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《河南中医药大学》 2016年
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灵芝多糖和三萜提取物体外免疫学评价

范苏玉  
【摘要】:目的:本课题以灵芝多糖和灵芝三萜提取物为研究对象,评价这两种有效组分对NK-92MI细胞和Jurkat细胞增殖、凋亡作用的影响,为益元康方中有效组分的进一步筛选奠定基础。方法:(1)按照筛选出的最佳工艺提取纯化灵芝多糖和灵芝三萜提取物,配制不同浓度的灵芝多糖与灵芝三萜提取物样品溶液,并测定其纯度。(2)NK-92MI细胞和Jurkat细胞生长曲线的测定方法采用四唑盐比色法(MTT法),筛选出有利于NK-92MI细胞和Jurkat细胞生长的种板浓度。(3)灵芝多糖和灵芝三萜提取物对NK-92MI细胞和Jurkat细胞的增殖作用采用MTT法,研究不同浓度的灵芝多糖和灵芝三萜提取物对NK-92MI细胞和Jurkat细胞的增殖作用影响。(4)灵芝多糖和灵芝三萜提取物对NK-92MI细胞和Jurkat细胞的凋亡作用采用Annexin V-FITC/PI双染法,利用流式细胞仪检测并用F low Jo软件进行分析,考察不同浓度的灵芝多糖和灵芝三萜提取物对NK-92M1细胞和Jurkat细胞凋亡的影响。结果:(1)灵芝多糖提取物的纯度为44.31%,灵芝三萜提取物纯度为40.44%。(2) NK-92MI细胞接种浓度为4×105~8×1 05/ml,Jurkat细胞接种浓度为2×105-4×105/ml时,比较有利于细胞的生长。(3)灵芝多糖提取物浓度为300μg/ml,对NK-92MI细胞作用12h时,NK-92MI细胞的增殖率最大,为20.594%,此条件下灵芝多糖提取物对NK-92MI细胞的增殖促进作用较好;浓度为400μg/ml,对Jurkat细胞作用24h时,Jurkat细胞的增殖率最大,为8.658%,此条件下灵芝多糖提取物对Jurkat细胞的增殖促进作用较好。灵芝三萜提取物浓度为1μg/ml,对NK-92MI细胞作用24h时,对Jurkat细胞作用1 2h时,细胞的增殖率最大,增殖率分别为24.023%和7.430%,此条件下灵芝三萜提取物对NK-92MI细胞和Jurkat细胞的增殖促进作用较好。(4)灵芝多糖提取物浓度为3001μg/ml,作用时间为12h时,对NK-92MI细胞的凋亡抑制率最大,为30.75%,故认为此条件下灵芝多糖提取物对NK-92MI细胞的凋亡抑制作用较好:浓度为400μg/ml,作用时间为12h时,对Jurkat细胞的凋亡抑制率最大,为13.01%,此条件下灵芝多糖提取物对Jurkat细胞的凋亡抑制作用较好。灵芝三萜提取物浓度为1μg/ml,作用时间为12h时,对NK-92MI细胞的凋亡率抑制率最大为53.36%,故认为此条件下灵芝三萜提取物对NK-92MI细胞的凋亡抑制作用较好;浓度为1μg/ml,作用时间为48h时,对Jurkat细胞的凋亡率抑制率最大,为18.45%,此条件下灵芝三萜提取物对Jurkat细胞的凋亡抑制作用较好。结论:(1)灵芝多糖和灵芝三萜提取物在一定浓度范围内能够促进NK-92MI细胞和Jurkat细胞的增殖作用。(2)灵芝多糖和三萜提取物在一定浓度范围内对NK-92MI细胞和Jurkat细胞的凋亡具有一定的抑制作用。
【关键词】:灵芝多糖和三萜提取物 NK-92MI细胞 Jurkat细胞 细胞增殖 细胞凋亡
【学位授予单位】:河南中医药大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:R285
【目录】:
  • 摘要7-9
  • Abstract9-11
  • 前言11-13
  • 第一章 灵芝多糖和灵芝三萜提取物样品溶液制备13-19
  • 1. 实验材料13
