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《河南科技大学》 2017年
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猪源多杀性巴氏杆菌的分型及其毒力特性研究

乔鹏芸  
【摘要】:近年来,猪多杀性巴氏杆菌病在我国广泛流行并致病,已成为严重危害养猪业发展的主要细菌性病原菌之一。本研究对57株猪源多杀性巴氏杆菌进行了荚膜分型、基因分型和小鼠毒力试验,并对1株弱毒菌株进行了仔猪免疫保护试验,主要得到以下研究结果:1.对实验室保存的57株多杀性巴氏杆菌进行了荚膜分型(Carter分型)、基因分型(Harper分型)。Carter分型共鉴定出荚膜D型32株,占56.14%;荚膜A型25株,占43.86%;未检测到B、E和F型。Harper分型共鉴定出L6型42株,占73.68%;L3型13株,占22.80%;另外还有L1型1株,L5型1株;未检测到L2、L4、L7和L8型。这表明我国猪群中多杀性巴氏杆菌以Carter A型和D型为主;Harper基因型以L6型和L3型为主,还有少量L1型和L5型。Carter分型与Harper分型的关系为:所有32株Carter D型均为Harper L6型,25株Carter A型包括Harper L3型13株、L6型10株、L1型1株和L5型1株。2.小鼠毒力试验结果表明,25株Carter A型菌株毒力普遍较强,其LD50介于17~2.1×10~5CFU之间,其中毒力最强的为PM-5,其LD50不超过9 CFU;32株Carter D型菌株毒力普遍较弱,其LD50介于2.0×10~4~4.8×10~7 CFU之间,其中毒力最强的为PM-15,其LD50为2.0×10~4 CFU。按Harper基因分型进行毒力比较,Carter A型的Harper L6型Carter A型的Harper L3型Carter D型的Harper L6型。在D型(Harper L6型)菌株中发现2株弱毒菌株PM-18和PM-37,其LD50分别为4.8×10~7 CFU和5.3×10~4 CFU。同时发现1株D型(Harper L6型)产毒素巴氏杆菌弱毒菌株TPM9,其LD50为2.6×106CFU。这3株菌株能否作为天然弱毒疫苗菌株值得进一步研究。3.本研究评估了PM-18弱毒菌株作为天然弱毒疫苗菌株的安全性。小鼠安全性试验结果表明,高剂量接种组小鼠(9.6×10~7CFU/只)出现了暂时的精神沉郁,食欲减退等现象,但24小时内均恢复正常。低剂量组(9.6×10~5 CFU/只)没有出现明显的临床症状和病理变化。仔猪一次单剂量接种的安全性试验结果表明,大剂量肌肉注射仔猪(6.2×10~9CFU/头)后,均不出现明显的临床症状和病理变化。仔猪单剂量重复接种的安全性试验结果表明,2次大剂量肌肉注射仔猪(1.2×1010 CFU/头)后,均不出现明显的临床症状和病理变化。4.以PM-18弱毒菌株2次接种22-25日龄仔猪(间隔21日,4.4×10~9CFU/头/次),二免后14日使用高低D型强毒菌株PM-15菌液进行腹腔攻毒,结果表明PM-18免疫组中有1头仔猪出现典型的发病症状并死亡,保护率为4/5;空白对照组仔猪全部出现严重的发病症状并全部死亡。死亡猪剖检均具有典型巴氏杆菌病的病理变化。ELISA抗体检测结果表明,PM-18免疫组仔猪在二免后(35d)时的血清抗体水平(OD630nm值)均超过了1.1050,显著高于对照组仔猪(P0.01)。这表明PM-18弱毒菌株具备进一步被开发为天然弱毒疫苗的潜力。
【学位授予单位】:河南科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:S852.61

【参考文献】
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