收藏本站
《河南农业大学》 2003年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

伪狂犬病病毒gD、gE、TK基因的克隆与通用转移载体的构建

胡涛  
【摘要】: 参考GeneBank收录的伪狂犬病病毒gD、gE、TK基因的序列设计了三对引物,对PRV Min-A株进行了PCR扩增,扩增产物克隆于pGEM-T Easy载体。对重组质粒进行限制性内切酶分析和基因测序,证实了克隆片段的可靠性。阳性质粒分别命名为pGEM-gD、pGEM-gE、pGEM-TK。 基因测序的结果表明gD基因包含一个1203bp的开放性阅读框(ORF),编码400个氨基酸组成的多肽。将gD基因亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1-的hCMV启动子下游,构建了真核表达质粒pcDNA-gD,为下一步基因免疫奠定了基础。gE基因包含一个1740bp的开放性阅读框(ORF),编码579个氨基酸组成的多肽。同源性分析表明PRV Min-A株与PRV Ea株、SH株gE的核苷酸同源性分别为99.2%、98.7%;推导氨基酸的同源性分别为98.6%、97.2%。TK基因包含一个957bp的开放性阅读框(ORF),编码318个氨基酸组成的多肽。在TK ORF上游-22、-166、-199位存在3个GC框样序列,在终止密码子下游第110个核苷酸处的1306位存在有多聚腺苷加尾信号。PRV Min-A株与PRV Ea株、NIA-3株TK的核苷酸同源性分别为98.4%、97.9%;推导氨基酸的同源性分别为97.8%、97.2%。通过对α疱疹病毒TK氨基酸进行多序列比较,我们获得了在PRV TK氨基酸序列上的六个保守区间。推测这些保守氨基酸对于胸苷激酶(TK)结构的稳定性和催化活性的发挥是必需的。 将gD、gE基因连接于质粒pUC18获得pUgDgE,缺失质粒pUgDgE的BamHⅠ和BstEⅡ位点间391bp的片段。在此缺失位置插入来自质粒pcDNA3.1-的一 伪狂犬病病毒 gD、gE、Tk基因的克隆与通用转移载体的构建 段含 hCMV启动子。多克隆位点和 Neo报告基因的片段,构建了通用转移载体 PPD-M-PE。该转移载体缺失了伪狂犬病病毒 PI基因和 PE基因 ORF 5’端 363hP 的碱基,有 11个酶切位点可供外源基因的插入,上下游侧翼分别为 1.25kb 和 1.42kb。这为开发以伪狂犬病病毒为载体的多价基因工程疫苗提供了有力 工具。
【学位授予单位】:河南农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:S852.65

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 童光志,Dieter Burger,David T.Shen;牛疱疹病毒Ⅳ型(DN-599株)DNA的限制性酶切位点图及重复序列分析[J];病毒学报;1990年02期
2 李学伍,阎玉河,张改平,王自振,陈丽颖,杨艳艳,李春玲;河南省猪伪狂犬病的流行动态及防制研究[J];河南农业科学;2000年02期
3 赵海全,王秋华,白挨泉,甄辑铭;广东省部分地区伪狂犬病的血清学调查[J];农业科技通讯;2001年03期
4 徐葵,邱志明,汪晓英;DMSO对PCR扩增反应的影响[J];昆明医学院学报;2001年01期
5 袁建成,邱永敏,刘坤,董保俱,邱骏,聂武;猪伪狂犬与A型魏氏梭菌混合感染的诊治[J];湖北畜牧兽医;2000年05期
6 姜平,董永毅,许家荣,蔡宝祥,王立钧,倪兆朝;华东部分省市PRRS和猪伪狂犬病血清流行病学调查[J];畜牧与兽医;1999年06期
7 何家惠,侯继波,王继春,张敬友,徐筠遐,刘冬霞,诸长贵,王伟峰,刘跃兴,杨瑛;江苏省4种引致猪繁殖障碍的病毒病流行病学调查[J];畜牧与兽医;2000年04期
