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《河南科技大学》 2017年
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绵羊肺炎支原体LY-1株分离鉴定及HSP70 P30基因克隆和序列分析

吴酩  
【摘要】:羊传染性胸膜肺炎是由支原体引起的羊的一种高度接触性传染病,绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)是其重要病原之一。本研究从发病羊的肺脏病料中成功分离出1株绵羊肺炎支原体,并对其生物学特性和免疫原性基因等进行了系统研究,得到了以下研究结果:1.2016年11月,河南省卢氏县某规模化湖羊场发生疑似绵羊传染性胸膜肺炎的病例。羔羊和成年羊均可发生,但羔羊症状表现较重。羔羊死亡率约30%,成年羊未见死亡。病羊体温升高、精神沉郁、食欲减退、咳嗽、呼吸困难和突然死亡。剖检发现其以胸、胸膜和肺脏的浆液性和纤维素性炎症为主要病变特征,具体表现为胸腔和心包有淡黄色积液,胸膜变厚而粗糙,上有黄白色纤维素性沉积,部分羊只发生胸膜与肋膜、心包发生粘连;肺表面有出血点,肺小叶间组织变宽,肺脏色泽变暗等典型病变。通过临床症状和病理剖检,初步判定该病为绵羊传染性胸膜肺炎。2.从发病羊的肺脏病料中分离鉴定出1株疑似支原体,命名为LY-1株。该菌培养困难,但在PPLO固体培养基中,经37℃静置培养5~7日,可长成圆形、透明、露滴状的针尖大小的菌落;培养14~16日,可长成圆形、中心发暗、周围透明、直径2~3 mm的“煎荷包蛋”状菌落。革兰氏染色镜检结果表明,该菌呈球状、两极状、杆状等的多形性。生化试验结果表明,该菌能发酵葡萄糖,但不能利用精氨酸与尿素。上述培养特性、菌体形态和生化特性均符合支原体的特征。药敏试验结果表明,该菌对阿奇霉素、氧氟沙星、环丙沙星高度敏感;对四环素中度敏感,对红霉素、庆大霉素和卡那霉素具有耐药性。3.提取该菌的基因组为模板,使用支原体PCR检测试剂盒鉴定,确定该菌为支原体;进一步使用特异性引物PCR鉴定该菌为绵羊肺炎支原体(361bp)。PCR扩增其16S rRNA全基因(1469 bp)并进行测序和BLAST比对分析,与其同源性最高的均为NCBI数据库已发布的绵羊肺炎支原体的16S rRNA基因序列,其同源性均在99%以上。进一步构建16S rRNA基因的系统发育树,表明LY-1株与绵羊肺炎支原体FJ-FZ株和FJ-SM株亲缘关系最近。以上鉴定结果均表明LY-1分离株为绵羊肺炎支原体。4.热休克蛋白HSP70和黏附因子蛋白P30是支原体重要的保护性抗原因子。以LY-1株基因组为模板,分别扩增了其大小为738 bp的HSP70基因和786bp的P30基因,BLAST比对结果表明,HSP70基因与NCBI已报到猪肺炎支原体序列CP003131.1的同源为77%。P30基因与NCBI已报到猪肺炎支原体序列CP003131.1的同源性为80%。其基因和蛋白特性值得进一步研究。
【学位授予单位】:河南科技大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:S852.62

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 吴燕;袁海文;王琦;岳筠;文明;周碧君;程振涛;;绵羊肺炎支原体贵州株P113基因的克隆与生物信息学分析[J];西北农业学报;2016年03期
2 谢珊珊;黄金;杨发龙;;绵羊肺炎支原体P109蛋白质分子特征、原核表达及其免疫反应性[J];江苏农业学报;2015年04期
