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《河南中医药大学》 2016年
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积雪草颗粒对UUO大鼠肾组织ILK及其mRNA表达的影响

秦明哲  
【摘要】:目的:研究整合素连接激酶(Integrin Linked Kinase,ILK)在建立单侧输尿管梗阻(Unilateral Ureteral Obstruction, UUO)肾间质纤维化模型大鼠肾组织中的组织定位和表达,以及其在肾间质纤维化(Tubularinterstitial Fibrosis, TIF)中的作用,并进一步探讨积雪草对ILK及其mRNA表达的影响,明确积雪草缓解TIF的作用机制,为临床应用积雪草防治TIF提供理论依据。方法:采用结扎Sprague Dawley (SD)大鼠左侧输尿管的方法制备肾间质纤维化大鼠模型。将60只雄性SD大鼠随机分为假手术组、小剂量积雪草组(积小组)、中剂量积雪草组(积中组)、大剂量积雪草组(积大组)、福辛普利组(蒙诺组)、模型组,每组10只,除假手术组外均建立UUO大鼠模型。术后1天开始灌胃,各个药物治疗组每天以相应药物灌胃,模型组和假手术组以与药物治疗组等体积的生理盐水灌胃。UUO术后第14天处死所有大鼠,做如下检测:1,取腹主动脉血,检测血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCR)的变化。2,取梗阻侧肾脏组织做HE染色,观察梗阻侧肾脏肾小管损伤、变形、扩张,萎缩程度等;Masson染色评价肾间质纤维化的程度;免疫组化染色检测肾组织ILK的定位及表达情况。3,取梗阻侧肾脏组织,应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测组织ILK-mRNA的含量。结果:1,大鼠UUO术后情况:术后第2天模型组大鼠死亡一只,术后第4天积小组死亡一只,术后5天各组大鼠伤口逐渐愈合,建立UUO模型的各组大鼠活动度、毛发光泽较之假手术组有所下降。2,血生化指标比较:建立UUO模型的各组大鼠之间血生化指标比较差异无统计学意义(P0.05),各UUO组大鼠SCR、BUN结果均高于假手术组,差异有统计学意义(P0.05)。3,HE和Masson染色:假手术组无明显病理变化;UUO组大鼠组织染色显示肾小管明显扩张、变形,大量肾小管上皮细胞萎缩、脱落,肾间质细胞增生,胶原纤维渗出增多。建立UUO模型各组大鼠胶原渗出量大于假手术组(P0.05),各药物干预组胶原含量少于假手术组(P0.05),各积雪草组胶原含量变化呈剂量依赖模式,积大组含量最少(P0.05),蒙诺组检测结果小于积大组(P0.05)4,免疫组化检测肾脏ILK蛋白表达结果:ILK正常表达主要在肾小管上皮细胞的胞浆与胞核,肾小球血管内皮细胞少量表达,肾间质几乎不表达。建立UUO模型的各组大鼠ILK蛋白含量高于假手术组(P0.05);各药物干预组ILK蛋白含量低于模型组(P0.05);积小组与积中组ILK蛋白含量差异无统计学意义(P0.05);积大组和蒙诺组ILK蛋白含量小于积中组与积小组(P0.05);积大组与蒙诺组ILK蛋白含量差异无统计学意义(P0.05)。6, RT-PCR检测肾组织ILK-mRNA含量:建立UUO模型的各组大鼠肾组织ILK-mRNA含量均高于假手术组(P0.05),各药物干预组大鼠组织ILK-mRNA含量均低于模型组(P0.05),积小组与积大组ILK-mRNA含量大致相同(P0.05),积大组与蒙诺组ILK-mRNA含量大致相同(P0.05),积大组与蒙诺组ILK-mRNA含量均低于积小组与积中组(P0.05)结论:1,UUO大鼠肾组织ILK蛋白和ILK-mRNA水平较正常情况明显升高,可见ILK在TIF的过程中发挥重要作用。2,积雪草很可能通过调节ILK的表达,促进的细胞外基质(Extracellular Matrix, ECM)降解以缓解TIF,其作用呈明显剂量依赖关系,且大剂量组与福辛普利组疗效相当。3,积雪草无明显的肾毒性,应用安全。
【关键词】:积雪草颗粒 单侧输尿管梗阻大鼠 肾间质纤维化 整合素连接激酶
【学位授予单位】:河南中医药大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:R285.5
【目录】:
  • 摘要5-7
  • ABSTRACT7-9
  • 中英文缩略词表9-10
  • 前言10-12
  • 材料与方法12-19
  • 1. 实验材料12-13
  • 2. 实验方法13-19
  • 结果19-23
  • 1. 大鼠UUO术后一般情况19
  • 2. 肾组织HE染色与Masson染色结果分析19-20
  • 3. 各组大鼠肾组织ILK蛋白免疫组化分析20-21
  • 4. 各组肾组织ILK-mRNA含量分析结果21-22
  • 5. 大鼠生化指标的变化22-23
  • 讨论23-28
  • 1. 现代医学的研究肾纤维化的现状与存在问题23-25
  • 2. 中医药研究现状与存在问题25-26
  • 3. 动物模型的选择26-27
  • 4. 总结27-28
  • 结论28-29
  • 致谢29-30
  • 参考文献30-34
  • 附录34-41
  • 附录1 病理图片34-37
  • 附录2 文献综述37-41
  • 参考文献39-41

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