐条件下发酵条件的优化等方面的研究。 首先,从全国各地136个盐碱地土样中分离出50株菌,挑选出透明圈较大的菌株20株,然后进行酪蛋白平板初筛和实验室摇瓶复筛,筛选出1株高产碱性蛋白酶菌株PY41。通过对菌株PY41的形态学特征、生理生化特性、16S rDNA序列和gyrB基因序列的研究测定数据综合分析,鉴定菌株PY41为高地芽孢杆菌(Bacillusaltitudinis)。将PY41菌株的发酵后的粗酶液进行SDS-PAGE和蛋白酶活性条带染色,确定该蛋白酶相对分子质量为26k。 研究了不同培养基组分和发酵条件对高地芽孢杆菌PY41发酵产酶的影响。在单因素试验的基础上,选取蔗糖含量、豆粕含量、初始pH值三个因素为自变量,以产生的蛋白酶活力为指标,进行了三因素三水平的响应面试验。优化后的高地芽孢杆菌PY41的发酵培养基组成为:豆粕6%,蔗糖5%,葡萄糖2%,CaCl_20.07%,MgSO_40.04%,KCl0.03%,吐温-800.05%。在温度为37°C,初始pH值为10.0,摇床转速300r/min的条件下发酵5天,发酵所产碱性蛋白酶的酶活力达到1207U/mL。 在摇瓶发酵的基础上,对10L发酵罐条件下高地芽孢杆菌PY41和地衣芽孢杆菌20203产碱性蛋白酶的发酵工艺进行了优化,得到最佳工艺参数为:装液系数0.6,接种量5%,温度34°C,转速300r/min,pH值维持在9.5-10.0,溶解氧维持在25mg/L-35mg/L。在此工艺条件控制下,高地芽孢杆菌PY41和地衣芽孢杆菌20203的酶活力分别为1132U/mL和1876U/mL,比优化前提高了53.2%和130.5%。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 马永强;那治国;张娜;张浩;石彦国;;地衣芽孢杆菌2709高去酰胺活性碱性蛋白酶发酵条件及酶学性质的研究[J];食品工业科技;2008年10期
2 唐雪明,邵蔚蓝,沈微,王正祥,方惠英,诸葛健;地衣芽孢杆菌2709和6816碱性蛋白酶基因在大肠杆菌中的克隆、表达及序列分析[J];应用与环境生物学报;2002年02期
3 马永强;张浩;杨春华;刘颖;孙冰玉;张毅方;石彦国;;地衣芽孢杆菌2709蛋白酶分离纯化研究[J];食品科学;2010年11期
4 郑铁曾,涂提坤,黄登禹,暴学玉;提高C_(1213)菌碱性蛋白酶活力的研究[J];食品与发酵工业;1993年01期
5 姚忠;孙蓓蓓;李霜;何冰芳;;高强度耐有机溶剂蛋白酶的纯化及性质[J];过程工程学报;2008年06期
6 彭勇,王忠彦,胡承,胡永松;地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶的研究Ⅱ碱性蛋白酶的提纯和性质研究[J];工业微生物;2000年04期
7 袁铸,王忠彦,胡承,胡永松;地衣芽孢杆菌JF-UN122碱性蛋白酶的分离纯化与性质[J];工业微生物;2003年03期
8 马永强;尹永智;杨春华;刘颖;孙冰玉;张毅方;石彦国;;地衣芽孢杆菌2709产碱性蛋白酶的发酵动力学研究[J];食品工业科技;2010年06期
9 那治国;马永强;张浩;张毅方;林杨;;紫外诱变高去酰胺活性碱性蛋白酶生产菌的研究[J];食品与发酵科技;2009年01期
10 张浩;张帅;张娜;马永强;;地衣芽孢杆菌2709蛋白酶分离纯化与性质[J];现代食品科技;2010年02期
11 杨冠东;杜少平;杨础华;黄琼;;产碱性蛋白酶的嗜热菌株筛选及发酵条件研究[J];食品与发酵工业;2008年10期
12 李星瑞,王久全,沈如琴,周金玉;765.862碱性蛋白酶对柞绢绸胱胶的中间试验[J];丝绸;1983年12期
13 郑屹;地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶2709的纯化与性质鉴定[J];教育与现代化;1992年S1期
14 王健华,朱宝成;高活力碱性蛋白酶菌种的选育[J];河北省科学院学报;2005年02期
15 潘延云,张贺迎,周艳芬,武金霞,王延旭,吴宝东;原生质体融合构建高产碱性蛋白酶工程菌[J];应用与环境生物学报;2002年04期
16 伍先绍;贺稚非;刘琳;龚霄;;碱性蛋白酶产生菌株的筛选及其酶学性质研究进展[J];中国食品添加剂;2008年03期
17 林敏刚;;碱性蛋白酶在水解植物蛋白中的应用[J];中国油脂;2009年12期
18 肖怀秋,林亲录,李玉珍,赵谋明;微生物碱性蛋白酶研究进展[J];中国食品添加剂;2005年05期
19 李红梅;李琳;侯立琪;陈佳;;地衣芽孢杆菌碱性蛋白酶酶解改性玉米蛋白的研究[J];粮食与饲料工业;2008年03期
20 裘娟萍;提高碱性蛋白酶生产效益的措施[J];氨基酸和生物资源;1996年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 张仁义;陈家祥;郑巧霞;王长康;;地衣芽孢杆菌对肉鸡血液生化指标的影响[A];福建省畜牧兽医学会2009年学术年会论文集[C];2009年
2 程素琴;龙厚茹;;地衣芽孢杆菌防治霜霉病研究[A];全国生物防治学术讨论会论文摘要集[C];1995年
