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《河南农业大学》 2001年
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抗网状内皮增生症病毒的单克隆抗体制备、鉴定及临床应用

叶中德  
【摘要】: 为了研制出商品化的网状内皮增生症(RE)检测试剂盒,用于对网状内皮增生症病毒(REV)感染的诊断,监测,种鸡群的净化,和进出口检疫。我们制备了鸡抗REV多抗,并建立了检测REV的方法,同时,制备了REV特异性单抗,并用于临床上疑似REV感染的鸡群检查,显示了良好效果。 利用96孔板免疫荧光技术测定了REV的细胞半数感染量(TCID_(50))。通过腹腔或静脉注射10~5TCID_(50)/ml病毒的7—10周龄鸡,3周后ELISA抗体效价达1:3200以上。同时,建立了ELISA诊断方法,确定了各反应参数。其中,抗原工作浓度为1:320(6.5ug/ml),鸡抗血清工作浓度为1:1600,兔抗鸡IgG酶标(HRP)工作浓度为1:800。 将标准网状内皮增生症病毒REV—DIA经纯化后免疫BaLb/C小鼠取免疫鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接免疫荧光(IFA)筛选,挑选强阳性孔进行亚克隆,获得了3株能稳定分泌抗网状内皮增生症病毒的单克隆抗体(REV—McAb)的杂交瘤细胞株,分别命名为C_(18)、D_(31)、G_5,经体外连续传代及反复冻存复苏,杂交瘤细胞均能稳定地分泌McAb,抗体对热稳定性良好。培养上清及小鼠腹水IFA效价分别为10~(-2)—10~(-3)和10~(-4)-10~(-5),各株分泌的McAb不与MDV和ALV发生交叉反应。免疫荧光细胞中和试验显示C_(18)、D_(31)有中和活性。相加ELISA和Western blotting测定证实,C_(18)、D_(31)特异性作用相同抗原位点或作用相关极为密切的抗原位点,而与G_5作用位点不相关。 采集某疑为REV感染鸡病料,分离病毒经鸡胚肾细胞(CEK)传代三次做成细胞超薄切片电镜下发现了REV粒子。同时将病毒回归1日龄小鸡,用单克隆抗体介导的ELISA和免疫荧光(IFA)实验。检出感染鸡和回归样品阳性率为100%,该单克隆抗体的价值在临床上得到了证实。
【学位授予单位】:河南农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:S852.5

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 郁晓岚,徐福南,蔡宝祥,陈溥言;禽网状内皮组织增殖病的组织病理学和超微结构的动态变化[J];南京农业大学学报;1989年02期
2 郭春祥,郭锡琼;介绍一种简单、快速、高效的辣根过氧化物酶标记抗体的过碘酸钠法[J];上海免疫学杂志;1983年02期
3 刘苏燕,董邦全,李恩善;分析不同单克隆抗体识别的表位特异性的三种ELISA方法比较[J];上海免疫学杂志;1991年02期
4 叶群瑞,陈伯权,吴美英;一种简单、快速、量大的辛酸纯化单克隆抗体法[J];生物化学与生物物理进展;1991年01期
5 何勇群,张中直,杨汉春;北京地区鸡群网状内皮组织增殖病感染的血清学调查研究[J];畜牧兽医学报;1998年01期
6 崔治中;朱承如;孙怀昌;;禽白血病及禽网状内皮细胞增生病感染情况的调查[J];中国畜禽传染病;1987年01期
7 何宏虎;陈溥言;蔡宝祥;;禽网状内皮组织增殖病病毒的分离鉴定[J];中国畜禽传染病;1988年02期
8 庄景新;蔡宝祥;陈溥言;;ABC-ELlSA技术在禽网状内皮组织增殖病抗体检测上的应用[J];中国畜禽传染病;1990年01期
9 杜元钊,吴延功,朱万光,刘佩兰,王玉东,王永玲,曲志娜,仰惠芬;从表现腺胃炎的病鸡中分离到1株网状内皮增生症病毒[J];中国兽医学报;1999年05期
10 廖明;张春红;丘鹤英;;家畜免疫学基础学知识[J];中国兽医杂志;1996年07期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 马秀丽;冯涛;于可响;王春玲;宋敏训;;几种提纯鸭病毒性肝炎血清免疫球蛋白G方法的比较[J];山东农业科学;2007年01期
2 崔林开;叶华智;;3种ELISA法检测Bt杀虫蛋白的比较研究[J];安徽农业科学;2005年11期
3 冯挺财;邵谱;胡珩;杨正涛;张乃生;;牛乳铁蛋白直接竞争ELISA检测法的建立[J];安徽农业科学;2008年18期