  • 1.1 实验仪器13
  • 1.2 实验试剂13
  • 2. 灵芝多糖提取物样品溶液制备13-16
  • 2.1 D-无水葡萄糖标准曲线的绘制13-14
  • 2.1.1 实验方法13-14
  • 2.1.2 实验结果14
  • 2.2 灵芝多糖提取物的提取与纯化14-15
  • 2.2.1 灵芝多糖提取物的提取工艺14
  • 2.2.2 灵芝多糖提取物的醇沉工艺14-15
  • 2.2.3 灵芝多糖提取物的纯化工艺15
  • 2.3 灵芝多糖提取物样品溶液配制15-16
  • 2.3.1 母液配制15
  • 2.3.2 含量测定15
  • 2.3.3 纯度计算15
  • 2.3.4 配制方法15-16
  • 3. 灵芝三萜提取物样品溶液制备16-19
  • 3.1 熊果酸标准曲线的绘制16-17
  • 3.1.1 实验方法16
  • 3.1.2 实验结果16-17
  • 3.2 灵芝三萜提取物的提取与纯化17
  • 3.2.1 灵芝三萜提取物的提取工艺17
  • 3.2.2 灵芝三萜提取物的纯化工艺17
  • 3.3 灵芝三萜提取物样品溶液配制17-19
  • 3.3.1 母液配制17
  • 3.3.2 含量测定17
  • 3.3.3 纯度计算17
  • 3.3.4 配制方法17-19
  • 第二章 NK-92MI细胞和Jurkat细胞生长曲线的测定19-27
  • 1. 实验材料19
  • 1.1 实验仪器19
  • 1.2 实验试剂19
  • 1.3 实验耗材19
  • 2. 细胞培养19-23
  • 2.1 试剂配制19-20
  • 2.2 细胞培养常规观察20
  • 2.3 细胞悬液的制备20
  • 2.4 细胞传代20
  • 2.5 细胞冻存20-21
  • 2.6 细胞复苏21-22
  • 2.7 细胞计数22-23
  • 3. 生长曲线的测定23-27
  • 3.1 实验方法23-24
  • 3.2 实验结果24-26
  • 3.3 小结26-27
  • 第三章 灵芝三萜和灵芝多糖提取物对NK-92MI细胞和Jurkat细胞的增殖作用27-39
  • 1. 实验材料27
  • 1.1 实验仪器27
  • 1.2 实验试剂27
  • 1.3 实验耗材27
  • 2. 灵芝三萜和灵芝多糖提取物对NK-92MI细胞增殖的作用27-33
  • 2.1 实验方法27-29
  • 2.2 实验结果29-32
  • 2.3 小结32-33
  • 3. 灵芝三萜和灵芝多糖提取物对Jurkat细胞增殖的作用33-39
  • 3.1 实验方法33
  • 3.2 实验结果33-36
  • 3.3 小结36-39
  • 第四章 灵芝三萜和灵芝多糖提取物对NK-92MI细胞和Jurkat细胞凋亡的影响39-47
  • 1 实验材料39
  • 1.1 实验仪器39
  • 1.2 实验试剂39
  • 1.3 实验耗材39
  • 2 灵芝三萜和灵芝多糖提取物对NK-92MI细胞凋亡的影响39-44
  • 2.1 实验方法39-41
  • 2.2 实验结果41-43
  • 2.3 小结43-44
  • 3 灵芝三萜和灵芝多糖提取物对Jurkat细胞凋亡的影响44-47
  • 3.1 实验方法44-45
  • 3.2 实验结果45-46
  • 3.3 小结46-47
  • 第五章 结果与讨论47-51
  • 1. 实验结果47
  • 2. 实验讨论47-51
  • 致谢51-53
  • 参考文献53-57
  • 附录1 附图57-63
  • 附录2 文献综述63-69
  • 参考文献66-69
  • 附录3 在校期间论文论著和科研情况69

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