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《河南农业大学》 2010年
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猕猴桃、枣高效再生体系的建立及农杆菌介导的遗传转化研究

尚霄丽  
【摘要】:猕猴桃(Actinidia)果实风味独特,营养丰富,被誉为“水果之王”。枣(Zizyphus jujuba Mill.)是我国第一大干果树种。猕猴桃属雌雄异株,遗传背景复杂;枣花蕾小、自然坐果率低、胚败育率高等因素,传统杂交育种方法存在周期长、效率低等问题,获得优质多抗的猕猴桃、枣新品种困难重重。基因工程的发展为猕猴桃、枣的育种工作开辟了一条新的途径。 本研究以河南特异红果肉猕猴桃资源中华猕猴桃‘伏牛95-2’(Actinidia chinensis'Funiu95-2')为材料,建立了中华猕猴桃‘伏牛95-2’高效再生体系、遗传转化体系,且获得了转抗菌肽D基因的转基因植株,PCR检测、Southern杂交检测证明外源基因已整合到猕猴桃基因组中。灰枣遗传转化研究,本试验以灰枣(Zizyphus jujuba 'Huizao')为材料建立了灰枣组培快繁体系、叶片直接再生体系及对灰枣遗传转化进行了初步探讨。主要结果如下: 1.以中华猕猴桃‘伏牛95-2’叶片为外植体,探讨了不同植物生长调节物质对叶片再生不定芽增殖及生根的影响,建立了高效的再生体系。结果表明,叶片外植体在MS+ZT1.0mg/L+ NAA 0.3mg/L培养基上,不定芽分化率最高为87.5%;在MS+ 6-BA 2.0 mg/L+NAA0.5mg/L培养基中,不定芽增殖系数最高为4.2;适宜不定芽生根培养基为1/2MS+NAA2.0mg/L,生根率为100%。 2.以中华猕猴桃‘伏牛95-2’叶片为外植体,研究了抗生素对外植体生长的影响。结果表明,中华猕猴桃‘伏牛95-2’对卡那霉素较敏感,浓度20mg/L时愈伤组织及不定芽分化率均为0,20mg/L为中华猕猴桃‘伏牛95-2’叶片遗传转化时筛选最佳浓度;生根培养基中附加30mg/L卡那霉素时,则完全抑制根的形成。头孢霉素和羧苄青霉素对中华猕猴桃‘伏牛95-2’叶片分化均有抑制作用,但头孢霉素对叶片分化的抑制作用比羧苄青霉素小;结合遗传转化中的抑菌试验,选用400mg/L头孢霉素为中华猕猴桃‘伏牛95-2’遗传转化中适宜抑菌抗生素及浓度。 3.以中华猕猴桃‘伏牛95-2’叶片作为根癌农杆菌介导的受体材料,建立了高效遗传转化体系。结果表明,叶片预培养3天,菌液浓度OD600值为0.3,真空渗入方式侵染10 min,共培养4天条件下,GUS基因瞬时表达率最高,达到92.2%。对转基因抗性植株进行PCR检测和GUS组织化学染色,初步证明外源基因已整合到中华猕猴桃‘伏牛95-2’的基因组中。 4.以中华猕猴桃‘伏牛95-2’叶片为外植体进行遗传转化,对共培养后抗性芽的筛选方式进行了研究,并对获得的转抗菌肽D基因的抗性植株进行了分子生物检测。结果表明,逐步提高卡那霉素选择压力与保持卡那霉素选择压力不变相比,抗性芽获得率提高了28.4%;部分抗性植株经PCR、PCR-Southern、Southern杂交检测,外源基因已整合至猕猴桃基因组中。 5.以灰枣一年生枣头茎段为材料,对启动培养时抗生素对污染的抑制,不同植物生长调节物质对茎段启动、不定芽增殖及生根的影响进行了研究。结果表明,大田采样时,以70%酒精灭菌30s,再以0.1%HgCl2灭菌10~15min后污染率依然高达97.8%;培养基中添加150mg/L或200mg/L头孢霉素可使污染率降为0;茎段接种于MS+KT 2.0 mg/L+NAAO.lmg/L培养基中获得的粗壮枣头较多。