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《新乡医学院》 2015年
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黄芪多糖影响巨噬细胞向脂肪细胞趋化的作用及机制研究

刘琼  
【摘要】:背景前期研究发现:黄芪多糖(Astragalus Polysaccharides, APS)能够减少脂肪组织中的巨噬细胞(adipose tissue macrophages, ATMs),改善胰岛素抵抗(insulin resistance, IR)和降低血糖水平。ATMs在脂肪组织的炎症反应中具有重要的作用。研究发现,随着IR的出现,促炎表达型巨噬细胞会随着ATMs数量增加而增加。巨噬细胞迁移到脂肪组织后,脂肪组织释放IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1等细胞因子,又正向调节使巨噬细胞释放更高水平的TNF-α、IL-6、IL-12。APS对脂肪细胞及巨噬细胞分泌炎性因子的影响,观察巨噬细胞向脂肪细胞趋化中的作用,又是通过何种机制减少ATMs,需要进一步探讨。目的通过黄芪多糖干预巨噬细胞和脂肪细胞,进一步揭示黄芪多糖阻止巨噬细胞向脂肪细胞趋化的作用位点及机制,为其应用于临床调节免疫提供理论基础。方法1.诱导分化细胞:脂肪细胞采用前脂肪细胞3T3-L1细胞株,巨噬细胞采用ANA-1细胞株。使3T3-L1前脂肪细胞接种于培养板,用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养在37。C、5%C02箱中培养;待细胞长满至80-90%,融合2天后,加含终浓度为0.5mmol/L IBMX、1 umol/L DEX和终浓度为10 ug/ml的胰岛素的10%胎牛血清高糖DMEM培养48h;48h后换含终浓度为10 ug/ml的胰岛素的10%胎牛血清高糖DMEM再培养48h,48h后再换10%胎牛血清高糖DMEM继续培养,2天后换培养液一次,诱导分化8至12天前脂肪细胞3T3-L1大于90%呈现复脂滴为脂肪细胞,用油红O染色鉴定后实验。2.本研究采用Transwell技术,实验分三组,每组三个复孔,第一组为空白对照组(NC);第二组为巨噬细胞加黄芪多糖组(AM);第三组为脂肪细胞加黄芪多糖组(AF)。将巨噬细胞种于Transwell上室内,将脂肪细胞种在下室内,采用孔径8μm的膜,上室中的巨噬细胞可穿过聚碳酸酯膜进入下室。前脂肪细胞3T3-L1诱导成为脂肪细胞后,将0.1g/L的APS分别加入脂肪细胞培养液和巨噬细胞培养液作为干预因素,空白对照组细胞培养液不加APS;48小时后取出小室,去除培养液,擦拭聚碳酸酯膜上面的巨噬细胞,4%的多聚甲醛室温固定30分钟后,结晶紫染色30分钟后,通过倒置显微镜计数上室底部细胞数量检测细胞趋化;再收集每组Transwell上下室中的培养液进行酶联免疫试剂法(ELISA)检测,检测其中IL-6、TNF-α细胞因子的表达。结果1.通过鸡尾酒方案成功诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,采用油红O染色进行鉴定。2. Transwell计数,NC组、AM组与AF组比较,AF组巨噬细胞趋化至下室的细胞数量显著低于NC和AM组,与AM组比较差异具有统计学意义(P0.05)。3. ELISA检测结果显示:①IL-6:NC组与AF组的下室比较,IL-6的浓度降低(P0.05);NC组与AF组的上室、NC组与AM组的上室、NC组与AM组的下室比较(P0.05)。②TNF-α:NC组与AF组的下室比较,TNF-α的浓度降低(P0.05);NC组与AF组的上室、NC组与AM组的上室、NC组与AM组的下室比较(P0.05)。结论APS作用靶细胞是脂肪细胞,减少巨噬细胞向脂肪细胞的趋化作用;APS可抑制脂肪细胞释放炎性因子TNF-α及IL-6,进而减少ATMs。
【学位授予单位】:新乡医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2015
【分类号】:R285

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