3 刘聪敏;谭竹钧;朱西儒;;化工材料在生物菌制剂中应用的初步研究[A];第四届全国绿色环保农药新技术、新产品交流会暨第三届生物农药研讨会论文集[C];2006年
4 杨金龙;潘康成;;高产碱性蛋白酶地衣芽孢杆菌的研究进展[A];中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第三届第七次学术研讨会论文集[C];2004年
5 张仁义;黄小红;陈家祥;黄灿丽;王长康;;地衣芽孢杆菌对肉鸡十二指肠蛋白酶活性及粪便中常规成分的影响[A];福建省畜牧兽医学会2009年学术年会论文集[C];2009年
6 潘康成;倪学勤;吴岳;;地衣芽孢杆菌对鸡增重及肠道形态发育的影响研究[A];中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第三届第六次学术研讨会论文集[C];2002年
7 张念海;易安妮;丛莉;吴希阳;;地衣芽孢杆菌1103的产酶、抑菌特性及其发酵条件的优化[A];“食品加工与安全”学术研讨会暨2010年广东省食品学会年会论文集[C];2010年
8 宋诙;郑雯;谭明;徐健勇;梁群;张跃灵;李莉;;具有抗菌肽表达功能的地衣芽孢杆菌的构建及应用[A];格莱姆抗菌肽——抗菌肽开发与应用技术研讨会论文集[C];2009年
9 赵明莲;张克勤;;食线虫真菌碱性蛋白酶cDNA基因的克隆及在Pichia pastoris中的异源表达[A];中国菌物学会第三届会员代表大会暨全国第六届菌物学学术讨论会论文集[C];2003年
10 管刚;赵静;张俊;白伟;;应用碱性蛋白酶制取牦牛血红素工艺的研究[A];中国畜牧兽医学会2009学术年会论文集(下册)[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 付石军;中性植酸酶产生菌的筛选及基因工程菌的构建[D];浙江大学;2008年
2 姚大伟;短小芽孢杆菌碱性蛋白酶酶学特性及其酶基因克隆、表达的研究[D];南京农业大学;2010年
3 黄庆;脱毛蛋白酶的纯化及其基因的克隆与表达研究[D];四川大学;2003年
4 马春玲;海洋酵母普鲁兰类酵母碱性蛋白酶发酵生产、特性研究及基因克隆[D];中国海洋大学;2007年
5 潘皎;短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)的碱性蛋白酶基因的表达研究[D];四川大学;2004年
6 郭继平;米曲霉碱性蛋白酶的异源表达和定向进化以及遗传改造[D];哈尔滨工业大学;2008年
7 齐祥明;加压CO_2-乙醇-水体系等电沉淀蛋白质过程的研究[D];浙江大学;2004年
8 李美菊;产蛋白酶工程菌株的构建及其释放DNA的研究[D];武汉大学;2005年
9 何卫中;用加压CO_2从乙醇-水溶液中沉淀蛋白质的研究[D];浙江大学;2002年
10 刘忠义;草鱼消化系统蛋白酶生化特性的研究[D];江南大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王健华;碱性蛋白酶高产菌株的选育与酶学性质研究[D];河北大学;2005年
2 孙倩;高产碱性蛋白酶菌种的选育及发酵过程优化[D];河南工业大学;2012年
3 袁铸;复合诱变原生质体选育碱性蛋白酶高产菌及其酶学性质研究[D];四川大学;2001年
4 王伟伟;枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶抗烟草花叶病毒活性及其酶学性质的初步研究[D];西北农林科技大学;2008年
5 张亚娟;从猪血中酶法制取血红素的研究[D];江南大学;2007年
6 褚忠志;产碱性蛋白酶菌株Bacillus pumilus Zk202的选育与酶学性质研究[D];甘肃农业大学;2008年
7 黄志强;产碱性蛋白酶海洋细菌的筛选及其基因克隆[D];福建农林大学;2006年
8 张映京;南极中山站沉积物宏基因组文库的构建及碱性蛋白酶基因ACPRO001的克隆、表达和性质分析[D];厦门大学;2009年
9 姜健美;黄酒糟蛋白酶法提取工艺研究[D];浙江大学;2007年
10 奚海燕;大米蛋白的提取及改性研究[D];江南大学;2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 罗荧荃;老人秋季防腹泻[N];大众卫生报;2000年
2 北京友谊医院 王润华;以菌制菌[N];健康报;2001年
3 ;酶制剂让谁受益[N];中国化工报;2000年
4 北京朝阳医院药事部 司徒伟;腹泻,如何正确服药[N];保健时报;2010年
5 ;使用洗衣粉注意事项[N];西藏日报;2003年
6 姜敏;实施名牌战略把名品做强做大[N];厂长经理日报;2001年
7 实习生 孟磊;海洋酶研究引发可观产业效益[N];科技日报;2001年
8 ;洗涤剂用复合酶[N];中国乡镇企业报;2002年
9 本报通讯员 赵伟;东信生物科技——绿色生态产业的领航者[N];廊坊日报;2008年
10 记者 刘云丽;长寿离不开益生元[N];医药养生保健报;2010年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978