3 冯旭飞;刀筱芳;张贤宇;李定霏;杨发龙;;绵羊肺炎支原体p128基因序列分析及原核表达[J];中国兽医杂志;2015年02期
4 刘文青;胡明丽;孙红岩;赵宝华;;绵羊肺炎支原体P30-HSP70C融合蛋白的表达及免疫原性研究[J];中国预防兽医学报;2014年11期
5 刘春英;李方正;;猪输卵管特异性糖蛋白结构与功能的生物信息学分析[J];中国畜牧兽医;2013年08期
6 杨发龙;张贤宇;汤承;岳华;;绵羊肺炎支原体P113蛋白C端重复区的表达及其免疫原性[J];中国兽医科学;2013年07期
7 张轩;赵萍;贺英;高鹏程;储岳峰;郑莹莹;逯忠新;;绵羊肺炎支原体的分离鉴定[J];动物医学进展;2013年06期
8 郝瑞霞;郝永清;徐春光;刘波;张超;;绵羊肺炎支原体的分离鉴定及培养特性的研究[J];内蒙古农业大学学报(自然科学版);2013年02期
9 费磊;岳华;汤承;;4种佐剂对绵羊肺炎支原体的免疫辅佐效力研究[J];中国畜牧兽医;2013年03期
10 许健;储岳峰;高鹏程;赵萍;贺英;剡根强;逯忠新;;绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)丙酮酸脱氢酶E1-α亚单位基因(pdha)的克隆、表达及其免疫学活性测定[J];农业生物技术学报;2012年03期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 刘聚祥;绵羊霉形体肺炎的流行特点与药物防治研究[D];中国农业大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 史斌;猪源肠道与呼吸道细菌的分离鉴定[D];河南科技大学;2013年
2 付琦;绵羊肺炎支原体PCR快速检测方法的建立及其P40蛋白的抗原性研究[D];河北农业大学;2008年
3 白永平;绵羊肺炎支原体的分离鉴定与敏感药物试验的研究[D];四川农业大学;2007年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 申玉建;方程;邱庆庆;司景磊;吴延军;杨祝良;杨秀荣;郭亚芬;蒋和生;;广西巴马小型猪PPARγ基因克隆及组织表达差异分析[J];南方农业学报;2017年10期
2 卢海亭;乔军;孟庆玲;彭叶龙;田路路;贡莎莎;才学鹏;陈创夫;;绵羊肺炎支原体多抗原表位基因MO-meAg15重组单增李斯特菌的构建及其免疫原性研究[J];西南农业学报;2017年09期
3 谢秀兰;额尔和花;黎帅;马小明;黎玉琼;李颖康;;宁夏不同绵羊品种中绵羊肺炎支原体的调查[J];中国兽医杂志;2017年06期
4 卢海亭;孟庆玲;乔军;彭叶龙;陈诚;田路路;贡莎莎;才学鹏;陈创夫;;绵羊肺炎支原体膜蛋白p74基因的克隆、分子特征及反应原性研究[J];西南农业学报;2017年05期
5 田路路;孟庆玲;乔军;陈诚;刘田莉;卢海亭;张星星;贡莎莎;才学鹏;陈创夫;;绵羊肺炎支原体多表位融合基因MO-meAg1的构建、表达及重组蛋白免疫原性分析[J];西北农业学报;2017年05期
6 刘佳升;余桃樱;刘宁;何克灿;王文华;和东华;李国华;杨燕;王艳芬;李红;李勇;李华春;赵德宏;姚俊;;规模养羊户山羊暴发边缘无浆体病的确诊[J];上海畜牧兽医通讯;2017年01期
7 沙丽东;李国华;余桃樱;杨燕;李春;王文华;刘宁;李华春;姚俊;;规模化山羊养殖场暴发绵羊无浆体病的诊断检测[J];上海畜牧兽医通讯;2016年06期
8 冯广余;杨铭伟;剡文亮;剡根强;;两种进口佐剂对绵羊肺炎支原体灭活疫苗免疫小鼠抗体水平影响的研究[J];黑龙江畜牧兽医;2016年23期
9 侯宏艳;惠文巧;张丹俊;胡晓苗;赵瑞宏;;绵羊肺炎支原体的培养和PCR鉴定[J];畜牧与饲料科学;2016年11期
