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《新乡医学院》 2018年
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Poly(I:C)对小鼠内脏脂肪组织中脂联素的分泌及其受体表达的抑制作用

杨灿  
【摘要】:背景病毒感染能够破坏小鼠脂肪组织的功能,从而导致代谢性疾病的发生。多聚肌苷-多聚胞苷酸[Polyinosinic polycytidylic acid,Poly(I:C)],是病毒双链RNA(doublestranded RNA,dsRNA)的类似物,可以激活模式识别受体(Pattern recognition receptors,PRRs)Toll样3受体(Toll-like receptor 3,TLR3),维甲酸诱导基因I(retinoic acid induced gene I,RIG-I)和黑色素瘤分化相关蛋白5(melanoma differentiation related proteins 5,MDA5),并且可以模拟病毒感染来诱导天然免疫反应。我们在前期研究中发现Poly(I:C)刺激影响了脂肪细胞的内分泌功能,然而Poly(I:C)刺激机体产生的免疫反应对小鼠脂肪组织功能的影响并没有深入研究。目的研究Poly(I:C)对小鼠脂肪组织脂联素及其受体表达的影响,观察小鼠脂肪代谢的变化,探讨Poly(I:C)影响脂代谢的可能机制。方法1.动物造模:随机选择体重相似,周龄为8周的C57BL/6雄性小鼠,通过腹腔注射的方式每克体重小鼠注射5μl的Poly(I:C)作为实验组,对照组小鼠每克体重腹腔注射5μl PBS缓冲液,隔天注射一次,共注射四次;2.体重、葡萄糖耐量检测:每日称量小鼠体重,用血糖仪检测葡萄糖耐量;3.实时定量聚合酶链反应(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR):检测脂肪组织炎性因子、模式识别受体、脂联素及其受体的表达变化;4.苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining,HE)及免疫组化染色:观察实验组与对照组小鼠脂肪组织形态的变化及组织中炎症因子TNF-α水平;5.酶联免疫吸附实验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA):检测血清脂联素和胰岛素的水平变化;6.蛋白质印迹实验(Western Blot):检测脂肪组织脂联素及其受体的蛋白表达水平。结果1.与对照组相比,实验组的小鼠体重从第三天开始减轻,血糖水平下降,胰岛素水平升高,第五天时基本恢复正常水平,第七天时血糖水平却高于对照组,呈紊乱状态,血清胰岛素水平明显降低;2.实验组的小鼠脂肪组织中出现大量的炎性细胞浸润,随注射天数增加,炎性细胞的浸润越来越多;3.与对照组相比,实验组的小鼠脂肪组织中炎性因子TNF-α和模式识别受体TLR3、RIG-I、MDA5表达水平升高,同时,免疫组化染色也显示脂肪组织中TNF-α增多;4.相比对照组,实验组的小鼠血清脂联素水平下降;脂肪组织中脂联素及其受体表达水平下降,但脂联素受体1蛋白表达水平却无变化。结论Poly(I:C)腹腔注射可以导致小鼠内脏脂肪组织产生炎症反应,小鼠体重减轻,血糖水平及血清胰岛素水平发生紊乱,同时促进内脏脂肪组织中TNF-α和模式识别受体的表达,Poly(I:C)能激活机体的固有免疫应答,抑制脂肪组织特异性脂肪因子脂联素及其受体的表达。
【学位授予单位】:新乡医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:R392

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