4 钟汉燊;3477例血清甲胎蛋白酶标电泳测定报告[J];癌症;1989年01期
5 肖真,曹守箴,张忠广,刘涛,余姣;斑点酶联免疫吸附试验检测阴道毛滴虫抗体的研究[J];青岛医学院学报;1992年01期
6 张小四,李松岗,许崇任,赵建周,赵奎军;转Bt棉不同生长期及不同器官杀虫蛋白表达量的免疫学方法测定[J];北京大学学报(自然科学版);2000年04期
7 邢艳,廖英,陈曼玲;酶受体分析法测定3AO细胞LH/hCG受体结合特性[J];标记免疫分析与临床;2005年01期
8 李和,于劼,肖小璞,王海龄;人血浆蛋白C的酶联免疫测定法的建立[J];中国输血杂志;1995年01期
9 马政辉;张丽芸;刘莹;陈政良;;人血清白蛋白单克隆抗体的制备、鉴定与初步应用[J];中国输血杂志;2010年05期
10 王立岩,刘玉萍,朱凤全,张为远;人胎盘泌乳素酶联免疫方法的建立及其应用[J];白求恩医科大学学报;1999年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 庄金秋;毕研丽;梅建国;王金良;苗立中;沈志强;;应用PCR法检测禽源生物制品中禽网状内皮组织增生症病毒[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
2 刘思当;柴家前;谭勋;崔治中;宁章勇;;禽网状内皮组织增殖病病鸡淋巴器官的病理变化[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十一次兽医病理学、第十次动物病理生理学学术研讨会论文集[C];2001年
3 刘思当;商营利;赵德明;;ALV-J与REV混合感染免疫抑制机理的研究[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十三次学术讨论会和中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十二次学术讨论会论文集[C];2005年
4 张加力;刘义波;;抗猪囊尾蚴头节单克隆抗体的制备[A];吉林省畜牧兽医学会2007学术年会论文集[C];2007年
5 杨娟;何召庆;;禽网状内皮组织增生病病毒检测方法研究进展[A];首届中国兽药大会——兽医生物制品学、兽医微生物学学术论坛论文集(2008)[C];2008年
6 冯秀丽;刘青涛;韩佳丽;王千菊;杨保收;;网状内皮组织增殖病病毒疫苗保护剂稳定性试验[A];首届中国兽药大会——兽医生物制品学、兽医微生物学学术论坛论文集(2008)[C];2008年
7 孙淑红;柴家前;王波;孙洪磊;王晓云;崔治中;;表现腺胃炎的蛋用型鸡J亚群-白血病病毒的分离与鉴定[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会鸡淋巴白血病防控技术研讨会论文集[C];2010年
8 张志;崔治中;姜世金;;从J亚群禽白血病肿瘤中检测出禽网状内皮组织增生症病毒[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会鸡淋巴白血病防控技术研讨会论文集[C];2010年
9 张洪海;成子强;;禽肿瘤性疾病世界流行现状及分析[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会鸡淋巴白血病防控技术研讨会论文集[C];2010年
10 史伟伟;刘红波;徐成刚;辛朝安;曹伟胜;;禽网状内皮增殖病病毒GD1007株的分离与鉴定[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 赵冬敏;B亚群禽白血病病毒分离株的生物学特性[D];山东农业大学;2010年
2 孙亚妮;免疫组织化学技术在鸡三种病毒性肿瘤病鉴别诊断中的应用[D];山东农业大学;2011年
3 邱玉玉;A亚群禽白血病病毒单克隆抗体的制备和不同亚群禽白血病病毒共感染相互影响的研究[D];山东农业大学;2011年
4 邓小芸;网状内皮组织增生症病毒LAMP检测方法及感染性分子克隆的建立[D];东北农业大学;2011年
5 姜世金;Ⅰ型马立克氏病病毒pp38和pp24基因的表达及序列测定与分析[D];中国农业大学;2003年
6 邢艳;hCG对人卵巢癌3AO细胞增殖凋亡的影响及其与LH/hCG受体的关系的研究[D];四川大学;2003年
7 张志;我国近年来马立克氏病病毒野毒株分子流行病学和生物学特性的研究[D];山东农业大学;2004年