8 徐沈涛,沈秋姑,邹勇,吴国平,易道生,田虎;购进种猪引发猪伪狂犬病流行的调查报告[J];中国动物检疫;1999年03期
9 韩庆颜,高生智,魏润生,陈轶霞,史永年,舒展,董晓琴,杨小玲,杨瑞梅,何虎成;甘肃省集约化养猪场猪伪狂犬病的调查[J];中国动物检疫;2001年02期
10 李学伍,陈焕春,杨艳艳,周复春,方六荣,吴斌,怀济森;PCR法对伪狂犬病病猪不同部位的检测及敏感性试验[J];中国畜禽传染病;1998年06期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 连京华,秦卓明,黄波;鸡传染性支气管炎研究进展[J];山东农业科学;2000年01期
2 钱凤芹,刘长梅,任红梅,李爱芹,庄文忠;鸡新城疫病毒山东分离株F蛋白基因的克隆与鉴定[J];山东农业科学;2001年03期
3 东野传现;史玉颖;黄中利;刘玉山;亓丽红;傅剑;;“禽喘康颗粒冲剂”对鸡人工感染新城疫病毒临床效果的研究[J];山东农业科学;2007年02期
4 李子剑;李云龙;陈苏;艾武;宋敏训;李玉峰;;鸭肠炎病毒US2基因的序列测定与分析[J];山东农业科学;2008年03期
5 邹励丹;彭远义;彭涛;;鸡葡萄球菌病诊治一例[J];安徽农学通报;2007年17期
6 李祥辉;黄大鹏;黄玉兰;;鸡抗小鹅瘟病毒IgY提取方法的比较试验[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年23期
7 张小飞,潘孝成,汪秀娟,赵瑞宏,蒋书东;绩溪县浩寨兔病毒性出血症的诊断[J];安徽农业科学;2002年02期
8 沈咏舟,沈乐平,程建整;鸡传染性法氏囊病病毒冻干保护剂热稳定性研究[J];安徽农业科学;2004年01期
9 沈咏舟,沈乐平,程建整;鸡新城疫病毒耐热冻干保护剂的研究[J];安徽农业科学;2004年02期
10 赵坤,张慧辉,郭东升;猪繁殖和呼吸综合征组织灭活苗的研制[J];安徽农业科学;2005年07期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 庄金秋;梅建国;沈志强;;赤羽病病毒检测方法研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
2 庄金秋;梅建国;沈志强;;犬瘟热病毒实验室检测方法研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
3 庄金秋;梅建国;沈志强;;水貂细小病毒性肠炎实验室诊断方法研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
4 蒋再学;陈征兵;林文;余邵华;竺薇;张晓明;罗满林;;仔猪伪狂犬PCR鉴定及病毒分离[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
5 陈宗艳;朱英奇;李传峰;李露;付玉志;王超;刘光清;;新发鸭源呼肠孤病毒(TH11株)的分离与鉴定[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
6 王珊;刘冰;李德朋;孙远;马勇;田秀丽;宋宇;王承宇;张乃生;;马蹄香治疗犬细小病毒性肠炎的疗效观察[A];中国畜牧兽医学会家畜内科学分会第七届代表大会暨学术研讨会论文集(下册)[C];2011年
7 李雯;李晴云;刘岚;姜小雨;余春林;宋小燕;胡陈明;黄超;;禽流感(H5+H9)二价灭活疫苗对大恒优质肉鸡的免疫效果分析[A];安全优质的家禽生产——第十五次全国家禽学术讨论会论文集[C];2011年
8 程晶;荫硕焱;盖新娜;郭鑫;杨汉春;;2006—2008年我国部分地区规模化猪场PRV血清流行病学调查[A];微生物与人类健康科技论坛论文汇编[C];2009年
9 赵东升;盖新娜;孙栋;郭鑫;杨汉春;;猪脑心肌炎灭活疫苗的制备及小鼠免疫研究[A];微生物与人类健康科技论坛论文汇编[C];2009年
