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《河南中医药大学》 2016年
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温阳益气方对溃疡性结肠炎大鼠Treg细胞的免疫调节作用

代岩  
【摘要】:目的:观察温阳益气方对由三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇诱导的溃疡性结肠炎(UC)大鼠模型Treg细胞的影响,进而探讨温阳益气方治疗UC的作用机制和靶点。方法:经过TNBS/乙醇造模成功后,分为空白组、温阳益气(WYYQ)组、模型组、美沙拉嗪(MT)组。用灌胃的方式给药持续14天后,把大鼠处死并取标本。观察UC大鼠结肠粘膜组织的病理改变采用苏木精-伊红染色(HE)法。检测大鼠血清中IL-10的表达用酶联免疫吸附试验(ELISA);检测特异性转录因子Foxp3mRNA的基因水平用实时荧光定量PCR法。结果:1.与空白组相比,模型组大鼠出现神态萎靡、反应迟钝、弓背蜷缩、毛质稀松、活动极少、体温降低、便溏、进食不佳、体重减轻等一系列类似阳虚的表现。2.HE染色后电镜下病理切片结果示:与空白组相比,模型组大鼠的结肠粘膜水肿、充血、糜烂明显,腺体排列紊乱甚至断裂消失,炎细胞(中性粒细胞、淋巴细胞)浸润严重,粘膜上皮组织严重损伤,多处隐窝溃疡形成。病理组织评分模型组与空白组相比分值显著增高,且差异有统计学意义(P0.05);MT组和WYYQ组的分值与模型组相比显著降低,且差异有统计学意义(P0.05)。3.与空白组相比,大鼠血清中IL-10含量在模型组中浓度显著降低,且差异有统计学意义(P0.05);MT组和WYYQ组与模型组相比较,大鼠血清中IL-10的浓度含量显著增高,且差异有统计学意义(P0.05);MT组大鼠血清中IL-10的浓度含量较WYYQ组低,且差异有统计学意义(P0.05)。4.与空白组相比,模型组中Foxp3mRNA在大鼠结肠组织中的含量表达显著减少,且差异有统计学意义(P0.05);MT组和WYYQ组结肠组织中Foxp3 mRNA含量表达与模型组相比,水平显著增高,且差异有统计学意义(P0.05)结论:温阳益气方可通过增加血清中IL-10的含量,上调结肠组织中Foxp3的表达,增加机体Treg细胞含量,提高机体免疫力,从而有利于治疗UC。
【关键词】:温阳益气方 溃疡性结肠炎 Treg细胞 IL-10 Foxp3
【学位授予单位】:河南中医药大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:R259
【目录】:
  • 摘要7-8
  • Abstract8-10
  • 中英文缩略词表10-11
  • 前言11-13
  • 第一部分 实验部分13-22
  • 实验一 动物模型的制备13-15
  • 1 材料13
  • 1.1 动物和药物13
  • 1.2 主要试剂及仪器13
  • 2 方法13-14
  • 2.1 温阳益气方汤剂制备13
  • 2.2 TNBS/乙醇法造模13
  • 2.3 实验分组13-14
  • 2.4 给药方式14
  • 3 结果14-15
  • 3.1 造模结果14
  • 3.2 造模成功后标本采集14-15
  • 实验二 温阳益气方对UC大鼠模型结肠病理的影响15-17
  • 1 材料与方法15
  • 1.1 实验动物15
  • 1.2 主要试剂与仪器15
  • 1.3 造模15
  • 1.4 实验分组15
  • 1.5 给药方法15
  • 1.6 标本采集15
  • 2 实验方法15
  • 2.1 HE染色步骤15
  • 2.1.1 标本固定及切片15
  • 2.1.2 染色15
  • 3 病理观察15-16
  • 4 统计学方法16
  • 5 结果16-17
  • 实验三 温阳益气方对UC大鼠模型血清IL-10的影响17-19
  • 1 材料与方法17
  • 1.1 实验动物17
  • 1.2 主要试剂与仪器17
  • 1.3 造模17
  • 1.4 实验分组17
  • 1.5 给药方法17
  • 1.6 标本采集17
  • 2 实验方法17-18
  • 2.1 ELISA法测定IL-10的含量17-18
  • 2.1.1 方法及步骤17-18
  • 3 统计学方法18
  • 4 结果18-19
  • 实验四 温阳益气方对UC大鼠模型结肠组织中Foxp3mRNA的影响19-22
  • 1 材料与方法19
  • 1.1 实验动物19
  • 1.2 主要试剂与仪器19
  • 1.3 造模19
  • 1.4 实验分组19
  • 1.5 给药方法19
  • 1.6 标本采集19
  • 2 实验方法19-21
  • 2.1 引物设计19
  • 2.2 组织总RNA的提取19-20
  • 2.3 组织总RNA完整性的检测20
  • 2.4 组织RNA逆转录成CDNA20-21
  • 2.5 荧光定量PCR扩增21
  • 3 统计学处理21
  • 4 结果21-22
  • 讨论22-27
  • 1 造模方法22
  • 1.1 化学刺激法22
  • 1.2 免疫学法22
  • 1.3 基因法22
  • 1.4 复合法22
  • 2 UC发病的现代免疫学分析22-24
  • 2.1 IL-10与Foxp3的负向调节作用22-23
  • 2.2 Th17与Treg的关系23-24
  • 3 中医学对UC病因病机的认识24-25
  • 4 导师UC阳虚病机的探讨25
  • 5 温阳方中药物分析25-27
  • 第二部分 结论27-28
  • 致谢28-29
  • 参考文献29-33
  • 附录133-34
  • 附录234-42
  • 参考文献41-42

【参考文献】
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