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《河南科技学院》 2010年
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间接免疫组化法检测人工感染CSISV在SPF雏鸡和肉仔鸡体内的分布

高均伟  
【摘要】: 用纯化的CSISV免疫日本大耳白兔,制备出了兔抗CSISV抗体,利用该抗体建立了检测组织中CSISV的间接免疫酶(HRP)组织化学方法。该方法的最佳条件为:用4%的中性多聚甲醛液固定组织,以多聚赖氨酸粘片剂,常规切出5μm切片,58℃烘烤5h左右,3%过氧化氢甲醇于室温下孵育切片30 min,0.01 mol/L pH6.0柠檬酸缓冲液微波修复20 min,5%白蛋白(BSA)室温湿盒内孵育30 min,一抗稀释度为1: 200,培育时间为37℃60min,酶标二抗(HRP)的工作浓度为l: 35,培育时间为37℃40min, DAB显色5min左右,苏木素染色3min左右。经交叉试验、吸收试验、替代试验和对照试验,表明该方法具有敏感性高,特异性好的优点。 运用建立的间接免疫组织化学方法(简称IIS方法),对人工感染CSISV SPF鸡和肉仔鸡的病毒分布进行了研究。结果表明,SPF鸡感染后3h时各脏器均呈阴性反应;感染后6h,最先从胸腺和腺胃中检测到CSISV阳性,感染后36h从腺胃、胸腺、法氏囊、肾、十二指肠、心脏、肝脏、肺脏、胰腺、脾脏、空肠中检测到阳性,感染后168h,各脏器均呈强阳性。感染后216h,腺胃、胸腺、法氏囊、肾、十二指肠阳性反应强度仍持续,其他脏器的阳性反应强度都有所下降。感染后720h,仍能从腺胃、胸腺、法氏囊、肾、十二指肠检测到CSISV阳性,但在感染后960h所有的组织都为CSISV阴性。在整个感染过程中,气管始终没有检测到CSISV阳性,其它组织都检测到有CSISV阳性,盲肠和直肠阳性细胞分布最少。从SPF鸡粪便的排毒情况来看,在感染后3h,就能从粪便中检测到病毒,感染后720h仍能从所取的粪便中检测到病毒核酸的存在,但感染后960h检测不到病毒。 人工感染的SPF鸡腺胃、胸腺、法氏囊、肾、十二指肠的CSISV阳性检出率最高,其中腺胃的平均检出率最高(达到86.36%),胸腺为84.09%,法氏囊为75%,肾脏为70.45%,十二指肠68.18%;肝脏、脾脏、空肠、肺脏、胰腺、回肠的平均检出率也较高(肝脏为52.27%,脾脏为52.27%,空肠54.55%,肺脏45.45%,胰腺45.45%,回肠43.18%);心脏的检出率相对较低(心脏为29.55%);盲肠和直肠检出率最低(盲肠为11.36%,直肠18.18%)。 CSIS病毒的靶细胞主要是:腺胃内的粘膜上皮细胞和浅层单管腺上皮细胞;胸腺内的胸腺淋巴细胞、巨噬细胞;法氏囊内的淋巴细胞;脾脏的淋巴细胞;肾脏内的肾小管上皮细胞、足细胞、毛细血管内皮细胞;十二指肠内的肠粘膜上皮杯状细胞、淋巴细胞、毛细血管内皮细胞;肝脏内肝血窦内皮细胞、肝细胞、枯否氏细胞;肺脏内的肺泡上皮细胞、尘细胞、毛细血管内皮细胞;心脏内的心肌细胞、毛细血管内皮细胞。上皮细胞和淋巴细胞为CSISV的主要靶细胞。 CSISV对腺胃、胸腺、法氏囊、肾、十二指肠的组织嗜性最强,表明该病毒的主要靶器官为这五种组织。 病毒在肉仔鸡分布规律总体上与SPF鸡表现一致,仅在品种和个体上有所差异。
【学位授予单位】:河南科技学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S858.31

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【参考文献】
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