茎段萌发的腋芽接种于Ms+KT2.0 mg/L+NAA0.3 mg/L培养基中,枣苗长势壮、叶片大、叶深绿;而接种于Ms+6-BA2.0 mg/L+NAA0.3 mg/L培养基中,组培苗较弱,增殖系数较高为2.7。将继代增殖的再生芽接种在生根培养基上诱导生根,最佳的生根培养基为1/2MS+NAA0.5mg/L,培养40d时生根率达95.56%。 6.以灰枣组培苗叶片为材料,研究了不同叶片来源、碳源、叶片放置方式、暗培养时间、乙烯抑制剂等处理对叶片再生的影响。结果表明,叶片直接再生不定芽的适宜培养基为WPM +TDZ 0.5mg/L+NAA0.2mg/L;最佳叶片来源为灰枣组培苗中部平展,大而厚叶片;近叶柄处再生率比近叶尖处高59.74%;以远轴面接触培养基叶片再生率较高为69.61%;蔗糖浓度为40g/L可降低再生芽的玻璃化程度;叶片暗培养时间以10d叶片再生率较高为81.6%;0.5mg/L AgNO3和0.1 mg/L的STS均提高了灰枣叶片再生率,再生率分别为82.25%,91.26%。 7.以灰枣叶片为受体,研究了卡那霉素对叶片再生的影响、头孢霉素的抑菌效果及不同共培养时间对转化率的影响。结果表明,当灰枣叶片再生培养基中添加40mg/L卡那霉素能抑制不定芽的分化,40mg/L为灰枣遗传转化中的临界浓度;不同头孢霉素抑菌浓度效果差异明显,高浓度的头孢(大于等于500mg/L)才能抑制农杆菌的生长;灰枣遗传转化中,共培养时间应较短2d能获得较高转化率21.1%;对获得的灰枣转化植株叶片进行组织化学染色分析发现,叶片叶脉为蓝色,初步确定外源基因已转入灰枣基因组中。
【学位授予单位】:河南农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S663.4;S665.1

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘静;张元湖;刘庆忠;高玉娇;;抗生素对青香蕉苹果叶片再生的影响[J];山东农业科学;2009年07期
2 平秀敏;田敏;李纪元;段红平;;红星凤梨组织培养与快速繁殖[J];安徽农学通报;2008年23期
3 魏海霞;冯涛;王恒振;祝军;戴洪义;;农杆菌介导的Vf基因转化柱型苹果的研究[J];安徽农业科学;2007年14期
4 张喜春;吴绛云;;狗枣猕猴桃叶片植株再生及无性系快速繁殖[J];北方园艺;1990年09期
5 田永亮,张文,张国珍,马会勤;两种抗生素对葡萄组培中污染菌的抑制作用[J];北方园艺;2005年05期
6 罗晓芳,田砚亭,李云,牛辰;金丝小枣组织培养快速繁殖的研究[J];北京林业大学学报;1996年02期
7 赵锦,代丽,刘孟军;水培方法在枣无菌繁殖系外植体建立中的应用[J];河北农业大学学报;2005年05期
8 管志文,张清杰,庄楚雄,黄自然,谭智达,孔令汶, 陈爱玉,倪国孚;农杆菌携带柞蚕抗菌肽基因转入桑树的研究[J];蚕业科学;1994年01期
9 赵东,刘祖生,陆建良,钱利生,屠幼英,奚彪;根癌农杆菌介导茶树转化研究[J];茶叶科学;2001年02期
10 杜雪玲,张振霞,余如刚,符义坤;植物组织培养中的污染成因及其预防[J];草业科学;2005年01期
中国硕士学位论文全文数据库 前8条
1 段乃彬;枣树茎段与胚培养技术体系的研究[D];四川农业大学;2002年
2 王顺才;Mn-SOD基因转化猕猴桃(Actinidia deliciosa)的研究[D];西北农林科技大学;2004年
3 孟辉;沾化冬枣基因工程改良的基础研究[D];山东大学;2005年
4 刘淑芳;抗生素对梨叶片不定梢诱导的影响研究[D];四川农业大学;2005年
5 王梅;草莓叶片不定芽发生及抗生素及其影响的研究[D];四川农业大学;2005年
6 李广羽;碧香无核葡萄离体再生系统建立的研究[D];东北师范大学;2006年
