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《河南工业大学》 2012年
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抗菌性绞股蓝内生真菌的分离鉴定及生物学活性初步研究

范文慧  
【摘要】:本研究从植物绞股蓝中分离得到56株内生真菌,经形态学鉴定为5目、6科、8属。对具有较强抑菌活性的菌株JY25进行形态学观察和ITS-5.8s rDNA序列鉴定,结果表明绞股蓝内生真菌JY25为子囊菌亚门,核菌纲,球壳目,黑孢壳科,毛壳菌属。 以金黄色葡萄球菌和大肠杆菌为指示菌对绞股蓝内生真菌JY25发酵培养基进行优化。结果表明添加1%绞股蓝汁的发酵培养基能更好地促进真菌JY25抗菌物质的产生,优化后对大肠杆菌的抑菌圈直径达到14.89mm,比优化前提高了62.73%;采用正交试验确定JY25最佳发酵条件为:装液量100mL/250mL、接种量3%、温度28℃、转速160r/min、发酵时间9d,优化后真菌JY25对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌抑菌圈直径分别为16.5mm和30.3mm,比优化前高出4.2mm和4.0mm。 对绞股蓝内生真菌JY25抗菌活性物质的酸碱稳定性、热稳定性和蛋白酶敏感性的研究结果表明,抗菌活性物质在pH3.0~7.0对大肠杆菌有良好的抑菌效果,在pH5.0~9.0对金黄色葡萄球菌抑菌效果较好;抗菌活性物质在30~90℃范围内具有良好的热稳定性;抗菌活性物质对蛋白酶K不敏感。绞股蓝内生真菌JY25发酵液和绞股蓝浸汁成分鉴定结果表明,JY25发酵液中除了含有与宿主植物相同的活性成分多糖和黄酮外,还含有有机酸、醌和皂苷元类物质。真菌JY25发酵液对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的抑菌活性物质主要存在于乙醚萃余相和乙酸乙酯萃取相。 绞股蓝内生真菌JY25抗菌机制的研究结果表明,真菌JY25活性物质通过影响金黄色葡萄球菌和大肠杆菌细胞膜的通透性,使细胞内大量金属离子渗出,影响指示菌蛋白质合成,使指示菌在对数生长期的生长受到抑制,进而使菌体变形。 绞股蓝内生真菌JY25抗菌物质的抗癌抗氧化试验结果表明,20mg/mL的真菌JY25发酵液、孢子研磨液和绞股蓝浸汁的多糖提取液的粗多糖含量分别为1.453、0.357和1.372mg/mL;5mg/mL的3种样品总抗氧化能力分别为14.06、3.45和4.56U/mL;3种样品对肺癌细胞A549半数致死浓度IC50分别为0.088、0.304和0.385mg/mL。
【学位授予单位】:河南工业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:S853.7

【参考文献】
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