10 方忠意;崔保安;;动物基因工程疫苗研究进展[A];新型疫苗研发及基因工程疫苗应用研讨会论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 赵冬敏;B亚群禽白血病病毒分离株的生物学特性[D];山东农业大学;2010年
2 赵鹏;猪繁殖与呼吸综合征病毒在抗体选择压下的变异[D];山东农业大学;2010年
3 刘栋;畜禽补体C3d基因克隆及序列分析和重组鸡C3d免疫佐剂效果研究[D];山东农业大学;2010年
4 张青婵;A亚群禽白血病病毒不同分离株的基因组和生物学特性比较[D];山东农业大学;2010年
5 宋翠平;H5N1禽流感和鹅Ⅰ型副粘病毒分离株的生物学特性及感染性的研究[D];中国海洋大学;2010年
6 黄馨;端粒缩短影响原发性高血压及其并发症的发生[D];北京协和医学院;2010年
7 张琪;KLT对中脑神经系统疾病的影响及KLT、NDV、SW联合抗肿瘤作用机制研究[D];西北农林科技大学;2010年
8 熊义;IRES调控α-干扰素的抗FMDV研究[D];武汉大学;2009年
9 孙亚妮;免疫组织化学技术在鸡三种病毒性肿瘤病鉴别诊断中的应用[D];山东农业大学;2011年
10 邱玉玉;A亚群禽白血病病毒单克隆抗体的制备和不同亚群禽白血病病毒共感染相互影响的研究[D];山东农业大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 许媛媛;鸭瘟的动态病理学研究和鸭CD4的克隆[D];华中农业大学;2010年
2 李爽;鸭源禽呼肠孤病毒感染雏鸭的免疫病理学研究[D];华中农业大学;2010年
3 徐珊珊;重组杆状病毒介导的高致病性猪繁殖与呼吸综合征基因工程疫苗研究[D];华中农业大学;2010年
4 周才祥;鄂州市沼山蛋鸡养殖小区新城疫病的调查和防控[D];华中农业大学;2010年
5 胡智斌;湖北省高致病性猪蓝耳病活疫苗(JXA1-R株)试用报告[D];华中农业大学;2010年
6 许莹;H3N8型马流感血凝素核酸疫苗的初步研究[D];南京医科大学;2010年
7 邬成业;禽流感病毒H5N1亚型河南分离株NP基因的原核表达及T细胞表位筛选[D];郑州大学;2010年
8 史平玲;猪FcγRⅢ介导PRRSV抗体依赖增强作用研究[D];郑州大学;2010年
9 孟祥珍;潍坊地区猪“高热病”流行病学调查和防控[D];山东农业大学;2009年
10 王秀云;鸡传染性法氏囊病病毒山东株的分离鉴定及免疫预防研究[D];山东农业大学;2009年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 何存利,谢琴,陈祝三,史建斌;宁夏部分地区猪伪狂犬病血清学调查[J];甘肃畜牧兽医;1998年01期
2 盘宝进;近年来我国猪伪狂犬病的流行情况[J];广西畜牧兽医;1997年04期
3 罗函禄,吴建坤,潘乃珍,胡秀芳,唐余华;间接血凝试验检测死产猪伪狂犬病抗体的研究[J];江苏农业科学;1989年09期
4 王东,谢琴,何存利,陈祝三,余桂芳;宁夏猪细小病毒病的流行病学调查[J];宁夏农林科技;1994年05期
5 姜平,董永毅,许家荣,蔡宝祥,王立钧,倪兆朝;华东部分省市PRRS和猪伪狂犬病血清流行病学调查[J];畜牧与兽医;1999年06期
6 娄高明,杜伟贤;伪狂犬病流行概况及猪场防制策略[J];中国动物检疫;1999年05期
7 简中友,姜平,马志勇,蔡家利,蔡宝祥,张振兴;ELISA 检测猪繁殖呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体方法的建立及血清流行病学调查[J];中国动物检疫;1997年05期
8 何启盖,陈焕春,邱德新,吴斌,方六荣,黄冬生;乳胶凝集试验检测猪伪狂犬病血清抗体的研究[J];中国兽医科技;1999年01期
9 潘乃珍;胡秀芳;吴建坤;罗函禄;唐余华;;死胎猪血清中猪细小病毒、伪狂犬病病毒和乙型脑炎病毒抗体的检测[J];中国畜禽传染病;1990年04期