7 赵薇;枣组织培养技术体系的建立[D];河北农业大学;2007年
8 郑晶晶;草莓转基因再生体系的建立及早花基因PcFT的转化[D];华中农业大学;2008年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 孙清荣,樊圣华,刘庆忠;大鸭梨叶片高频率不定梢再生诱导研究[J];山东农业科学;2003年02期
2 王照红,于振博,杜建勋,孙日彦,梁明芝;桑树保护研究的现状及展望[J];山东农业科学;2005年01期
3 郑红军;刘庆忠;;樱桃离体培养研究进展[J];山东农业科学;2005年06期
4 王照红;衣葵花;周象海;杜建勋;孙日彦;李竹林;;几种药物抑制桑树组培苗褐化的研究[J];山东农业科学;2008年07期
5 刘静;张元湖;刘庆忠;高玉娇;;抗生素对青香蕉苹果叶片再生的影响[J];山东农业科学;2009年07期
6 王妍;李宪利;孙清荣;周广芳;;酸枣与西吕枣诱导生根比较[J];山东农业科学;2009年09期
7 魏国芹;戴洪义;孙玉刚;梁美霞;安淼;;榅桲离体培养繁殖的研究[J];山东农业科学;2010年01期
8 刘媛媛;张春庆;吴承来;;LeJA2基因沉默表达载体导入番茄转化系统的建立[J];山东农业科学;2010年02期
9 唐桂英;柳展基;单雷;;花生子叶不定芽的诱导和组织细胞学观察[J];山东农业科学;2011年02期
10 孙洪雁;孙清荣;单公华;刘庆忠;周广芳;;鲁枣1号组织培养和植株再生体系研究[J];山东农业科学;2012年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 黄月琴;薛建平;;植物抗病分子机制及抗病基因工程研究进展[A];现代农业理论与实践——安徽现代农业博士科技论坛论文集[C];2007年
2 刘建福;李雪;王明元;黄雨花;范燕萍;;‘飞来凤'蔓绿绒的组织培养与快速繁殖[A];中国观赏园艺研究进展2011[C];2011年
3 李桂君;宋嘉隆;吴捷;;葛枣猕猴桃组培繁殖的研究[A];创新生物经济环境,培育战略新兴产业——第四届中国生物产业大会·2010海峡两岸重大生物技术产业化论坛会刊[C];2010年
4 王典;王加启;卜登攀;周凌云;;绿色饲料添加剂抗菌肽的作用机理及其应用前景[A];首届中国奶业大会论文集(上册)[C];2010年
5 黄自然;张卫民;黄亚东;;蚕抗菌肽研究开发三十年的回顾与展望[A];格莱姆抗菌肽——抗菌肽开发与应用技术研讨会论文集[C];2009年
6 郭倩倩;姜三杰;梁哲;张占路;侯学瑛;唐益雄;吴燕民;;禽流感转基因植物可饲用疫苗的研究[A];新型疫苗研发及基因工程疫苗应用研讨会论文集[C];2010年
7 郭倩倩;姜三杰;张占路;吴燕民;;利用MAR元件提高禽流感血凝素基因在百脉根中表达的研究[A];2011新型疫苗与抗体创制关键技术及质量控制研讨会论文集[C];2011年
8 张鹤龄;;我国马铃薯品质改良,抗真菌细菌病害基因工程进展[A];中国马铃薯学术研讨会与第五届世界马铃薯大会论文集[C];2004年
9 程林梅;孙毅;任永玲;;转基因耐盐植物研究进展[A];作物逆境生理研究进展——中国作物生理第十次学术研讨会文集[C];2007年
10 尹钧;任江萍;李志岗;李磊;周苏玫;卫丽;宋丽;;转基因抗穗发芽小麦的获得[A];中国作物学会2007年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王延秀;浓缩单宁合成的分子调控及紫花苜蓿遗传转化研究[D];甘肃农业大学;2010年
2 李丽;运动相关基因与越野滑雪选材关联性研究及枣黄饮对运动能力影响的实验研究[D];黑龙江中医药大学;2010年
3 田娜;农杆菌介导的猕猴桃遗传转化及AtNHX1转化植株抗盐性分析;拟南芥At4G12490基因对逆境的抗性功能研究[D];西北大学;2010年
