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《河南农业大学》 2005年
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HMW-Glu(1Dx5、1Dy10)亚基基因在大肠杆菌中的融合表达

尹海燕  
【摘要】:研究表明:高分子量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)1Dx5+1Dy10是由染色体1D上两个紧密连锁的基因所控制,它们与面包烘烤品质有很大的关系。而利用转基因技术将HMW-GS1Dx5+1Dy10转入小麦栽培品种中以改良小麦加工品质是近年来的研究热点之一。但是,由于小麦基因表达的复杂性及人们对高分子量麦谷蛋白亚基(HMW-GS)1Dx5、1Dy10在面包加工过程中确切作用还了解不深,使得至今仍未能得到令人满意的结果。鉴于此,为了进一步了解sub5和sub10的结构及其在面包烘烤中的作用,本文对1Dx5、1Dy10基因分别在原核细胞中表达进行了研究。主要内容如下: 将麦谷蛋白亚基1Dx5和1Dy10分别克隆到表达载体pRSETA中,然后转化至大肠杆菌BL21(DE3)plysS菌株中。在T_7启动子控制下表达出融合蛋白,而其N端带有6xHis Tag标签有利于表达产物的分离纯化。IPTG诱导5小时后收获菌体,破碎、提取表达蛋白,并进行SDS-PAGE检测。为了提高目标蛋白的表达水平,进行了条件优化,诸如培养基、诱导时间和诱导剂量。麦谷蛋白亚基1Dx5和1Dy10最适条件分别是:在2YT培养基上1.0mmol.L~(-1)IPTG诱导5h和在SOB培养基上1.0mmol.L~(-1)IPTG诱导5h。SDS-PAGE分析表明:1Dx5和1Dy10重组蛋白分别占总可溶蛋白的16.3%和7.4%。
【学位授予单位】:河南农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S512.1

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【参考文献】
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