10 黄骏明,朱庆虎;猪伪狂犬病流行情况调查[J];中国畜禽传染病;1996年04期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 方六荣,陈焕春,肖少波,王革非,马相如;伪狂犬病病毒gG基因缺失通用转移载体的构建[J];华中农业大学学报;2001年04期
2 丁建华,王家富,罗满林,付烈振,郑友限,雷亮,张楚瑜;伪狂犬病病毒HS株tk基因的PCR扩增与克隆[J];中国兽医学报;1998年02期
3 钱平,李祥敏,陈焕春,肖少波,仇华吉,童光志;伪狂犬病病毒通用转移载体的构建及应用[J];中国预防兽医学报;2003年01期
4 方六荣,陈焕春,肖少波,马相如,王革非;伪狂犬病病毒gI/gE双缺失通用转移载体的构建与初步应用[J];中国兽医学报;2003年01期
5 仇华吉,周彦君,孔令达,张绍杰,钱平,王柳,童光志;伪狂犬病病毒Bartha-K61株TK基因的分离鉴定[J];中国兽医科技;2000年03期
6 周复春,陈焕春,方六荣,吴斌;伪狂犬病病毒鄂A株TK基因的克隆及其鉴定[J];中国兽医学报;1999年05期
7 王敏秀;苏鑫铭;于春梅;曹瑞兵;陈溥言;;插入单个loxP位点的伪狂犬病病毒上海株TK基因缺失株的构建[J];中国生物工程杂志;2006年10期
8 赵耘,李健强;伪狂犬病病毒单克隆抗体的中和与被动保护试验[J];细胞与分子免疫学杂志;1995年02期
9 毕研丽;郭广君;吕素芳;魏凤;沈志强;;基于Overlap PCR方法进行猪伪狂犬病毒TK基因缺失载体的构建、鉴定及生物学分析[J];中国动物检疫;2011年02期
10 韩静芳;陈瑞爱;邵定勇;唐满华;梁桂益;;伪狂犬病毒TK基因缺失通用转移载体的构建及初步应用[J];现代农业科技;2009年15期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 苏鑫铭;于春梅;王敏秀;曹瑞兵;周斌;陈溥言;;PrV上海株TK基因缺失株的构建及其生物学特性研究[A];第一届中国养猪生产和疾病控制技术大会——2005中国畜牧兽医学会学术年会论文集[C];2005年
2 韩先杰;王君伟;马波;;鸭瘟病毒TK基因的克隆及序列分析[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集[C];2005年
3 赵凤云;张玉静;涂长春;欧阳红生;张永亮;刘思国;刘伯华;;PCR方法克隆伪狂犬病病毒立即早期蛋白IE180激活型基因突变体[A];新世纪 新机遇 新挑战——知识创新和高新技术产业发展(上册)[C];2001年
4 胡勤芹;马相如;陈焕春;;伪狂犬病病毒的结构蛋白与功能[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(上)[C];2003年
5 崔保安;付元帅;张素梅;魏战勇;杨明凡;;金银花对伪狂犬病病毒体外抑制作用的实验研究[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集(上)[C];2003年
6 徐晓娟;徐高原;陈焕春;刘正飞;何启盖;;伪狂犬病病毒TK~-/gG~-缺失株的构建[A];中国畜牧兽医学会动物微生态学分会第三届第七次学术研讨会论文集[C];2004年
7 杨毅;李文刚;杨慧敏;吴高锋;饶宝;;猪伪狂犬病的诊断方法研究进展[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集(上册)[C];2009年
8 朱道中;吴红专;刘福安;贺东生;李惠颜;;鸡传染性喉气管炎病毒TK基因插入缺失株的安全性和免疫力试验[A];中国畜牧兽医学会禽病学会分会第十次学术研讨会论文集[C];2000年