4 何影;引入甘氨酸甲基化合成甜菜碱途径提高黑麦草抗旱性研究[D];山东大学;2010年
5 张锦伟;水稻根系发育调控基因OsGLU3的克隆与功能研究[D];浙江大学;2010年
6 陈少瑜;丽江云杉体胚发生体系优化及体胚发育过程蛋白质组分析[D];云南大学;2010年
7 何富强;核桃LFY同源基因的克隆和表达[D];河北农业大学;2011年
8 关正君;樱桃番茄的HBsAg基因转化及其突变体特性研究[D];西北大学;2011年
9 刘媛;三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)cDNA文库构建、EST分析及抗脂多糖因子研究[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2011年
10 冯守千;红梨着色机理的研究[D];山东农业大学;2011年
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1 张庆福;枳精氨酸脱羧酶基因(PtADC)转化烟草提高抗脱水研究[D];华中农业大学;2010年
2 张帆;dsRNA介导的番木瓜环斑病毒(PRSV)的抗病性研究[D];华中农业大学;2010年
3 魏礼玲;MYB转录因子家族相关EST干涉载体构建及遗传转化的研究[D];华中农业大学;2010年
4 刘冉冉;枫香遗传转化体系的优化及转化PaFT基因的研究[D];华中农业大学;2010年
5 梁梅荣;澳大利亚扇子花Scaevola nitida R.Br的组织培养研究[D];华中农业大学;2010年
6 卢小三;两个杨树无性系再生体系的建立及抗虫基因Cry1C+9C转化的初步研究[D];华中农业大学;2010年
7 雷樊登;茶树离体增殖与再生体系的建立[D];安徽农业大学;2010年
8 张鲁军;离子束诱导普通小麦小偃81 HMW-GS 1Ax1缺失突变家系突变机制研究[D];郑州大学;2010年
9 刘无双;拟南芥种子特异表达基因启动子分析[D];山东农业大学;2010年
10 刘建民;“复瓣玫瑰红”蔷薇的快繁技术研究[D];山东农业大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 孙清荣,樊圣华,刘庆忠;大鸭梨叶片高频率不定梢再生诱导研究[J];山东农业科学;2003年02期
2 高凤菊,戴忠民,崔光泉,朱金英;多效唑在无核金丝小枣组织培养中的应用研究[J];山东农业科学;2004年04期
3 李庆芝;尚志华;房玉洁;李玲;;姜基因转化系统的建立及优化[J];山东农业科学;2006年03期
4 张海燕;张立明;王庆美;邢同胜;李爱贤;侯夫云;董顺旭;;甘薯耐盐性及遗传转化研究进展[J];山东农业科学;2007年02期
5 刘源霞;兰进好;杜景平;孙洪岩;;转基因玉米研究进展[J];山东农业科学;2007年06期
6 刘祥林,汤浩茹;桃胚培养及遗传转化的研究进展[J];安徽农业科学;2005年06期
7 腊平,蔡文启,方荣祥;香蕉束顶病毒基因组I的克隆及序列分析[J];病毒学报;2000年02期
8 肖火根,李华平,范怀忠;香蕉束顶病毒基因克隆和序列分析[J];病毒学报;1999年01期
9 郑亚杰,高玉江;公四莓一号草莓组织培养快繁技术研究[J];北方果树;2004年06期
10 王震星,张磊;枣花药培养再生植株及其染色体倍性研究[J];北方果树;1998年02期
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1 张志宏;苹果叶片离体再生不定芽及遗传转化的研究[D];沈阳农业大学;1996年
