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《河南中医药大学》 2016年
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基于微透析等技术探讨恐伤孕鼠对其子代情志和认知发育的影响

万海娇  
【摘要】:目的采用旁观电击法制备孕期恐伤肾动物模型,从母鼠行为学得分、ACTH、GC的分泌情况等方面评价模型的制备。择不同日龄仔鼠进行行为学指标检测,以观察孕期恐伤肾对其仔鼠情志和认知发育的影响,并初步探究海马组织单胺类、氨基酸类神经递质与仔鼠情志和认知发育障碍的关联。方法80日龄SP F级雌鼠34只,体重220-250g;雄鼠25只,体重250-290g。运用水迷宫等方法确定动物的情志和认知水平,选取情志和认知在同—基线水平的雌鼠运用随机数字表法分为对照组、模型组,每组各15只,多余的雌鼠备用;选取15只情志和认知基线水平一致的雄鼠用于合笼,剩余的作为电击鼠用。于合笼笫一日开始采用旁观电击法进行造模,造模期间观察及检测的指标:(1)孕鼠每隔6日采用旷场实验、糖水偏好实验、悬尾实验等行为学方法对其心理应激状态进行评价;(2)孕16日时运用Morris水迷宫实验评价其空间学习和记忆能力; (3)孕20日时行目内眦静脉取血测定ACTH、GC的含量。孕鼠产仔后,每窝随机抽取5只仔鼠继续饲养,观察记录仔鼠情志和认知的发育情况: (1)一般发育情况,包括开眼、被毛、张耳等; (2)神经发育情况,包括感觉反射,听觉惊跳反射、四肢抓握反射等: (3)运用旷场实验、糖水偏好实验、悬尾实验、Morris水迷宫实验等行为学方法分别评价2 1、80日龄仔鼠情志与认知的发育情况,并将其与母鼠孕期行为学表现相关联; (4)运用微透析联合高效液相色谱电化学法检测21、80日龄仔鼠海马组织中单胺类、氨基酸类神经递质的含量,并分析其与仔鼠情志和认知发育情况的相关性。结果1.孕期恐伤肾模型制各: (1)旷场实验中,模型组孕鼠的垂直得分与水平得分均较对照组孕鼠低,清洁次数少,排便粒数多,差异有统计学意义(JF)0.05),清洁次数和粪便粒数的造模时间与刺激因素之间存在交互作用,而垂直得分与水平得分的造模时间与刺激因素之间均不存在交互作用; (2)糖水偏好实验,模型组孕鼠的糖水偏好值随着造模时间的推移不断降低,差异有统计学意义(P0.05);(3)悬尾实验中,随着造模时间的推移模型组孕鼠悬尾实验空中静止时间增多,差异有统计学意义(P0.05),孕鼠在空中静止的时间与刺激因素之间存在交互作用(P0.05);(4) Morris水迷宫实验中,模型组孕鼠的第1、2、3日平均逃避潜伏期均较对照组孕鼠延长,游泳速度缓慢,跨台次数少,20%边缘区域停留时间延长,差异有统计学意义(JP0.05); (5)模型组孕鼠的血浆ACTH、GC水平较对照组升高,差异有统计学意义(P0.05); (6)模型组孕鼠产仔数较对照组减少,差异有统计学意义(P0.05)。2.各组仔鼠一般发育情况及神经发育情况的比较:模型组仔鼠出牙、被毛、出现感觉反射、四肢放置反射、负向趋地性、步态反射的时间均较对照组仔鼠晚,差异有统计学意义(P0.05),而在张耳、开眼、翻身、出现听觉惊跳反射、四肢抓握反射方面无差异(P0.05)。3.不同日龄仔鼠行为学得分的比较: (1)旷场实验中,模型组21、80日龄仔鼠较对照组同日龄仔鼠垂直得分、水平得分低,差异有统计学意义(P0.05),而在大便粒数、清洁次数方面无差异(P0.05);(2)2 1、80日龄模型组仔鼠糖水消耗量、糖水偏好值均较对照组同日龄仔鼠减小,差异有统计学意义(P0.05);(3)21、80日龄模型组仔鼠悬尾实验空中停止挣扎的时间较对照组同日龄仔鼠长,差异有统计学意义(P0.05);(4)21、80日龄对照组仔鼠平均逃避潜伏期较同日龄模型组短,20%边缘区域停留时间短,游泳速度快,跨台次数多,差异有统计学意义(P0.05)。4.不同日龄仔鼠ACTH、GC的分泌情况:21、80日龄模型组仔鼠血浆中ACTH、GC水平均较对照组同日龄仔鼠升高明显,差异有统计学意义(P0.05)。5.不同日龄仔鼠海马区单胺类神经递质及其代谢产物含量的比较:(1)21日龄模型组仔鼠海马组织中L-DOPA、5-HT的水平各个灌流时间点均较对照组低,差异有统计‘学意义(P0.05),80日龄仔鼠之间无差异(P0.05);(2)21、80日龄模型组仔鼠海马组织中NE、EP、DOPAC、 DA、HVA的水平各个灌流时间点皆较对照组低,差异有统计学意义(JF)0.05)。6.不同日龄仔鼠海马区氨基酸类神经递质含量的比较: (1)21、80日龄模型组仔鼠海马组织中GLU、GLY的含量各个灌流时间点均较对照组高,GABA则相反,差异有统计学意义(P0.05);(2)21日龄模型组仔鼠海马组织中的ASP水平各个灌流时间点皆较照组高,差异有统计学意义(P0.05),而80日龄时此指标则无明显差异(P0.05)。7.相关性分析: (1)21、80日龄仔鼠的平均逃避潜伏期与母鼠平均逃避潜伏期、跨台次数存在正相关,与母鼠GC、ACTH的含量存在负相关关系,差异有统计学意义(P0.05); (2)21日龄仔鼠海马区单胺类神经递质及其代谢产物EP、DOPAC、DA、HVA、5-HT与其平均逃避潜伏期、跨台次数、垂直得分、水平得分、糖水偏好值存在正相关,与20%边缘区域停留时间、空中停止挣扎的时间存在负相关关系,差异有统计学意义(P0.05); (3)21日龄仔鼠海马区氨基酸类神经递质GLU、GLY与其平均逃避潜伏期、跨台次数、垂直得分、水平得分、糖水偏好值存在负相关,与其20%边缘区域停留时间、空中停止挣扎的时间存在正相关,差异有统计学意义(P0.05),而ASP与其相关关系则相反。结论1.运用旁观电击法制备的孕期恐伤肾模型在行为学、ACTH、GC等方面均表现出较高的应激状态,可以用于恐伤肾模型的制备2.孕期恐伤肾对其仔鼠情志和认知发育有影响;3.仔鼠海马组织中单胺类、氨基酸类神经递质的含量与其情志和认知发育关系密切
【学位授予单位】:河南中医药大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:R714.2

【参考文献】
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