8 沈红;抗磺胺药抗体的制备与免疫分析法的研究[D];中国农业大学;2005年
9 王玉;网状内皮组织增生症病毒的分子流行病学调查及其在宿主免疫选择压下的分子变异[D];山东农业大学;2005年
10 胡巍;丙型肝炎病毒NS3蛋白酶及抑制肽研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
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1 颜赟;鸡免疫抑制性病毒共感染的流行病学调查[D];山东农业大学;2010年
2 孙洪磊;整合禽网状内皮组织增生病病毒基因的鸡痘病毒分子生物学鉴定及致病机理研究[D];山东农业大学;2010年
3 郭文龙;规模化肉鸡场主要免疫抑制性疫病的分子流行病学调查及传播特点分析[D];山东农业大学;2010年
4 吴萍萍;四种蛋传性病毒病多重PCR检测方法的建立[D];安徽农业大学;2010年
5 李忠信;FLAG标签单克隆抗体的制备、鉴定与应用研究[D];河南工业大学;2010年
6 李兆学;人红细胞单链抗体的制备与血凝试验方法的初步建立[D];河南工业大学;2010年
7 李子平;牛附红细胞体特异性抗原制备及双抗体夹心ELISA诊断方法的建立[D];中国农业科学院;2010年
8 尹青;蛋用型鸡禽白血病的病毒感染动态及病理学研究[D];山东农业大学;2011年
9 王鑫;不同来源纤维肉瘤的鉴别诊断及人工致病试验[D];山东农业大学;2011年
10 张振杰;皖南黄肉种鸡ALV-J与REV的共感染及其分子变异分析[D];山东农业大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前4条
1 吴延功,潘杰彦,杜元钊,朱万光;传染性腺胃炎病原学研究进展[J];动物医学进展;1999年01期
2 郭锡琼;郭春祥;董丽英;侯杰;;酶免疫法检测乙型肝炎e抗原[J];上海医学;1982年10期
3 王玉东,王永玲,张子春,范根成,蒋贻海,刘相娥,丁江,王树双;鸡腺胃型传染性支气管炎病毒(QX IBV)的分离和鉴定[J];中国动物检疫;1998年01期
4 何宏虎;陈溥言;蔡宝祥;;禽网状内皮组织增殖病病毒的分离鉴定[J];中国畜禽传染病;1988年02期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杨肯牧;;禽白血病和网状内皮增生症的防治[J];湖南农业;2010年10期
2 王群义,李彬,刘东,郇秀荣,刘平,范根成,杜元钊;鸡传染性贫血病和网状内皮增生症混合感染的调查报告[J];中国禽业导刊;2004年20期
3 杜元钊,吴延功,朱万光,刘佩兰,王玉东,王永玲,曲志娜,仰惠芬;从表现腺胃炎的病鸡中分离到1株网状内皮增生症病毒[J];中国兽医学报;1999年05期
4 陈溥言,杜念兴;微量双板荧光法——一种新的病毒克隆的简易方法[J];南京农业大学学报;1988年01期
5 郝婵娟,柴宝峰,王伟,孙毅,梁爱华;烟草天蛾几丁质酶的表达、纯化及多克隆抗体制备[J];昆虫学报;2005年03期
6 潘丽晶;李朝飞;尹崇;吕雷;庞义;;杆状病毒SpltMNPV gp41基因的克隆、表达及抗体制备[J];农业生物技术学报;2004年06期
7 喻华英,高丰,王景林;成熟志贺毒素A亚单位(ShT-A)全长与截短片段在E.coli中的表达及多抗制备[J];中国兽医学报;2005年06期
8 赵庆国;周煜;朱恒奇;卢柏松;黄培堂;;小鼠FANCL抗体制备及组织表达谱分析(英文)[J];遗传学报;2006年01期
9 杨振华;陶攀;周思榆;吴叔文;潘兹书;;H5N1亚型禽流感病毒神经氨酸酶的表达及抗体制备[J];武汉大学学报(理学版);2007年04期
10 郑梅竹;潘风光;邹亚学;孙莹;崔文璟;张玉静;;马立克氏病病毒L-meq基因的原核表达及多克隆抗体的制备[J];中国兽医学报;2007年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 陈明亮;张桂英;;网状型血管内皮瘤1例[A];2008全国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2008年
2 陈平汉;丁祖荣;王勇;;网状血管计算机模拟分析[A];第七届全国生物力学学术会议论文集[C];2003年
3 边传周;;家禽病毒性免疫抑制疾病的鉴别诊断及防治[A];河南省畜牧兽医学会第七届理事会第二次会议暨2008年学术研讨会论文集[C];2008年