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1 潘学军;无核抗病葡萄胚挽救育种的研究[D];西北农林科技大学;2002年
2 张素勤;非洲菊(Gerbera jamesonii Bolus)离体快速繁殖体系的研究[D];西北农林科技大学;2002年
3 秦玲;苹果(Malus domestica Borkh)遗传转化体系的建立及ipt基因的导入[D];西北农林科技大学;2002年
4 王建湘;草莓组织培养叶片再生技术研究[D];湖南农业大学;2004年
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1 贾丽娥;张欣;吴传银;万建民;;农杆菌介导籼稻遗传转化研究的进展及策略[J];中国农业科技导报;2011年04期
2 刘会超;刘孟刚;郭丽娟;贾文庆;;农杆菌介导的SeNHX1基因转化月季愈伤组织的研究[J];林业科学研究;2010年04期
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4 刘文萍;卢淑雯;刘建新;南相日;柳景兰;李柱刚;;农杆菌介导的BnCS基因对黄瓜遗传转化研究[J];北方园艺;2009年01期
5 李艳;梁炫强;;花生细胞工程与遗传转化研究进展[J];花生学报;2005年04期
6 王凤华;李光远;陈双臣;吴莹莹;刘保国;;农杆菌介导的茄子愈伤组织遗传转化研究[J];河南农业大学学报;2009年04期
7 李海萍;张鲁刚;胥宇建;范爱丽;;萝卜遗传转化体系的建立[J];中国瓜菜;2011年04期
8 江一北;李政;林晓露;陈凌;李凌;;农杆菌介导的美洲商陆抗病毒蛋白基因对非洲菊遗传转化研究[J];西南师范大学学报(自然科学版);2010年03期
9 邢宇俊;季勤;张云峰;杨清;;根癌农杆菌介导的甘薯遗传转化研究进展[J];安徽农业科学;2007年24期
10 王蕊;张东向;张磊;;黄芩的组织培养及遗传转化研究[J];高师理科学刊;2007年06期
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1 黄敏仁;许农;;林木遗传转化研究进展[A];中国林木遗传育种进展[C];1991年
2 张碧玉;刘旭;李玲;;AhNAC3基因在烟草中的遗传转化研究[A];广东省植物学会第十九期学术研讨会论文集[C];2010年
3 李名杨;徐淳;;农杆菌介导的荔枝细胞遗传转化研究[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年
4 刘海坤;卫志明;;大豆遗传转化研究进展[A];中国植物生理学会第九次全国会议论文摘要汇编[C];2004年
5 陈红岩;高毅;杜海莲;郑文竹;张军;夏宁邵;;乙肝病毒表面抗原基因在花生中的遗传转化研究[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
6 赖家业;刘凯;石海明;白林含;尹承颖;韦鹏霄;岑秀芬;罗荡平;;尾叶桉无性系3228遗传转化体系建立的初步研究[A];第三届南方林木育种研讨会论文(摘要)集[C];2006年
7 韩伟;何晓明;刘娥娥;谢大森;彭庆务;王亚琴;;节瓜子叶培养和遗传转化研究[A];庆祝中国园艺学会创建80周年暨第11次全国会员代表大会论文摘要集[C];2009年
8 朱木兰;卫志明;;农杆菌介导的杉木遗传转化体系的建立[A];2007中国植物生理学会全国学术会议论文摘要汇编[C];2007年
9 高毅;陈红岩;杜海莲;张军;夏宁邵;;乙肝病毒表面抗原基因在樱桃番茄中的遗传转化研究[A];中国生物化学与分子生物学会第八届会员代表大会暨全国学术会议论文摘要集[C];2001年
10 夏阳;燕丽萍;梁惠敏;;苜蓿再生体系建立及根癌农杆菌介导的遗传转化研究[A];全国“植物生物技术及其产业化”研讨会论文摘要集[C];2007年