9 黄爱芳;王林川;;鸽痘病毒TK基因的扩增、克隆及序列分析[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十一次学术研讨会论文集[C];2002年
10 李祥敏;钱平;金梅林;郭东春;徐卓菲;陈焕春;;口蹄疫病毒P1基因重组及伪狂犬病病毒TK~-/gG~-/PgG-P1的构建[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 王道坤;几类兽用新疫苗[N];中国畜牧兽医报;2006年
2 邢台市兽医院 邢兰君;仔猪伪狂犬病的诊治要点[N];河北农民报;2007年
3 记者 黄凤;想到对社会有所贡献就高兴[N];雅安日报;2007年
4 赵惠芹;猪高热病的预防和控制[N];中国畜牧兽医报;2006年
5 王道坤;当前养猪谨防几个热点病[N];中国畜牧兽医报;2006年
6 山西省临汾市瑶都区畜牧兽医局 杜青林刘延春;猪伪狂犬病的综合诊治方案[N];中国畜牧兽医报;2008年
7 本报记者;国外七种常见的猪病[N];山东科技报;2006年
8 周彬;严防高致病性猪蓝耳病[N];中国畜牧兽医报;2007年
9 ;吮吸仔猪的饲养管理(二)[N];湖北科技报;2006年
10 华北制药集团动物保健品有限责任公司 王红亮于国梅;猪无名高热综合征的防治措施[N];河北农民报;2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 徐高原;猪乙型脑炎与伪狂犬病二价基因工程疫苗研究[D];华中农业大学;2005年
2 姜焱;伪狂犬病病毒上海株gE~-/gI~-/GFP~+/LacZ~+缺失株的构建及其免疫原性初步研究[D];南京农业大学;2002年
3 范永刚;放射线诱导性自杀基因的构建及其体内外治疗肝癌的实验研究[D];南京医科大学;2003年
4 石谦;猪细小病毒-伪狂犬病重组病毒活疫苗SA215(B)的研究[D];四川农业大学;2005年
5 张焕容;伪狂犬病病毒、猪细小病毒和流行性乙型脑炎病毒检测基因芯片的构建及检测技术研究[D];四川农业大学;2005年
6 何启盖;猪伪狂犬病基因缺失疫苗研究[D];华中农业大学;2000年
7 阳爱国;伪狂犬病病毒主要毒力基因功能的研究[D];四川农业大学;2005年
8 詹立;藻毒素Microcystin-LR的体内及体外遗传毒性实验研究[D];四川大学;2004年
9 李自力;猪乙型脑炎与伪狂犬病二价基因工程疫苗研究[D];华中农业大学;2004年
10 田志军;表达PRRSV GP5蛋白的重组伪狂犬病毒的构建及其免疫效力的研究[D];东北农业大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 胡涛;伪狂犬病病毒gD、gE、TK基因的克隆与通用转移载体的构建[D];河南农业大学;2003年
2 田志军;伪狂犬病病毒gE/TK基因缺失突变株的构建[D];东北农业大学;2003年
3 刘红亮;伪狂犬病病毒河南株的分离鉴定与TK基因的克隆和序列分析[D];河南农业大学;2003年
4 隋秀文;十种药物抗伪狂犬病病毒感染的实验研究[D];东北农业大学;2010年
5 蒋鹤春;伪狂犬病病毒gE基因的表达及初步应用[D];南京农业大学;2002年
6 黄宝钦;猪伪狂犬病病毒FZJX株的分离鉴定及TK基因的克隆与序列分析[D];福建农林大学;2009年
7 张丽;共表达FMDV P1-2A、3C基因重组PRV TK~-转移载体的构建及表达[D];吉林大学;2007年
8 苏鑫铭;伪狂犬病病毒上海株TK基因缺失株的构建及其生物学特性初步研究[D];南京农业大学;2003年
9 王琳;伪狂犬病毒冀A株TK基因的克隆、序列分析及TK~—株转移载体的构建[D];河北农业大学;2007年
10 刘文强;伪狂犬病病毒La株的分离鉴定和囊膜糖蛋白E基因的克隆及序列分析[D];山东农业大学;2002年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026