10 张儒华;;综合防治羊传染性胸膜肺炎的建议[J];中国畜牧兽医文摘;2016年08期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 冷青文;盘羊和巴什拜羊MHC-DRB1、DRB3基因多态性与绵羊肺炎支原体感染相关性研究[D];石河子大学;2015年
2 徐春光;丝状支原体PG3株和绵羊肺炎支原体内蒙分离株基因组测序及可变表面脂蛋白基因克隆表达[D];内蒙古农业大学;2013年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 岳媛媛;豆酱中明串珠菌的分离筛选[D];沈阳农业大学;2017年
2 吴酩;绵羊肺炎支原体LY-1株分离鉴定及HSP70 P30基因克隆和序列分析[D];河南科技大学;2017年
3 贾丹丹;六神曲和百药煎炮制过程中微生物分离、鉴定与特性分析[D];中国医药工业研究总院;2016年
4 雷元元;牛支原体灭活疫苗的研究[D];宁夏大学;2016年
5 刘会胜;羊源弗氏柠檬酸杆菌的分离鉴定及其生物学特性研究[D];河南科技大学;2015年
6 马玉;新疆沙湾县绵羊支原体肺炎流行病学调查及分离株部分生物学特性研究[D];石河子大学;2015年
7 刘文青;绵羊肺炎支原体Y98 P26-P40和P26-HSP70C融合基因的表达及免疫原性研究[D];河北师范大学;2014年
8 毕崇亮;山东省山羊传染性胸膜肺炎抗体水平调查及病原分离鉴定[D];山东农业大学;2013年
9 石刚;牛支原体灭活疫苗佐剂的筛选与培养基的改良[D];石河子大学;2013年
10 张斯民;绵羊肺炎支原体甘油-3-磷酸氧化酶基因的克隆、表达及重组产物的纯化[D];宁夏大学;2013年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘文青;胡明丽;孙红岩;赵宝华;;绵羊肺炎支原体P30-HSP70C融合蛋白的表达及免疫原性研究[J];中国预防兽医学报;2014年11期
2 张双翔;程振涛;唐宇;冉隆仲;李涛;周碧君;文明;王开功;王慧;;绵羊肺炎支原体热休克蛋白Hsp70的生物信息学分析[J];中国畜牧兽医;2014年07期
3 张春香;郭云雁;白元生;杨子森;张国林;焦光月;任有蛇;;绵羊GPx5基因克隆、生物信息学分析及表达特性的研究[J];畜牧兽医学报;2014年07期
4 刘文青;范琼瑛;赵红艳;车腾飞;赵宝华;;绵羊肺炎支原体Y98 P26-P40融合基因的表达及免疫原性[J];中国兽医学报;2013年10期
5 张玲;郝永清;徐春光;黄海碧;张爱荣;;丝状支原体山羊亚种脂蛋白LPPA基因的定点突变及原核表达[J];畜牧与兽医;2013年10期
6 唐媛;李春花;张瑗;尚进;邹凌云;李立奇;;蛋白质的二级结构预测研究进展[J];现代生物医学进展;2013年26期
7 张贤宇;杨发龙;冯旭飞;王成龙;;绵羊肺炎支原体P113蛋白N端原核表达及其抗原性分析[J];中国兽医杂志;2013年07期
8 杨发龙;张贤宇;汤承;岳华;;绵羊肺炎支原体P113蛋白C端重复区的表达及其免疫原性[J];中国兽医科学;2013年07期
9 张双翔;周碧君;程振涛;文明;王开功;李泽民;王慧;崔亚兰;覃岚;;绵羊肺炎支原体LAMP检测方法的建立及初步应用[J];中国兽医学报;2013年03期
10 杨发龙;张焕容;汤承;岳华;;绵羊肺炎支原体p113基因的序列分析及功能预测[J];华南农业大学学报;2013年01期
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