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1 解悦;南京“生态草坪”被北京奥组委相中[N];中国花卉报;2007年
2 漆国桢;探寻灰枣高产的奥秘[N];兵团日报(汉);2010年
3 任道义 翟海林;中原灰枣落户西北[N];中国特产报;2002年
4 李太宇;晋棉38棉花[N];河南科技报;2006年
5 本报记者 张慧疆;若羌发“红头文件”保护红枣品牌[N];巴音郭楞日报;2008年
6 通讯员 宋应华 特约记者 周莉;我区各地认真做好红枣接穗收集、贮备工作[N];喀什日报(汉);2007年
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8 王田利 王新科;旱作灰枣早产丰产栽培[N];陕西科技报;2006年
9 许芹;丰乐种业构建人才高地[N];农民日报;2001年
10 广东省科技厅农村处 黄江康 中国科学院华南植物研究所 王亚琴;我国转基因植物研究进展情况[N];广东科技报;2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 尚霄丽;猕猴桃、枣高效再生体系的建立及农杆菌介导的遗传转化研究[D];河南农业大学;2010年
2 王延秀;浓缩单宁合成的分子调控及紫花苜蓿遗传转化研究[D];甘肃农业大学;2010年
3 马丽;玉米矮花叶病毒基因遗传转化研究[D];山东农业大学;2007年
4 韩德俊;甘蓝型油菜再生体系与农杆菌介导的甜菜碱合成基因遗传转化研究[D];西北农林科技大学;2005年
5 贾海燕;小麦组织培养特性的分子遗传分析及遗传转化体系研究[D];南京农业大学;2007年
6 王忆;苹果再生体系建立与MxIrt1基因功能的初步研究[D];中国农业大学;2005年
7 马欣荣;根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)介导的多年生黑麦草(Lolium perenne L.)遗传转化[D];四川大学;2006年
8 胡桂兵;PSP驱动CAPD基因的植物表达载体构建及在果树中的遗传转化研究[D];浙江大学;2006年
9 刘德春;枳PtrICE1、PtrHOS1和PtrLOS2基因克隆及PtrICE1遗传转化研究[D];华中农业大学;2010年
10 刘成洪;查尔酮合成酶等黄酮代谢基因的克隆及短葶飞蓬遗传转化研究[D];第二军医大学;2005年
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1 吴玉;番茄Sl-EBF2基因的克隆及遗传转化研究[D];重庆大学;2010年
2 张娅君;枣成熟胚离体培养及农杆菌介导叶片与胚遗传转化研究[D];河南农业大学;2012年
3 刘昭军;农杆菌介导的大豆遗传转化研究[D];东北农业大学;2001年
4 黎亚丽;蚯蚓金属硫蛋白基因对烟草的遗传转化研究[D];河北大学;2011年
5 吴大强;农杆菌介导sbe Ⅱb基因RNA干涉片段转化玉米自交系的研究[D];安徽农业大学;2008年
6 王丹;农杆菌介导TCS基因转入山新杨的遗传转化研究[D];东北林业大学;2009年
7 李淑艳;农杆菌介导铁载体基因IRT1转化八棱海棠的研究[D];南京农业大学;2008年
8 吴薇;PtSnRK基因的遗传转化研究[D];南京林业大学;2010年
9 徐艳;人工miR159介导的番茄抗黄瓜花叶病毒遗传转化研究[D];浙江理工大学;2011年
10 於维维;番茄中BR相关基因的遗传转化研究[D];浙江大学;2005年
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