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分泌抗鸡新城疫病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用

巩霞  
【摘要】: 经一次差速离心分别提取鸡胚尿囊液中的F_(48)E_8和N-79株鸡新城疫病毒(NDV),获得纯化抗原。用该纯化抗原加弗氏佐剂免疫Balb/c小鼠,取免疫鼠脾细胞和NSO骨髓瘤细胞用聚乙二醇(PEG4000)作细胞融合,经有限稀释法克隆和亚克隆,获得1株能稳定分泌抗NDV特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为FG1。经鉴定该杂交瘤细胞的平均染色体数为93.7条,杂交瘤细胞上清和腹水单克隆抗体的ELISA效价分别为1:512和1:64000。经Western-blotting证明单抗FG1针对NDV分子量为63KD的HN蛋白,且具有血凝抑制活性。FG1杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体与鸡法氏囊病毒、鸡喉气管炎病毒、鸡支气管炎病毒,鸡减蛋综合征病毒,鸡流感病毒均不发生交叉反应,有良好特异性。连续传代20次,5个月内冻存、复苏3次,FG1杂交瘤细胞株仍能稳定分泌抗体。利用FG1杂交瘤细胞株的小鼠腹水单抗建立了单抗介导的、检测NDV的双抗体夹心ELISA。经测定,兔抗NDV高免血清的最佳包被浓度为1:1600,酶标单抗(HRP-McAb)的最佳工作浓度为1:200,其检测灵敏度为300ng/ml。所建立的双抗体夹心ELISA对NDV的检测是特异性的,与其它禽病病原不反应,能很好的对NDV进行定性检测,并具有较高的灵敏度。该方法尚需进一步研究、改进,并结合金标免疫层析做成试纸条,以用于生产实践中NDV的快速诊断。


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