4 张桂英;肖嵘;陆前进;苏玉文;文海泉;;网状型血管内皮瘤1例[A];中华医学会第14次全国皮肤性病学术年会论文汇编[C];2008年
5 胡东艳;;皱折部网状色素异常一例[A];2003中国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2003年
6 王磊;李建喜;张景艳;杨志强;王学智;张凯;孟嘉仁;;喹乙醇单克隆抗体制备中细胞融合条件的筛选[A];中国毒理学会第三届中青年学者科技论坛暨2011年全国前列腺药理毒理学研讨会论文集[C];2011年
7 董青;单保恩;陈兴;董金琢;马洪;;抗Syk抗体制备和检测[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年
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1 王桂香;鸡发生网状内皮增生病咋办[N];河南科技报;2008年
2 ;设备联网状态可读[N];中国计算机报;2002年
3 吕斌;皮肤为何有网状青纹[N];大众卫生报;2004年
4 周建华;如何选择屏蔽方式[N];中国计算机报;2002年
5 北京大学医学博士 赵承渊;1906:网状理论与神经元理论之辩[N];东方早报;2011年
6 广西大学 韦平 阳秀英;家禽免疫抑制性疾病的危害及其防制策略[N];中国畜牧兽医报;2006年
7 记者 于洪涛 通讯员 王玎;一点触及 全网联动[N];人民邮电;2003年
8 广西 梁越;自制MMDS圆网状抛物面天线[N];电子报;2001年
9 周宇飞;产业链网状集聚:县域工业小区开发的创新模式[N];中国信息报;2003年
10 秦卓明 何叶峰 郭新栋;对控制疫病策略的思考[N];中国畜牧报;2003年
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1 张福明;网状分枝扩增技术检测EB病毒基因的方法建立及临床应用研究[D];吉林大学;2004年
2 吴汉林;人NIT1基因cDNA的克隆、原核表达及抗体制备[D];四川大学;2005年
3 张敏敏;人Hedgehog信号通路配体SHH的N末端蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备[D];第二军医大学;2006年
4 朱飞舟;帕金森病相关基因LRRK2蛋白的抗体制备、神经解剖学分布及亚细胞定位[D];中南大学;2007年
5 田梅;晚期氧化蛋白产物单克隆抗体制备的实验及应用研究[D];第三军医大学;2009年
6 孙凤霞;三聚氰胺单克隆抗体制备及其高灵敏快速检测技术研究[D];江南大学;2011年
7 谢修志;高梁突变体har1的蓝光超敏感反应及光受体研究[D];华南师范大学;2004年
8 侯巍;H-FABP表达、单克隆抗体制备、测定方法建立及临床应用研究[D];吉林大学;2006年
9 时纪元;人工合成SHH蛋白N末端基因的Pichia酵母表达及其多克隆抗体制备[D];第二军医大学;2007年
10 李林;黑色素瘤抗原MAGE-A10基因克隆、表达和分布的研究[D];第四军医大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 叶中德;抗网状内皮增生症病毒的单克隆抗体制备、鉴定及临床应用[D];河南农业大学;2001年
2 吴永平;中国株J亚群禽白血病病毒全基因组序列的测定与分析[D];山东农业大学;2004年
3 胡英会;B组轮状病毒WH-2株vp7基因的原核表达及抗体的制备[D];华中师范大学;2007年
4 李国田;小麦条锈菌角质酶基因的克隆、表达及功能分析[D];西北农林科技大学;2008年
5 张云现;鸡传染性法氏囊病毒的分离鉴定及其免疫组化检测方法的建立[D];安徽农业大学;2008年
6 张健;人ndrg家族成员cDNA的克隆、表达及抗体制备[D];中国人民解放军第四军医大学;2003年
7 颜新敏;人表皮生长因子的克隆、表达及其表达产物的初步鉴定[D];扬州大学;2004年
8 王丽英;己烷雌酚抗体的制备与ELISA方法的建立[D];江南大学;2007年
9 聂宇;八肋游仆虫Rab家族基因的多样性及一种非典型Rab蛋白的功能分析[D];山西大学;2008年
10 贾如;细粒棘球蚴Eg95基因的克隆、原核表达及抗体制备[D];合肥工业大学;2009年
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