收藏本站
《河南科技大学》 2011年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

黄曲霉毒素B_1免疫学快速检测技术研究

王磊  
【摘要】:本实验研究是通过制备AFB_1人工免疫原和包被原,将制备的AFB_1-BSA免疫原免疫Balb/c小鼠,得到特异性明显的多克隆克抗体;然后通过细胞融合技术,将免疫Balb/c小鼠脾细胞与NS0细胞融合,获得杂交瘤。用竞争ELISA和间接阻断ELISA法,筛选出三株抗AFB_1的单克隆细胞株,选定一株进行小鼠体内诱生法制腹水,然后进行免疫学特性鉴定,其结果特异性好、敏感性强、IC50低,最终研制出检测AFB_1的免疫学检测试剂。 本实验研究的主要内容及结果如下: 1、黄曲霉毒素B_1人工抗原的制备与鉴定 采用N-羟琥珀酰亚胺酯(N-hydroxysuccinimide NHS)法和碳二亚氨法(EDC)将AFB_1分别偶联于载体蛋白BSA和OVA上,分别合成免疫抗原AFB_1-BSA和包被抗原AFB_1-OVA。采用紫外分光光度法(UV)和凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定,通过动物免疫试验获得鼠源多抗血清,并使用间接ELISA和阻断ELISA对多抗血清进行了鉴定。结果表明半抗原AFB_1分别和载体蛋白BSA及OVA偶联成功;免疫的6只小鼠效价均达1×10-4以上,3号小鼠多抗血清敏感性最好,半数抑制浓度IC50(50% inhibitive concentration,IC50)为48.6ng/mL。检测其特异性,只与黄曲霉毒素B2的交叉反应率为2.7%,与其它化同族化学相似物基本无交叉反应。通过实验鉴定,得到了效价高、敏感性强、特异性明显的多克隆抗体。 2、抗黄曲霉毒素B_1单克隆抗体的制备及免疫学定量方法建立 用人工抗原AFB_1-BSA免疫BALB/C小鼠,通过间接ELISA和阻断ELISA的方法选择细胞融合备用鼠;用杂交瘤技术制备黄曲霉毒素B_1单克隆抗体(AFB_1mAb),并对其效价、亲和力、敏感性、特异性、亚型进行鉴定;体内诱生腹水法大量制备单克隆抗体。UV图谱和SDS-PAGE图表明半抗原AFB_1分别和载体蛋白BSA及OVA偶联成功;筛选出2H5-F6、2H5-C9、2H9-C3三株敏感性高、特异性强的杂交瘤细胞;鉴定单抗亚型均为IgG1;细胞培养上清间接ELISA效价在1:2.0×102~1:1.28×103之间,2H5-F6细胞株制作的腹水效价为1:1.28×105,AFB_1mAb亲和常数Ka为2.65×1010L/moL,对AFB_1的IC50为0.58ng/mL;与黄曲霉毒素B2的交叉反应率为3.22%,与其它类药物无交叉反应。通过试验获得高效价、敏感、特异的AFB_1mAb,可用于各种食品中AFB_1残留检测的免疫学试验。 3、黄曲霉毒素B_1免疫学快速检测方法的建立 分别依据酶联免疫吸附和胶体金免疫层析试验原理,研制出的AFB_1残留快速检测试剂。AFB_1-Kit的标准曲线呈S型,符合检测的线性要求,半数抑制浓度IC50为0.58 ng/mL,样品试验中的批间和批内变异都小于15%。对花生、玉米的添加0.1、1、10、100ng/mL AFB_1标准品,平均回收率分别为92.5%和95.3%。AFB_1-Kit性能稳定,检测样品快速、特异、便捷、时间短等优势,可以推广到生产中黄曲霉毒素B_1残留的定性、定量检测中。
【学位授予单位】:河南科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R392.1

免费申请
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 寻思颖;周筑平;;测定食品中黄曲霉毒素B_1的体会[J];中国标准导报;2003年02期
2 子荫;周艳琼;;莫吃霉变食品[J];食品与健康;2002年05期
3 范伟忠;王文熙;鞠梁;;食品中黄曲霉毒素高效液相色谱法测定[J];中国公共卫生;2011年08期
4 杨晶;栾国华;杨润陆;;液相色谱-串联质谱法测定柏子仁中黄曲霉毒素残留量[J];中国药业;2011年14期
5 张英;蔡志斌;郑志伟;;超高效液相色谱法同时测定油炸食品中4种黄曲霉毒素[J];实用预防医学;2011年08期
6 刘丽娜;王莹;金红宇;马双成;林瑞超;;HPLC法测定虫草发酵粉中黄曲霉毒素残留量[J];药物分析杂志;2011年07期
7 栗建明;李纯;顾利红;江英桥;;高效液相色谱柱后衍生法测定果实类药材中的黄曲霉毒素[J];中药新药与临床药理;2011年04期
8 薛伯鸿;;警惕“癌从口入”[J];食品与健康;2000年10期
9 和方珍;;梅雨季节 防“霉”攻略[J];家庭医药(快乐养生);2011年07期
10 杨小丽;韦日伟;申红红;杨美华;欧阳臻;;免疫亲和柱净化光化学衍生高效液相色谱-荧光检测法测定动物类药材中黄曲霉毒素[J];中国药业;2011年15期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王会娟;刘阳;邢福国;;降解黄曲霉毒素B_1漆酶的筛选[A];农产品质量安全与现代农业发展专家论坛论文集[C];2011年
2 孟庆利;;黄曲霉毒素的检测及控制[A];《2010中国猪业进展》论文集[C];2010年
3 涂彩虹;秦文;胡欣洁;;黄曲霉及其毒素微生物防治研究进展[A];经济发展方式转变与自主创新——第十二届中国科学技术协会年会(第三卷)[C];2010年
4 计成;赵丽红;马秋刚;;黄曲霉毒素生物降解的研究进展[A];饲料营养研究进展(2010)[C];2010年
5 蔡飞;高微微;李红玲;陈娟;李志忠;;中药材黄曲霉毒素的污染现状与防除技术[A];2010全国知名中医院院长暨道家文化与中医药养生论坛论文集[C];2010年
6 李娟娟;苏晓鸥;;霉菌毒素吸附剂对饲料中黄曲霉毒素B_1吸附效果及特性研究[A];食品、饲料安全与风险评估学术会议论文集[C];2010年
7 贺竹梅;;黄曲霉毒素食品安全问题分析及对策研究与思考[A];2010第二届中国食品安全高峰论坛论文集[C];2010年
8 刘付香;李玲;梁炫强;;黄曲霉拮抗菌(GZ101)的鉴定及碱性蛋白酶基因克隆、表达[A];广东省植物学会第十九期学术研讨会论文集[C];2010年
9 王金荣;马鹏;娄鹏;任皓;;河南地区DDGS中的黄曲霉毒素B_1、呕吐毒素和玉米赤霉烯酮含量的调查研究[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
10 李红波;胡梁斌;孙俊良;王淼焱;;几种多糖对黄曲霉菌生长及产毒的抑制作用[A];2010年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨华南地区农产品加工产学研研讨会论文摘要集[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 王宁 马秋刚 张建云 胡新旭 计成;黄曲霉毒素的传统去毒方法和生物降解研究进展[N];中国畜牧兽医报;2009年
2 中国WTO/TBT-SPS通报咨询中心供稿;欧盟拟修改食品内黄曲霉毒素抽样方法[N];中国国门时报;2009年
3 记者 高原;多吃青菜可减少黄曲霉毒素危害[N];新华每日电讯;2010年
4 中国WTO/TBT-SPS中心供稿;欧盟发布黄曲霉毒素污染风险法规[N];中国国门时报;2010年
5 上海交通大学 徐建雄 教授;切莫小视饲料中黄曲霉毒素的危害[N];中国畜牧报;2003年
6 徐建雄;切莫小视饲料中黄曲霉毒素的危害[N];中国畜牧报;2003年
7 本报记者 汤江峰 通讯员 雷少榕 谢星;黄曲霉毒素“毒”在哪里?[N];大众卫生报;2001年
8 林祥 梁斌 白艳青 崔顺花;黄曲霉毒素的污染与预防[N];中国畜牧水产报;2001年
9 四川农业大学 李梦云 陈代文;黄曲霉毒素的毒害及残留[N];中国畜牧报;2004年
10 四川农业大学 李梦云 陈代文;黄曲霉毒素的毒害及残留[N];中国畜牧报;2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 杨炼;抗黄曲霉毒素B_1的单链抗体的筛选、表达和改造[D];江南大学;2010年
2 丁小霞;中国产后花生黄曲霉毒素污染与风险评估方法研究[D];中国农业科学院;2011年
3 张道宏;黄曲霉毒素杂交瘤细胞株的选育及免疫层析检测技术研究[D];中国农业科学院;2011年
4 王锋;黄曲霉毒素B_1的辐射降解机理及产物结构特性分析[D];中国农业科学院;2012年
5 雷敏;维生素B_1在绿色有机合成中的应用和牛蒡苷元的制备及其结构修饰[D];华东理工大学;2011年
6 刘睿杰;黄曲霉毒素B_1在不同介质中紫外降解机理及安全性评价[D];江南大学;2011年
7 管笛;黄曲霉毒素M_1单克隆抗体及检测技术研究[D];中国农业科学院;2011年
8 谢光洪;黄曲霉毒素B1免疫层析试纸条快速检测方法的研制[D];吉林大学;2008年
9 史莹华;纳米级硅酸盐结构微粒(NSP)吸附猪饲粮中黄曲霉毒素的研究[D];浙江大学;2005年
10 刘晋;维生素B_1、B_2、PP对急性低氧暴露小鼠营养代谢的改善作用及其机制研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孙丰芹;固态发酵法去除花生粕中的黄曲霉毒素B_1[D];江南大学;2010年
2 靳学敏;郫县豆瓣中黄曲霉毒素B_1在线监测技术研究[D];西华大学;2011年
3 王磊;黄曲霉毒素B_1免疫学快速检测技术研究[D];河南科技大学;2011年
4 唐光波;黄曲霉毒素B_1致肝脏病变过程中IDH3α的初步研究[D];福建农林大学;2011年
5 李园园;花生黄曲霉毒素B_1量子点荧光免疫检测技术研究[D];中国农业科学院;2012年
6 刘畅;益生菌对黄曲霉毒素B_1吸附作用的研究[D];中国农业科学院;2010年
7 肖智;高特异性黄曲霉毒素B_1单克隆抗体的研制[D];中国农业科学院;2010年
8 方宁烨;黄曲霉毒素B_1致人胚肝细胞损伤的初步体外实验研究[D];广西医科大学;2012年
9 陈志娟;玉米中黄曲霉毒素降解与去除的研究[D];中国农业科学院;2010年
10 王涛;发酵豆制品中黄曲霉毒素的控制[D];西华大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026